亲和层析柱纯化凝血酶调节蛋白的方法

    公开(公告)号:CN112375133A

    公开(公告)日:2021-02-19

    申请号:CN202010986082.7

    申请日:2020-09-18

    Abstract: 本发明公开了一种亲和层析柱纯化凝血酶调节蛋白的方法。该亲和层析柱纯化凝血酶调节蛋白的方法,亲和层析柱配基为凝血酶,包括如下步骤:样品前处理,将含有凝血酶调节蛋白的溶液放入到透析袋袋中进行透析,充分透析后透析袋内的液体为上样液;上样及平衡液冲洗,将上样液上样亲和层析柱,然后平衡液平衡亲和层析柱;冲洗液冲洗,平衡液平衡后采用冲洗液对亲和层析柱进行冲洗;洗脱液洗脱,冲洗液冲洗后采用洗脱液对亲和层析柱进行洗脱,并收集洗脱峰;将收集的洗脱峰进行超滤浓缩,得到凝血酶调节蛋白精制品。本发明的方法,能够大批量的纯化凝血酶调节蛋白,收率较高,纯度较高。

    规模化生产凝血酶调节蛋白的方法

    公开(公告)号:CN112266415A

    公开(公告)日:2021-01-26

    申请号:CN202011191131.4

    申请日:2020-10-30

    Abstract: 本发明公开了一种规模化生产凝血酶调节蛋白的方法。该规模化生产凝血酶调节蛋白的方法包括将凝血酶调节蛋白粗制品经过阴离子交换层析柱、亲和层析柱A、复合型亲和层析柱B、凝血酶亲和层析柱和疏水层析柱层析,收集洗脱峰,超滤浓缩得到凝血酶调节蛋白精制品。本发明以凝血酶调节蛋白粗制品为原料,筛选多种商品化的生产型亲和层析柱、疏水层析柱等进行条件优化,确定对目标蛋白有纯化效果、操作简便、易于放大的层析填料,最终确定一种规模化生产凝血酶调节蛋白的方法,提高纯化倍数,有利于凝血酶调节蛋白精制品的规模化生产。

    凝血酶的亲和色谱柱、制备方法及应用

    公开(公告)号:CN112114069B

    公开(公告)日:2023-05-16

    申请号:CN202010984484.3

    申请日:2020-09-18

    Abstract: 本发明公开了一种凝血酶的亲和色谱柱。该凝血酶的亲和色谱柱填料为琼脂糖‑凝血酶偶联复合物,琼脂糖‑凝血酶偶联复合物通过湿法装柱获得亲和色谱柱。凝血酶的亲和色谱柱的制备方法,将购买的凝血酶冻干粉溶解后除去冻干保护剂;取CNBr活化的琼脂糖凝胶Focurose 4FF用水洗涤;偶联得到琼脂糖‑凝血酶偶联复合物;封闭所有残留的活性基团;除去未偶联上的多余的配体;凝血酶去活处理,轻柔震荡后使用纯水冲洗,制得凝血酶亲和填料;采用湿法装柱,冰箱4℃保存。本发明以凝血酶为原料与CNBr活化的琼脂糖凝胶Focurose 4FF偶联制备凝血酶亲和色谱柱。此偶联反应简单易控,反应条件温和,操作方便,同时可重复性高,易于工业放大。另外本发明的亲和柱可重复使用多次。

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