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公开(公告)号：CN108912226A
公开(公告)日：2018-11-30
申请号：CN201810844879.6
申请日：2018-07-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K16/08 , C07K1/34 , G01N33/535 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种基于双峰驼抗山羊痘病毒VHH-4-2及用途，属于生物技术领域。包含抗山羊痘病毒VHH-4-2，VHH-4-2的筛选、表达、纯化、功能化标记以及活性验证，山羊痘病毒的浓缩、纯化，试剂盒各项指标的优化等。本发明使用了功能化标记的VHH-4-2，避免了一抗、二抗以及抗抗体等步骤，提高了灵敏性、稳定性，缩短了时间，节约了资源。突破了传统Elisa方法费时、费力等缺陷。本发明的提出为建立敏感山羊痘病毒的临床诊断方法，研究病毒的感染机理奠定基础；也为本发明研制出具有完全自主知识产权的山羊痘病毒抗体固相竞争Elisa试剂盒提供了关键标识物；另外，利用山羊痘弱毒苗经细胞扩大培养、浓缩、纯化后作为包被抗原，提高了灵敏度。
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公开(公告)号：CN108486069A
公开(公告)日：2018-09-04
申请号：CN201810570334.0
申请日：2018-06-05
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)低含量样品的病毒分离方法，还公开了用于猪流行性腹泻病毒富集和分离的免疫纳米磁珠，该免疫纳米磁珠具有磁性的Fe2O3核心和偶联有PEDV膜蛋白特异性单域抗体的表面。传统方法从多重感染和低PEDV含量样品中分离病毒，需要病毒纯化和长时间盲传，分离效率低，限制了PEDV的研究工作。本发明利用纳米磁珠和PEDV特异性单域抗体制备了免疫纳米磁珠，能够有效捕获和富集粪便、组织等多种样品中的PEDV。样品经处理后利用免疫纳米磁珠进行病毒捕获和富集，将结合病毒的免疫纳米磁珠直接接种到Vero细胞，即可实现对病毒分离。本发明制备的免疫纳米磁珠和PEDV分离方法，适用于临床复杂和低病毒含量样品中PEDV的快速、有效分离。
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公开(公告)号：CN106244525A
公开(公告)日：2016-12-21
申请号：CN201610674346.9
申请日：2016-08-16
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12N5/0657 , C12N2502/246
Abstract: 本发明公开了一种心肌细胞与睾丸支持细胞的联合培养方法。所述的联合培养方法包括以下步骤：(1)睾丸支持细胞的培养；(2)心肌组织收集、处理及消化，以获得心肌细胞；(3)采用双层培养法，用睾丸支持细胞联合培养心肌细胞，其中上层为睾丸支持细胞层，下层为心肌细胞；发现，用睾丸支持细胞联合培养心肌细胞，相比常规培养组，联合培养组细胞生长速度加快，细胞生长更加旺盛。联合培养组细胞铺满单层需要3-4d，而常规培养组需要4-5d。由此证明，睾丸支持细胞可有效促进心肌细胞生长。这种简单且低成本的心肌细胞培养方法，对心脏的生长、发育、生理、代谢、病理研究有重要的现实意义。(4)分离、纯化培养的心肌细胞。本发明通过试验
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公开(公告)号：CN106139141A
公开(公告)日：2016-11-23
申请号：CN201610674306.4
申请日：2016-08-16
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K39/295 , A61K39/275 , A61K9/19 , A61K47/36 , A61K47/46 , A61K47/42 , A61K47/32 , A61K47/18 , A61K47/22 , A61P31/20 , C12N5/071 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种绵羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗及其制备方法和用途。本发明的一种绵羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗，其有效成分为本发明人自行分离且经传代致弱培养后获得的绵羊痘病毒、羊传染性脓疱病毒细胞传代致弱毒或其传代毒，其中绵羊痘病毒细胞传代致弱毒为Sheeppox Virus GS‑WW 2010 F44株，保藏编号为CCTCC NO：V201504；羊口疮病毒(羊传染性脓疱病毒)细胞传代致弱毒为Orf Virus HB‑TS09F65株，保藏编号为CCTCC NO：V201406。攻毒保护试验结果显示，本发明所制备的绵羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗安全，且能够产生有效的免疫保护力。因此，本发明对于研制安全高效的弱毒疫苗以及防控羊痘和羊口疮具有重要的现实意义。
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公开(公告)号：CN106086240A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610536967.0
申请日：2016-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于检测小反刍兽疫病毒抗原的免疫磁珠试剂盒及其用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV F蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106075429A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610674416.0
申请日：2016-08-16
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K39/295 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了一种山羊痘、绵羊痘、羊口疮三联细胞弱毒疫苗及其制备方法和用途。本发明的一种山羊痘、绵羊痘、羊口疮三联细胞弱毒疫苗，其有效成分为本发明发明人自行分离且经传代致弱培养后获得的山羊痘病毒、绵羊痘病毒以及羊传染性脓疱病毒细胞传代致弱毒或其传代毒，其中山羊痘病毒为Goatpox Virus HN‑XY2010F43株，绵羊痘病毒为Sheeppox Virus GS‑WW 2010 F44株，羊传染性脓疱病毒为Orf Virus HB‑TS09F65株。攻毒保护试验结果显示，本发明所制备的山羊痘、绵羊痘、羊口疮三联细胞弱毒疫苗安全，且能够产生有效的免疫保护力。本发明对于研制安全高效的山羊痘、绵羊痘、羊口疮三联细胞弱毒疫苗以及防控羊痘和羊口疮具有重要的现实意义。
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公开(公告)号：CN104086652A
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201410304607.9
申请日：2014-06-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗O型口蹄疫病毒特异性单域抗体及其重组表达载体，该抗O型口蹄疫病毒特异性单域抗体具有核苷酸序列：SEQIDNO1或SEQIDNO2。本发明以O型口蹄疫病毒灭活疫苗免疫双峰驼，利用噬菌体展示技术建立抗FMDVO型VHH免疫抗体库，以重组VP1蛋白作为筛选用抗原，通过3轮高强度淘洗，筛选得到与VP1抗原亲和力强的2株特异性抗FMDV血清O型的重链抗体序列，并将其分别克隆到原核表达载体中，在E.coli中完成了可溶性表达，亲和层析纯化的VHH抗体蛋白能够特异性的同O型FMDV全病毒抗原和重组VP1蛋白特异性相互作用，与FMD病毒Asia1和A型不发生交叉反应，具备了同常规IgG抗体相同的生物学功能。
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公开(公告)号：CN103695431A
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201410001384.9
申请日：2012-06-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/867 , C12N15/10 , A61P31/14
Abstract: 一种用于抑制猪瘟病毒复制的NS5B303shRNA，所述包含siRNA序列，shRNA慢病毒表达载体构建，复制缺陷型慢病毒的获得、慢病毒感染PK-15细胞（猪肾细胞）以及抑制猪瘟病毒复制效果的验证方法，该序列具有明显抑制猪瘟病毒在敏感细胞上复制的作用。本发明对猪瘟病毒体内外复制进行RNA干扰的探索，构建靶向猪瘟病毒基因组的特定保守基因区段的慢病毒载体介导的稳定整合的RNA干扰技术，有望构建靶向猪瘟病毒的siRNA的转基因动物。为shRNA应用于猪瘟病毒的基因功能研究以及猪瘟的防治积累了必要的实验数据，为动物的抗病育种提供前期准备。
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公开(公告)号：CN103667297A
公开(公告)日：2014-03-26
申请号：CN201310752351.3
申请日：2012-06-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/113 , A61P31/14 , C12N15/867 , C12N15/10
Abstract: 一种用于抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的1010shRNA，所述包含siRNA序列、shRNA慢病毒表达载体构建、复制缺陷型慢病毒的获得、慢病毒感染Marc-145细胞（绿猴肾细胞）以及抑制PRRSV复制效果的验证方法，该序列具有明显抑制PRRSV在敏感细胞上复制的作用。本发明对PRRSV体内外复制进行RNA干扰的探索，构建靶向PRRSV基因组的特定保守基因区段的慢病毒载体介导的稳定整合的RNA干扰技术，有望构建靶向猪繁殖与呼吸综合征病毒的siRNA的转基因动物。为RNAi应用于猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因功能研究以及猪繁殖与呼吸综合征的防治积累了实验数据，为动物的抗病育种提供前期准备。
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公开(公告)号：CN103436633A
公开(公告)日：2013-12-11
申请号：CN201310269949.7
申请日：2013-06-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 一种用于检测猪瘟病毒的TaqmanReal-timeRT-PCR试剂盒，包含OneStepRT-PCRbufferIII、ExTaqHS、PrimerScriptRTEnzymeMixII、阴性对照、阳性对照、以及序列SEQIDNO:1至SEQIDNO:2的扩增引物及SEQIDNO:3的探针引物的混合物。本发明将反转录和PCR扩增过程在一步反应中完成，使得检测时间缩短，有利于快速检测。本发明还使用了探针法，只有当探针引物特异的结合到扩增靶序列上时才会产生有效的结果，而且闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染，与普通PCR方法相比具有更高的准确性，有助于CSFV的防控和隐性带毒动物的剔除。
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