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公开(公告)号:CN114317571B
公开(公告)日:2025-04-18
申请号:CN202111641645.X
申请日:2021-12-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/62 , C12N15/70 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61K39/39 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供了一种病毒样颗粒及其制备方法和应用,属于农业科学畜牧兽医科学技术领域。本发明以小泛素样修饰蛋白作为标签蛋白促进病毒结构蛋白VP0、VP1和VP3的正确折叠,同时保证了蛋白的结构稳定性,实现结构蛋白的大量表达,经过3种结构蛋白体外自组装后,获得大量的与天然病毒性能相似的病毒样颗粒。经过免疫原性检测,本发明制备的病毒样颗粒具有较高的免疫原性,可作为储备疫苗,在防控猪水泡病或口蹄疫病毒传播中应用。
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公开(公告)号:CN115057941B
公开(公告)日:2024-11-15
申请号:CN202210501097.9
申请日:2022-05-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K19/00 , C07K14/09 , C07K14/00 , C12N15/70 , A61K39/135 , A61K39/295 , A61P31/14 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种AO双价口蹄疫病毒表位嵌合纳米颗粒的制备方法及应用。本发明的AO双价口蹄疫病毒表位嵌合纳米颗粒由A型及O型口蹄疫病毒的表位串联两种骨架蛋白组成。本发明通过选择A型及O型口蹄疫病毒结构蛋白及非机构蛋白的T细胞表位及B细胞表位,串联至骨架蛋白A上,再选择具有免疫增强效果的多个肽段串联至骨架蛋白B上,之后将优化后的两个蛋白的基因序列插入到原核载体中,通过原核系统表达、纯化、自组装后得到所述的AO双价口蹄疫病毒表位嵌合纳米颗粒。本发明的AO双价口蹄疫病毒表位嵌合纳米颗粒可用于制备预防A型及O型口蹄疫病毒引起的疾病的疫苗。此外,本发明中的纳米颗粒骨架还可用于串联其他病毒的表位制备相关疫苗。
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公开(公告)号:CN118050507A
公开(公告)日:2024-05-17
申请号:CN202410162239.2
申请日:2024-02-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/536 , G01N33/68 , G01N33/532 , C07K16/10
Abstract: 本发明公开了一种O型口蹄疫病毒中和抗体液相阻断ELISA检测试剂盒及其应用。所述的液相阻断ELISA试剂盒中包含用作包被抗体的O型口蹄疫病毒中和抗体Ab1、用作反应抗原的O型口蹄疫病毒样颗粒抗原以及用作检测抗体的生物素标记的Ab1抗体,其中,所述的O型口蹄疫病毒中和抗体Ab1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明基于O型口蹄疫病毒中和抗体Ab1抗体和O型口蹄疫病毒VLPs,提出了O型口蹄疫病毒中和抗体液相阻断ELISA检测试剂盒,该试剂盒可用于检测O型口蹄疫病毒中和抗体,能够方便的用于评价一个O型口蹄疫疫苗诱导的抗体是否具有保护作用,敏感性和特异性均较好,且价格低廉,其检测结果与传统VNT方法检测结果具有较高的符合率(90.83%)。
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公开(公告)号:CN117825701A
公开(公告)日:2024-04-05
申请号:CN202311773669.X
申请日:2023-12-21
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/58 , C07K16/10
Abstract: 本发明公开了一种O型口蹄疫疫苗抗原定量检测ELISA试剂盒、检测方法及其应用。所述的试剂盒中含有O型口蹄疫病毒的特异性抗体Ab1和Ab2,其氨基酸序列为SEQ ID No.1和2所示。此外,本发明还建立了一种定量检测O型口蹄疫疫苗中抗原含量的方法,该方法是以O型口蹄疫病毒的特异性抗体Ab1为包被抗体,生物素化标记的Ab2抗体为检测抗体,HRP标记的链霉亲和素作为酶标二抗,同时使用146S抗原标准品制作标准曲线,该方法既能够检测146S抗原,也能够检测口蹄疫病毒样颗粒。该方法的建立将推进O型口蹄疫疫苗抗原定量检测技术的发展,摆脱对大型仪器设备的依赖,趋于便利化,规范化。更有利于行业内疫苗规范化生产以及规范行业内疫苗生产企业产品的质量管理。
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公开(公告)号:CN116983402A
公开(公告)日:2023-11-03
申请号:CN202311113893.6
申请日:2023-08-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K39/295 , A61K39/135 , A61K39/125 , A61K39/39 , A61P31/14 , A61P37/04 , C12N7/04
Abstract: 本发明公开了一种口蹄疫‑塞内卡二联病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用,属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域。本发明以口蹄疫(O型和A型)病毒样颗粒和塞内卡A型病毒样颗粒为抗原,制备新型二联病毒样颗粒疫苗,并通过确定配苗工艺、免疫指标及安全参数等,评价二联苗的免疫协同效应和免疫效力。实验证明,该二联苗具有免疫原性强、安全性好及无免疫干扰等优点,且能达到与单价苗同等的免疫保护效果,是最有可能替代传统灭活疫苗的抗原形式。该二联病毒样颗粒疫苗在生产和应用中不仅省时、省力、节约成本,还能减少动物应激,达到“一针两防”的免疫效果,同时也为口蹄疫和塞内卡等烈性病的防控提供更有效的疫苗选择。
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公开(公告)号:CN116121303A
公开(公告)日:2023-05-16
申请号:CN202211248852.3
申请日:2022-10-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/866 , C12N15/66 , C12N15/41 , C07K14/085 , A61K39/125 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了猪脑心肌炎病毒样颗粒及其制备方法和应用。本发明将EMCV的P1、3CD基因扩增后,然后分别连接到pFastBacDual载体的PpH和Pp10启动子下,构建了重组转移载体pFBD‑P1‑3CD,将pFBD‑P1‑3CD转化至E.coli DH10Bac感受态细胞,通过筛选蓝白斑获得了重组杆粒rBacmid‑P1‑3CD。将rBacmid‑P1‑3CD转染至sf9昆虫细胞,最后通过蔗糖密度梯度纯化获得病毒样颗粒EMCV‑VLPs。实验证明获得的EMCV‑VLPs具有良好的免疫原性,可以诱导机体产生良好的免疫反应,能够作为战略储备疫苗用于EMCV的防控。
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公开(公告)号:CN115028744A
公开(公告)日:2022-09-09
申请号:CN202210771918.0
申请日:2022-06-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K19/00 , C12N15/70 , A61K39/135 , A61P31/14 , G01N33/569 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供了一种口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒及其制备方法和应用,涉及生物医药技术领域。本发明所述VP1嵌合纳米颗粒,为将O型/A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1和天然蛋白质纳米骨架蛋白共价连接得到。本发明在制备所述VP1嵌合纳米颗粒时,通过蛋白骨架共价连接口蹄疫VP1结构蛋白,将其展示在纳米笼外部,并且采用小泛素样修饰蛋白原核表达系统,既促进了目的蛋白的正确折叠,提高可溶性表达,又兼顾了原核表达系统表达效率高,成本低等优点。本发明的O型/A型口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒可在制备用于预防O型/A型口蹄疫病毒引起疾病的疫苗中应用,也可在制备用于检测O型/A型口蹄疫病毒的检测试剂中应用。
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公开(公告)号:CN114437183A
公开(公告)日:2022-05-06
申请号:CN202210146783.9
申请日:2022-02-17
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K14/09 , C07K17/08 , C07K17/04 , A61K39/135 , A61K39/385 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种基于金属有机框架仿生矿化提高病毒样颗粒(VLPs)热稳定性的方法。本发明运用二甲基咪唑与硝酸锌配位作用成功将VLPs包封在沸石咪唑框架‑8(ZIF‑8)内部从而形成VLPs‑ZIF‑8纳米颗粒。本发明通过在病毒样颗粒外封装由金属离子与有机物配位形成的框架架构,提高了VLPs疫苗的耐热性,解决了冷链运输所带来的大量人力、物力消耗等问题。本发明制备的ZIF‑8金属有机框架成本低廉、方法简单、合成过程温和。金属有机框架仿生矿化的VLPs疫苗的细胞免疫应答水平明显提升,本发明的提出为提升VLPs疫苗细胞免疫水平提供了新的技术手段。
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公开(公告)号:CN113564276A
公开(公告)日:2021-10-29
申请号:CN202110550305.X
申请日:2021-05-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了FMDV可视化RT‑LAMP检测方法的建立。以合成的39条3D‑T7序列的体外RNA转录本为模板,对RT‑LAMP引物、引物浓度、反应时间、反应温度和显色剂等进行了筛选。建立了FMDV的RT‑LAMP检测方法,总体系为20μL,包括RT‑LAMP缓冲液15.2μL,BstAMV酶混合液1.5μL,外引物F3和B3各0.04μL(100μM),内引物FIP和BIP各0.5μL(100μM),环引物Floop和Bloop各0.11μL(100μM),中性红1μL(500μM),模板1μL。反应时间55min,反应温度65℃。反应结束后,若反应管溶液变为粉红色判为阳性,若为橘黄色则判为阴性。该方法特异性强,不与BVDV、ORFV、SPPV/GTPV、SVDV、BTV、PRRSV、CSFV、PRV、PPV和PCV等病毒发生反应。建立的FMDV可视化RT‑LAMP方法为基层现场检测奠定了基础,以达到快速诊断FMDV的目的。
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公开(公告)号:CN111778219A
公开(公告)日:2020-10-16
申请号:CN202010651527.6
申请日:2020-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N7/01 , C12N15/866 , C07K19/00 , A61K39/295 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14 , A61P31/20 , C12R1/93
Abstract: 本发明根据计算机软件模拟结果,在猪细小病毒PPV VP2蛋白表面Loop2区嵌入SAT2 FMDV B细胞表位(VYTKAAAAIRGDRAALAAKYADTNHTLPPTFNFGYVTVD)。根据昆虫细胞嗜性优化合成嵌合基因GS1921OP,克隆到载体pFastBacTMDual上,转化感受态细胞DH10Bac,获得重组杆粒rBacmidL2B,转染sf9细胞收获得重组杆状病毒rBacL2B。使用间接免疫荧光针对嵌合表位和VP2蛋白进行检测,具有特异性荧光。West ern Blot针对嵌合表位和VP2蛋白进行检测,在67KDa出现一条特异性条带。重组嵌合蛋白L2B能够自我组装成病毒样颗粒(Virus-like Particles,VLPs)。本发明可应用在为南非2型口蹄疫制备储备疫苗,并能在此基础上达到同时预防南非2型口蹄疫和猪细小病的目的。
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