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公开(公告)号：CN116676286A
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202310494882.0
申请日：2023-04-26
申请人： 齐鲁工业大学(山东省科学院)
摘要： 本发明提供了一种7α‑HSDH酶突变体和7β‑HSDH酶突变体及其编码基因和应用，通过人工突变筛选出具有特定氨基酸序列的7α‑HSDH酶突变体和7β‑HSDH酶突变体，相比于野生型7α‑HSDH和野生型7β‑HSDH提高了酶活性和催化效率；本发明同时提供了一种利用上述7α‑HSDH酶突变体和7β‑HSDH酶突变体制备熊去氧胆酸的方法，即采用NADP+依赖型的7α‑HSDH酶突变体和NADPH依赖型的7β‑HSDH酶突变体一锅法催化鹅去氧胆酸生成熊去氧胆酸，制备方法简单，产物的转化率高，且可以实现辅酶NADP+/NADPH的自循环再生，无需添加用于辅酶再生的辅助酶及辅助原料，极大地降低了生产成本和环保压力，具有巨大的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN116445435A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310064553.2
申请日：2023-01-17
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N9/04 , C07K19/00 , C12N15/53 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P33/00 , C12P33/02 , C12P33/06 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了一种融合表达催化生产熊去氧胆酸的方法及应用，属于酶工程和生物催化技术领域。本发明通过linker连接7β‑羟基类固醇脱氢酶和7α‑羟基类固醇脱氢酶两个基因，构建融合蛋白7α‑HSDH‑Linker‑7β‑HSDH，并将构建的融合蛋白用于熊去氧胆酸的催化生产工艺，为酶法催化生产熊去氧胆酸的工艺提供了一种新的选择方向，同时对其催化生产熊去氧胆酸的工艺进行了系统优化，显著提高了熊去氧胆酸的转化效率。
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公开(公告)号：CN116445434A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202211649390.6
申请日：2022-12-21
申请人： 中山百灵生物技术股份有限公司
IPC分类号： C12N9/04 , C12N15/53 , C12N15/70 , C12N15/81 , C12N15/76 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N1/19 , C12P33/02 , C12R1/19 , C12R1/84 , C12R1/465 , C12R1/125
摘要： 本发明公开了一种催化活性提高的12α‑HSDH酶突变体及其用途，属于生物酶工程技术领域。本发明通过采用蛋白结构模拟技术、定点饱和突变以及Rosetta辅助对一种来源于梭菌属Clostridium sp.AF15‑17LB的辅酶NADP依赖型12α‑羟基类固醇脱氢酶进行定向突变改造，筛选得到活性显著提高的12α‑HSDH突变体，相较野生型单位酶活提高1.5倍，底物转化、生成率更好，对于提高12‑羰基鹅去氧胆酸的生产效率，对鹅去氧胆酸乃至熊去氧胆酸实现大量化生产具有重要意义。
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公开(公告)号：CN114317372B
公开(公告)日：2023-06-16
申请号：CN202210036103.8
申请日：2022-01-12
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明属于微生物甾体转化技术领域，具体涉及一株尿酸氧化节杆菌菌株及其在C1，2位脱氢上的应用。所述尿酸氧化节杆菌株，具体为尿酸氧化节杆菌(Arthrobacter uratoxydans)AAR‑47，保藏编号：CGMCC No.23650。尿酸氧化节杆菌AAR‑47是经物理诱变所得，诱变后菌株以醋酸氢化可的松为底物，投加浓度10‑60g/L下，发酵30‑96h，底物转化率可达90.81‑100％，诱变后菌株以氢化可的松为底物，浓度为5‑40g/L下，发酵转化60‑96h，底物转化率可达到90.56‑94.58％。
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公开(公告)号：CN116240183A
公开(公告)日：2023-06-09
申请号：CN202310014700.5
申请日：2023-01-05
申请人： 湖南新合新生物医药有限公司
摘要： 本发明属于甾体药物生物催化合成技术领域，具体涉及一种脱氢酶、基因、工程菌及应用，所述脱氢酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2，采用本发明的脱氢酶，脱氢活性较高，立体选择性和区域选择性强，无其他构象杂质生成；构建的工程菌，可以高效的分泌上述脱氢酶，有效的提高了底物的转化效率，特别是对于底物6‑甲格式物(11β,17α‑二羟基‑6α‑甲基孕甾‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮)，成本低廉，工业化潜力显著；本发明的脱氢酶突变体理化性质明确，通过全细胞催化的方法，省去了酶纯化的繁琐步骤，降低成本、操作简便。
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公开(公告)号：CN116200352A
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202211637423.5
申请日：2022-12-16
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了7α‑羟基类固醇脱氢酶突变体及其在7‑氧代‑石胆酸合成中的应用，属于基因工程和生物催化技术领域。本发明通过将Brucella melitensis 7α‑羟基类固醇脱氢酶(Bm7α‑HSDH)口袋特定的氨基酸实施定点突变，并组合了部分优势突变，获得了热稳定性和催化效率均得到显著提升的突变体。在催化底物鹅去氧胆酸合成7‑氧代‑石胆酸的反应中，突变体酶活力最多提高约45倍，催化效率提高约122倍，Tm值最大可提升约12℃，为生物法催化合成熊去氧胆酸提供了优质的生物酶和前体化合物，为实现其工业化生产奠定了坚实的研究基础。
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公开(公告)号：CN115011626B
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202210730036.X
申请日：2022-06-24
申请人： 中国科学院上海高等研究院
IPC分类号： C12N15/74 , C12N15/53 , C12N15/60 , C12N1/21 , C12N9/02 , C12N9/04 , C12N9/88 , C12P33/02 , C12P33/06 , C12P33/00 , C07J5/00 , C12R1/32
摘要： 本发明公开了一种产甾药前体的基因工程菌和用途。基因的缺失在调控分枝杆菌产甾药前体的产量或改造产甾药前体的分枝杆菌中的用途，所述基因包括编码烯酰辅酶A水合酶的基因和/或3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的基因。本发明3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶和烯酰辅酶A水合酶在分枝杆菌转化甾醇过程中具有重要的调控作用。同时本发明还构建了一种产甾药前体的基因工程菌，将基因工程菌接种到以甾醇为底物的培养基中发酵，能得到纯度高、产量高的甾药前体9‑OH‑PDCE，其能作为原料合成氢化可的松、地塞米松和倍他米松等甾体药物，因此在工业上具有潜在而广泛的应用价值。
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公开(公告)号：CN113717860B
公开(公告)日：2023-05-16
申请号：CN202110770076.2
申请日：2021-07-07
申请人： 昆明理工大学
摘要： 本发明公开黄篮状菌在三七总皂苷转化为小极性人参皂苷中的应用，黄篮状菌菌株分离自新鲜三七根部土壤，具有转化三七总皂苷中5种皂苷单体混合物为小极性人参皂苷的活性，转化产物丰富，包含10种稀有小极性人参皂苷；黄篮状菌发酵工艺简单，室温、持续通氧培养即可，具有广阔的工业化应用前景；对比底物以及产物化学结构发现，该株黄篮状菌酶体系同时兼具水解原人参二醇和三醇型皂苷C‑20位上葡萄糖基、生成20(R/S)‑人参皂苷立体异构体、氧化C‑20位羟基生成(20,21)型和(20,22)型双键3种活性，这一特性在具有人参皂苷转化活性的天然真菌中也是首次发现。
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公开(公告)号：CN110643667B
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN201910982406.7
申请日：2019-10-16
申请人： 湖南新合新生物医药有限公司
摘要： 本发明涉及甾体类药物中间体的生产方法，具体涉及一种甲睾酮C1,2位的生物脱氢方法。本发明以甲睾酮为底物，以简单诺卡氏菌菌液为酶源，同时将大豆油100‑200ml/L和吐温‑80 0.1‑2g/L加入转化体系中，于29‑31℃下进行转化反应，反应完全，反应物经分离纯化得到脱氢甲睾酮。本发明在采用普通直接转化法的基础上，通过加入大豆油和吐温‑80，可以大幅度提高转化率，转化率可达到99％以上；同时产物的降解率可降低至，反应专一性强，转化时间相对较快，产品质量高；并且无需无菌环境，常规室外操作即可，操作简单，适合工业化大批量生产。
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公开(公告)号：CN115786133A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211228897.4
申请日：2022-10-08
申请人： 北京理工大学
摘要： 本发明一株热焦曲霉菌株CLH‑22及其用途、发酵剂和制备3‑氧代甘草次酸的方法，属于微生物与生物技术领域。本发明提供一株热焦曲霉(Aspergillus calidoustus)菌株CLH‑22，其保藏编号为：CGMCC No.40213。本发明还提供该菌株CLH‑22在制备3‑氧代甘草次酸方面的用途以及基于该菌株的发酵剂和制备3‑氧代甘草次酸的方法。本发明的菌株CLH‑22，具有底物特异性强，转化效率高，无副产物生成的特点，在常规条件下制备3‑O‑GA产率为94.6％，为目前最高水平。本发明填补了国内3‑O‑GA产品的生产空缺，为制备3‑O‑GA提供了一种简单有效的方法。
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