本发明属于甾体药物生物催化合成技术领域，具体涉及一种脱氢酶、基因、工程菌及应用，所述脱氢酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2，采用本发明的脱氢酶，脱氢活性较高，立体选择性和区域选择性强，无其他构象杂质生成；构建的工程菌，可以高效的分泌上述脱氢酶，有效的提高了底物的转化效率，特别是对于底物6‑甲格式物(11β,17α‑二羟基‑6α‑甲基孕甾‑1,4‑二烯‑3,20‑二酮)，成本低廉，工业化潜力显著；本发明的脱氢酶突变体理化性质明确，通过全细胞催化的方法，省去了酶纯化的繁琐步骤，降低成本、操作简便。