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公开(公告)号：CN102399796B
公开(公告)日：2013-04-17
申请号：CN201110350812.5
申请日：2011-11-09
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 巨大芽孢杆菌ALA2细胞色素P450酶基因及其重组质粒的构建及酶的纯化方法，该基因的核苷酸序列cypI如SEQIDNO.1所述。通过对大肠杆菌表达载体的选择和基因的定向改造，选择的pTrc99A载体使重组蛋白的表达量大为增加，比选用的pET20b载体的重组蛋白表达量增加了3.8倍，酶活达到770U/mL。将改造后的编码巨大芽孢杆菌ALA2细胞色素P450酶基因cypI插入pTrc99A，并转化大肠杆菌，其在大肠杆菌中表达的酶活较原始基因cyp提高了32%，酶活达到1020U/mL（图-2）。
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公开(公告)号：CN102399796A
公开(公告)日：2012-04-04
申请号：CN201110350812.5
申请日：2011-11-09
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 巨大芽孢杆菌ALA2细胞色素P450酶基因及其重组质粒的构建及酶的纯化方法，该基因的核苷酸序列cypI如SEQIDNO.1所述。通过对大肠杆菌表达载体的选择和基因的定向改造，选择的pTrc99A载体使重组蛋白的表达量大为增加，比选用的pET20b载体的重组蛋白表达量增加了3.8倍，酶活达到770U/mL。将改造后的编码巨大芽孢杆菌ALA2细胞色素P450酶基因cypI插入pTrc99A，并转化大肠杆菌，其在大肠杆菌中表达的酶活较原始基因cyp提高了32%，酶活达到1020U/mL（图-2）。
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公开(公告)号：CN109082417A
公开(公告)日：2018-12-25
申请号：CN201810840904.3
申请日：2018-07-27
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 突变修饰的巨大芽孢杆菌ALA2细胞色素P450酶及其制备方法和应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所述。通过对P450BM-3单加氧酶基因的定向改造，选择的3个突变点R966L/K972L/W1046H使重组蛋白对辅酶NADH利用效率大为增加，是原酶对辅酶NADH利用效率的2.4倍，酶活达到11415 U/mg。
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公开(公告)号：CN110229220A
公开(公告)日：2019-09-13
申请号：CN201910531405.0
申请日：2019-06-19
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明提供了一种基于纤维小体的毕赤酵母表面共展示系统及其构建方法和应用，属于分子生物学、食品以及基因工程技术领域。本发明所述系统包括锚定蛋白和多蛋白展示底架蛋白，所述锚定蛋白为酿酒酵母细胞壁蛋白Sed1p；所述多蛋白展示底架蛋白为梭菌纤维小体的人工迷你脚手架蛋白MixA2。本发明提供的基于纤维小体的毕赤酵母表面共展示系统能实现在细胞表面的多蛋白共展示；利用重组菌制备与对接模块(dockerin)融合表达的外源蛋白，不需要经过纯化，能直接通过重组蛋白上的对接模块(dockerin)和MixA2上的粘连模块(Cohesin)特异性结合，使多个蛋白展示在细胞表面，有效节约重组蛋白的制备成本。
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