公开(公告)号：CN117660448A

公开(公告)日：2024-03-08

申请号：CN202311484595.8

申请日：2023-11-09

申请人： 宜兴食品与生物技术研究院有限公司 ,  江南大学

发明人： 刘龙 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  朱学文 ,  黄子洋

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  G01N33/68 ,  C12Q1/10 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种产L‑色氨酸菌株的高通量筛选方法。本发明通过将产L‑色氨酸菌株的发酵液和M9培养基去培养一个指示菌株(指示菌株为含有表达质粒pSC101‑Ptac5‑7‑sfgfp的Escherichia coli BL21(DE3):ΔtrpR)，载体pSC101‑Ptac5‑7‑sfgfp上包含阻遏蛋白TrpR；该阻遏蛋白和两分子的L‑色氨酸结合，然后与杂合启动子Ptac5‑7上的trpO8序列结合，从而抑制下游基因的表达；绿色荧光基因sfgfp，用来产生荧光；以及杂合启动子Ptac5‑7用来表达sfgfp基因。本发明还设计并构建了一种响应L‑色氨酸的杂合启动子Ptac5‑7，在0～5g/L的L‑色氨酸浓度范围内，随着L‑色氨酸浓度的增加，该杂合启动子Ptac5‑7的表达强度逐渐减弱。

公开(公告)号：CN116121091B

公开(公告)日：2024-03-08

申请号：CN202211281300.2

申请日：2022-10-19

申请人： 江南大学

发明人： 刘龙 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  李江华 ,  刘延峰 ,  金柯

IPC分类号： C12N1/19 ,  C12N9/90 ,  C12N9/10 ,  C12N9/04 ,  C12N9/02 ,  C12N15/61 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12P33/00 ,  C12R1/865

公开(公告)号：CN116254242B

公开(公告)日：2024-01-30

申请号：CN202211652432.1

申请日：2022-12-21

申请人： 江南大学

发明人： 刘龙 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  李江华 ,  刘延峰 ,  柴猛

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12N15/77 ,  C12P13/24 ,  C12R1/15

摘要： 本发明公开了一种ATP磷酸核苷转移酶突变体及产L‑组氨酸的谷氨酸棒杆菌，突变体由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ATP磷酸核苷转移酶的第56位酪氨酸突变为甲硫氨酸，且第235位苏氨酸突变为脯氨酸得到，谷氨酸棒杆菌由该突变体解除反馈抑制、并结合代谢工程策略和能量工程改造得到。本发明结合L‑组氨酸合成限速酶的半理性改造，模块化代谢工程，以及能量供应工程提高L‑组氨酸的合成，摇瓶发酵L‑组氨酸的产量达到3.10g/L，解决了目前缺少食品安全菌株高效合成组氨酸的问题。(56)对比文件张悦.增强ATP供应提高大肠杆菌合成L-组氨酸.中国优秀硕士学位论文数据库（电子期刊）工程科技I辑.2021,(第08期),第1-85页.Kulis-Horn RK 等.基于消除谷氨酸棒杆菌三磷酸腺苷磷酸核糖基转移酶的反馈抑制策略用于L-组氨酸的生产.中国医药工业杂志.2015,第46卷第933页.Robert K. Kulis-Horn等.Corynebacterium glutamicum ATP-phosphoribosyl transferases suitable forL-histidine production - Strategies forthe elimination of feedbackinhibition.Journal of Biotechnology.2015,第206卷第26-37页.Yun Zhang等.Genetic and biochemicalcharacterization of Corynebacteriumglutamicum ATP phosphoribosyltransferaseand its three mutants resistant tofeedback inhibition byhistidine.Biochimie.2011,第94卷第829-838页.Meng Chai等.Combinatorial proteinengineering and matabollic engineeringfor efficient synthesis of L-histidine inCorynebacterium glutamicum.ACS Synth.Biol.2023,第12卷第1275-1286页.Minhye Kim等.Biosynthesis of L-histidine from marine biomass-derivedgalactans in metabolically engineeredCorynebacterium glutamicum.BioresourceTechnology.2023,第391卷第1-11页.Heyun Wu等.Highly efficientproduction of L-histidine from glucose bymetabolically engineered escherichiacoli.ACS Synth. Biol.2020,第09卷第1813-1822页.

公开(公告)号：CN113186143B

公开(公告)日：2024-01-30

申请号：CN202110400206.3

申请日：2021-04-14

申请人： 江南大学

发明人： 康振 ,  王阳 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  王道安

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P17/12 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种产四氢嘧啶工程菌株的构建及优化的方法，属于生物工程技术领域。本发明提供了能够在低盐条件下生产四氢嘧啶的大肠杆菌工程菌ECT‑LA，该菌以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)为基础，包含由T7启动子控制的四氢C932T嘧啶合成基因簇ectABC及外源基因lysC 和asd，并优化了四氢嘧啶的制备方法。本发明构建的重组大肠杆菌以葡萄糖为底物，分批补料发酵56h后，四氢嘧啶产量可达60g/L。

公开(公告)号：CN116751799B

公开(公告)日：2024-01-26

申请号：CN202310702843.5

申请日：2023-06-14

申请人： 江南大学

发明人： 刘龙 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  李江华 ,  刘延峰 ,  武耀康 ,  李洋

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/75 ,  C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12N9/22 ,  C12N9/78 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19 ,  C12R1/125

摘要： 辑，可以在单个crRNA阵列的引导下对基因组上本发明公开了一种多位点双重碱基编辑器 多个位点同时进行编辑。及其应用，属于生物技术领域。首先，利用构建的单质粒编辑器骨架，通过胞嘧啶脱氨酶、UGI、腺嘌呤脱氨酶与dCas12a构成的融合蛋白的组成与结构优化，实现了单个crRNA阵列引导下多个位点的双重编辑；在此基础上，通过启动子替换、crRNA阵列中的人工间隔序列的引入与优化以及DR基序的改造，进一步提高了多位点编辑的效率；最后，通过多抗性菌株生成、核黄素合成菌株的从头产生以及表面活性素合成菌株的产量提升，验证了该多位点双重碱基编辑器的功能。本

公开(公告)号：CN117143944A

公开(公告)日：2023-12-01

申请号：CN202311088855.X

申请日：2023-08-25

申请人： 江南大学

发明人： 康振 ,  胥睿睿 ,  王阳 ,  孙晓源 ,  堵国成 ,  李江华 ,  陈坚

IPC分类号： C12P19/40 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/55 ,  C12P19/32 ,  C12P11/00 ,  C12P19/26 ,  C12P17/06 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种基于聚磷酸激酶构建体内ATP和PAPS再生系统的方法，属于生物技术领域。本发明通过表达不同来源的聚磷酸激酶，提供体外添加磷酸供体polyPn，重新磷酸化ADP和AMP合成ATP，实现了体内ATP再生，并通过控制质粒的拷贝数，成功实现了体内不同强度ATP再生系统的构建。基于此，通过转入PAPS合成和再生模块，优化硫酸转运体系和弱化PAPS降解途径，成功构建出PAPS再生系统，并应用于大叶藻酸的合成，转化率达到91％。

公开(公告)号：CN114561311B

公开(公告)日：2023-10-27

申请号：CN202210313654.4

申请日：2022-03-28

申请人： 江南大学

发明人： 刘龙 ,  石训 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  石聚领 ,  堵国成 ,  李江华 ,  刘延峰 ,  刘家恒 ,  金柯

IPC分类号： C12N1/19 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12P23/00 ,  C12R1/865

摘要： 本发明公开了一种胞外转运视黄醛和视黄醇的酿酒酵母菌株构建及其应用，属于发酵工程技术领域。本发明构建了一株强化视黄醛和视黄醇分泌能力的重组酿酒酵母菌株，所述重组酿酒酵母强化表达了3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶、异戊烯基焦磷酸异构酶、法尼基焦磷酸合酶、内质网大小调节因子INO2和ABC转运蛋白Pdr10；异源表达香叶基香叶基二磷酸合酶、八氢番茄红素脱氢酶、15‑顺式八氢番茄红素合酶、双功能番茄红素环化酶/八氢番茄红素合酶、15、15’‑加双氧酶；敲除酿酒酵母中的ROX1和GAL80基因；并且下调角鲨烯合酶ERG9的表达；对其进行摇瓶发酵时，该菌株胞外视黄醛、视黄醇含量分别达到43.50mg/L和16.84mg/L，视黄醛和视黄醇总含量为73.40mg/L，因此具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN114317473B

公开(公告)日：2023-08-29

申请号：CN202011588017.5

申请日：2020-12-29

申请人： 江南大学

发明人： 刘松 ,  王兴隆 ,  杜建辉 ,  周景文 ,  陈坚 ,  堵国成

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  A23C9/12 ,  A23C19/032 ,  A23C19/06 ,  A23G9/36 ,  A23L11/00 ,  A23L13/40 ,  A23L13/74 ,  A23L17/00 ,  A23L27/60

摘要： 本发明公开了一种催化活性和热稳定性提高的谷氨酰胺转氨酶变体，属于生物领域和食品领域。本发明的谷氨酰胺转氨酶变体为热稳定性改善的酶，包含对应于SEQ ID NO.1所示的多肽的第287位的取代。本发明的谷氨酰胺转氨酶变体可以在食品处理、加工和转化等方面进行应用，可以用于保持或改善食品的品质、稠度、弹性、水分或粘度。热稳定性改善的谷氨酰胺转氨酶变体更利于其在严苛的工业环境中稳定应用，如人造肉肉糜加工及肉丸加工。

公开(公告)号：CN113684141B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202110926222.6

申请日：2021-08-12

申请人： 江南大学

发明人： 刘龙 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  李江华 ,  刘延峰 ,  刘家恒 ,  金柯

IPC分类号： C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/53 ,  C12N15/61 ,  C12N15/54 ,  C12N15/31 ,  C12P5/02 ,  C12R1/865

摘要： 本发明公开了一种胞外转运维生素D3前体角鲨烯的酿酒酵母菌株构建及其应用，属于发酵工程技术领域。本发明首先构建了一株高产角鲨烯的重组酿酒酵母菌株Z1O3，所述重组酿酒酵母强化表达了3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶、异戊烯基焦磷酸异构酶、法尼基焦磷酸合酶、内质网大小调节因子的相关基因INO2、Pdr5蛋白和Osh3蛋白；并且敲除了ROX1基因；对其进行摇瓶发酵时，该菌株胞外十二烷中角鲨烯含量达到893.58mg/L；而在发酵罐中培养，该菌株胞外十二烷中角鲨烯含量可达到6995.81mg/L，由本发明构建的重组菌株不仅具有角鲨烯胞外转运能力，且具有更强的角鲨烯生产性能，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN112501115B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202011499864.4

申请日：2020-12-17

申请人： 江南大学

发明人： 陈坚 ,  周景文 ,  李妹 ,  雷庆子 ,  关欣 ,  余世琴 ,  堵国成

IPC分类号： C12N5/077

摘要： 本发明公开了一种兔肌肉干细胞的提取分离及纯化方法，属于生物技术领域。本发明的分离纯化方法包括取得无菌的肌肉组织，高效率的消化肌肉组织以得到大量的肌肉单核细胞以及通过percoll梯度纯化获得高纯度的兔肌肉干细胞。应用本发明的纯化方法，可以稳定的获得纯度超过90％(以CD56染色为阳性计)的兔肌肉干细胞。应用本发明的方法，为兔的肌肉干细胞的培养提供了有效的分离提取方法。