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    一种阿魏酸酯酶及其制备方法和应用
    12.
    发明公开
    一种阿魏酸酯酶及其制备方法和应用 有权

    公开(公告)号：CN109652392A

    公开(公告)日：2019-04-19

    申请号：CN201910127543.2

    申请日：2019-02-20

    申请人： 南京农业大学

    发明人： 辛志宏 ,  南放 ,  吴盛露 ,  邱佳容 ,  姜俊伟

    IPC分类号： C12N9/18 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

    CPC分类号： C12N9/18 ,  C12Y301/01073

    摘要： 本发明提供了一种阿魏酸酯酶及其制备方法和应用，该来源于土壤宏基因文库的阿魏酸酯酶基因，其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。该基因含有极为罕见的四肽SXXK基序，将该酯酶基因插入到质粒pET28a(+)后，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(DLFae4)分子量为38.3kDa。此外，本发明首次提出新型阿魏酸酯酶可以水解氨苄青霉素、青霉素和头孢唑林等多种内酰胺类抗生素。定点诱变实验表明DLFae4的催化三联体由丝氨酸(S11)，组氨酸(H74)和天冬氨酸(D302)组成，三者中任何氨基酸的突变都会导致DLFae4失去催化能力。DLFae4对阿魏酸甲酯具有高水解活性，且具有良好的热稳定性。在纤维素酶的存在下，DLFae4可明显提高从去淀粉麦麸中释放阿魏酸的量。本发明的新型阿魏酸酯酶，由于其特有的活性及酶学特性，使其可应用于饲料、造纸、食品、制药等领域。

    一种利用大肠杆菌生产胞外阿魏酸酯酶的方法
    13.
    发明公开
    一种利用大肠杆菌生产胞外阿魏酸酯酶的方法 无效

    公开(公告)号：CN109182297A

    公开(公告)日：2019-01-11

    申请号：CN201811169261.0

    申请日：2018-10-08

    申请人： 齐鲁工业大学

    发明人： 徐振上 ,  王婷 ,  刘新利

    IPC分类号： C12N9/18 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12P7/42

    CPC分类号： C12N9/18 ,  C12N15/66 ,  C12N15/70 ,  C12P7/42 ,  C12Y301/01073

    摘要： 本发明涉及一种利用大肠杆菌生产胞外阿魏酸酯酶的方法。该方法包括如下步骤：(1)制备含有阿魏酸酯酶基因的重组大肠杆菌，所述的阿魏酸酯酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；(2)将步骤(1)制得的重组大肠杆菌经IPTG或乳糖诱导发酵，经去除菌体，纯化，制得阿魏酸酯酶。本发明首次通过采用限制性内切酶Nde I酶切阿魏酸酯酶基因后，核糖体结合位点后的首个酶切位点变为Nde I酶切位点，从而获得的阿魏酸酯酶具有天然的N端序列；该特殊结构使得阿魏酸酯酶能够在大肠杆菌合成后分泌至胞外，从而极大简化了阿魏酸酯酶的纯化和利用，对后续阿魏酸的工业化生产具有显著的促进作用。