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公开(公告)号：CN113501746A
公开(公告)日：2021-10-15
申请号：CN202110682423.6
申请日：2021-06-21
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种大孔树脂在分离香叶醇中的应用及提取分离香叶醇的方法，所述大孔树脂为XAD4大孔树脂，利用大孔树脂从发酵液中提取分离香叶醇的方法，包括，在全细胞催化合成香叶醇的过程中，在发酵液中加入有机溶剂，离心，得到预处理液；将预处理的XAD4大孔树脂加入到预处理液中，吸附处理；将吸附了香叶醇的大孔树脂收集，加入到洗脱液中进行洗脱，得到香叶醇洗脱液；将洗脱液浓缩，干燥，得到香叶醇。本发明从全细胞催化的发酵液中提取纯化获得香叶醇，克服了发酵产物香叶醇原位提取分离的问题，同时具有工艺简单、操作简单、环境友好和纯化效率高等特点，获得的香叶醇纯度高，该方法适用于工业化生产。
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公开(公告)号：CN110904134B
公开(公告)日：2021-05-14
申请号：CN201911292338.8
申请日：2019-12-16
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明提供了一种表达芳樟醇合成酶的融合基因及其应用，涉及代谢工程菌技术领域，所述融合基因自5’端至3’端依次包括启动子‑核糖体结合位点RBS‑融合标签‑芳樟醇合成酶基因bLIS。本发明利用所述融合基因构建了多种不同的重组表达载体，并转化具有GPP合成能力的大肠杆菌，构建工程菌。经验证，所述融合基因、重组表达载体可显著提高芳樟醇合成酶的表达量和可溶性表达，将改造的重组表达载体转入具有GPP合成能力的大肠杆菌重组菌，可有效提高生产菌的芳樟醇产量，在芳樟醇的生物合成过程中具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN113528414A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110793222.3
申请日：2021-07-14
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种高产顺式‑冷杉醇的重组大肠杆菌、构建方法及其应用，所述高产顺式‑冷杉醇的重组大肠杆菌，能够同时表达激酶基因ScCK、MtIPK或SfPhoN、MtIPK以及萜类前体合成基因IDI、Erg20。本发明所述基因工程菌是通过代谢工程的方法对大肠杆菌中DMAPP合成相关基因进行调整，又在其基因组中进行敲除改造得到的。利用该菌株以戊烯醇为主要碳源时进行摇瓶发酵可在72h内累计达311.8mg/L，相比之前报道的传统MVA途径积累的最高值提高了1倍；该菌株在1.3L发酵罐发酵136h可积累顺式‑冷杉醇达1375.7mg/L，相比现有的顺式‑冷杉醇工业化菌株提高了1.2倍，说明该菌株具有工业化生产顺式‑冷杉醇的潜力。
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公开(公告)号：CN117004594A
公开(公告)日：2023-11-07
申请号：CN202310844231.X
申请日：2021-09-16
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及檀香烯合酶突变酶及其在合成檀香烯中的应用。具体涉及的突变酶SanSyn(S533A)、SanSyn(S533Q)、SanSyn(Q527A&S533A)，它们分别是将第533位的丝氨酸突变为丙氨酸、谷氨酰胺以及第527位的谷氨酰胺、533位的丝氨酸均突变为丙氨酸。以葡萄糖为碳源，在宿主大肠杆菌DH5α中合成α‑檀香烯的方法，主要包括构建重组质粒pETDuet‑SanSyn(S533A)、pETDuet‑SanSyn(S533Q)、pETDuet‑SanSyn(Q527A&S533A)、pMVA；构建大肠杆菌重组菌株，进一步发酵培养，本发明涉及的技术方案显著提高了α‑檀香烯的产量，蛋白可溶性表达也有所提高。为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产α‑檀香烯奠定了基础。对萜烯类合酶的改造工作提供参考。
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公开(公告)号：CN112812191A
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN202011628068.6
申请日：2020-12-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种提高酶可溶性表达的融合标签及其应用，具有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列中的任意一种。本发明涉及了一种普适性强的融合标签，通过在原始酶N末端连接融合标签可以有效提高原始酶的可溶性表达。所述的标签序列可应用于萜类合成酶类，大幅提高酶的可溶性表达，具有很好的普适性和应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113801868B
公开(公告)日：2023-07-28
申请号：CN202111085704.X
申请日：2021-09-16
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及檀香烯合酶突变酶及其在合成檀香烯中的应用。具体涉及的突变酶有SanSyn(Q527A)、SanSyn(S533A)、SanSyn(S533Q)、SanSyn(Q527A&S533A)，它们分别是将第527位的谷氨酰胺突变为丙氨酸，第533位的丝氨酸突变为丙氨酸、谷氨酰胺以及第527位的谷氨酰胺、533位的丝氨酸均突变为丙氨酸。以葡萄糖为碳源，在宿主大肠杆菌DH5α中合成α‑檀香烯的方法，主要包括构建重组质粒pETDuet‑SanSyn(Q527A)、pETDuet‑SanSyn(S533A)、pETDuet‑SanSyn(S533Q)、pETDuet‑SanSyn(Q527A&S533A)、pMVA；构建大肠杆菌重组菌株，进一步发酵培养，本发明涉及的技术方案显著提高了α‑檀香烯的产量，蛋白可溶性表达也有所提高。为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产α‑檀香烯奠定了基础。对萜烯类合酶的改造工作提供参考。
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公开(公告)号：CN113501746B
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202110682423.6
申请日：2021-06-21
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种大孔树脂在分离香叶醇中的应用及提取分离香叶醇的方法，所述大孔树脂为XAD4大孔树脂，利用大孔树脂从发酵液中提取分离香叶醇的方法，包括，在全细胞催化合成香叶醇的过程中，在发酵液中加入有机溶剂，离心，得到预处理液；将预处理的XAD4大孔树脂加入到预处理液中，吸附处理；将吸附了香叶醇的大孔树脂收集，加入到洗脱液中进行洗脱，得到香叶醇洗脱液；将洗脱液浓缩，干燥，得到香叶醇。本发明从全细胞催化的发酵液中提取纯化获得香叶醇，克服了发酵产物香叶醇原位提取分离的问题，同时具有工艺简单、操作简单、环境友好和纯化效率高等特点，获得的香叶醇纯度高，该方法适用于工业化生产。
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公开(公告)号：CN110904134A
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201911292338.8
申请日：2019-12-16
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明提供了一种表达芳樟醇合成酶的融合基因及其应用，涉及代谢工程菌技术领域，所述融合基因自5’端至3’端依次包括启动子-核糖体结合位点RBS-融合标签-芳樟醇合成酶基因bLIS。本发明利用所述融合基因构建了多种不同的重组表达载体，并转化具有GPP合成能力的大肠杆菌，构建工程菌。经验证，所述融合基因、重组表达载体可显著提高芳樟醇合成酶的表达量和可溶性表达，将改造的重组表达载体转入具有GPP合成能力的大肠杆菌重组菌，可有效提高生产菌的芳樟醇产量，在芳樟醇的生物合成过程中具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN117004594B
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202310844231.X
申请日：2021-09-16
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及檀香烯合酶突变酶及其在合成檀香烯中的应用。具体涉及的突变酶SanSyn(S533A)、SanSyn(S533Q)、SanSyn(Q527A&S533A)，它们分别是将第533位的丝氨酸突变为丙氨酸、谷氨酰胺以及第527位的谷氨酰胺、533位的丝氨酸均突变为丙氨酸。以葡萄糖为碳源，在宿主大肠杆菌DH5α中合成α‑檀香烯的方法，主要包括构建重组质粒pETDuet‑SanSyn(S533A)、pETDuet‑SanSyn(S533Q)、pETDuet‑SanSyn(Q527A&S533A)、pMVA；构建大肠杆菌重组菌株，进一步发酵培养，本发明涉及的技术方案显著提高了α‑檀香烯的产量，蛋白可溶性表达也有所提高。为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产α‑檀香烯奠定了基础。对萜烯类合酶的改造工作提供参考。
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公开(公告)号：CN112812191B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202011628068.6
申请日：2020-12-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种提高酶可溶性表达的融合标签及其应用，具有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列中的任意一种。本发明涉及了一种普适性强的融合标签，通过在原始酶N末端连接融合标签可以有效提高原始酶的可溶性表达。所述的标签序列可应用于萜类合成酶类，大幅提高酶的可溶性表达，具有很好的普适性和应用前景。
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