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    Osteoinductive protein mixtures and purification processes
    1.
    发明授权
    Osteoinductive protein mixtures and purification processes 失效
    骨诱导蛋白混合物和纯化方法

    公开(公告)号：US5371191A

    公开(公告)日：1994-12-06

    申请号：US142686

    申请日：1993-10-26

    申请人： James W. Poser ,  James J. Benedict

    发明人： James W. Poser ,  James J. Benedict

    IPC分类号： A61K38/00 ,  A61F2/00 ,  A61F2/02 ,  A61F2/28 ,  A61F2/32 ,  A61F2/38 ,  A61F2/44 ,  A61K38/18 ,  A61L27/02 ,  A61L27/22 ,  A61P43/00 ,  C07K14/51 ,  C07K3/02 ,  C07K3/20 ,  C07K3/26 ,  C07K15/06

    CPC分类号： C07K14/51 ,  A61F2/28 ,  A61K38/1875 ,  A61L27/025 ,  A61L27/227 ,  A61F2/32 ,  A61F2/38 ,  A61F2/4455 ,  A61F2002/30011 ,  A61F2002/30062 ,  A61F2210/0004 ,  A61F2250/0023 ,  Y10S530/84

    摘要： A method for purifying bone-derived osteoinductive factors including an ultrafiltration process, an anion exchange process, a cation exchange process, and a reverse phase HPLC process. The ultrafiltration process preferably includes a first ultrafiltration step using a membrane having a nominal molecular weight cutoff of approximately 100 kilodaltons (kD) and a second ultrafiltration step employing a membrane having a nominal molecular weight cutoff of approximately 10 kD. For the anion exchange process, a strongly cationic resin is used, preferably having quaternary amine functional groups. Typically, the eluant for the anion exchange process has a conductivity from about 10,260 micromhos (.mu.mhos) (1.026.times.10.sup.-2 siemens (S)) to about 11,200 .mu.mhos (1.120.times.10.sup.31 2 S). For the cation exchange process, a strongly anionic resin is used, preferably having sulfonic acid functional groups. The eluant for the cation exchange process typically has a conductivity from about 39,100 .mu.mhos (3.91.times.10.sup.-2 S) to about 82,700 .mu.mhos (8.27.times.10.sup.-2 S) or more. The HPLC process typically utilizes a column containing hydrocarbon-modified silica packing material. The osteoinductive proteins can be eluted from the HPLC column with an acetonitrile solution in combination with aqueous trifluoracetic acid. The purification processes yield osteoinductively active protein mixtures.

    摘要翻译： 用于纯化骨衍生的骨诱导因子的方法，包括超滤法，阴离子交换法，阳离子交换法和反相HPLC法。 超滤方法优选包括使用具有约100千道尔顿（kD）的标称分子量截留值的膜的第一超滤步骤和使用标称分子量截留值为约10kD的膜的第二超滤步骤。 对于阴离子交换方法，使用强阳离子树脂，优选具有季胺官能团。 通常，用于阴离子交换方法的洗脱液具有约10,260 micromhos（mhos）（1.026×10 -2西门子（S））至约11,200μMhos（1.120×1031 2 S）的电导率。 对于阳离子交换方法，使用强阴离子树脂，优选具有磺酸官能团。 用于阳离子交换过程的洗脱剂通常具有约39,100m Mhos（3.91×10 -2 S）至约82,700mhos（8.27×10 -2 S）或更高的电导率。 HPLC方法通常使用含有烃改性二氧化硅填充材料的柱。 可以用乙腈溶液与三氟乙酸水溶液从HPLC柱中洗脱骨诱导蛋白。 纯化过程产生骨诱导活性蛋白质混合物。

    Osteoinductive protein mixtures and purification processes
    4.
    发明授权
    Osteoinductive protein mixtures and purification processes 失效
    骨诱导蛋白混合物和纯化方法

    公开(公告)号：US5290763A

    公开(公告)日：1994-03-01

    申请号：US689459

    申请日：1991-04-22

    申请人： James W. Poser ,  James J. Benedict

    发明人： James W. Poser ,  James J. Benedict

    IPC分类号： A61K38/00 ,  A61F2/00 ,  A61F2/02 ,  A61F2/28 ,  A61F2/32 ,  A61F2/38 ,  A61F2/44 ,  A61K38/18 ,  A61L27/02 ,  A61L27/22 ,  A61P43/00 ,  C07K14/51 ,  A61K37/02 ,  A61K37/36 ,  C07K3/02 ,  C07K15/06

    CPC分类号： C07K14/51 ,  A61F2/28 ,  A61K38/1875 ,  A61L27/025 ,  A61L27/227 ,  A61F2/32 ,  A61F2/38 ,  A61F2/4455 ,  A61F2002/30011 ,  A61F2002/30062 ,  A61F2210/0004 ,  A61F2250/0023 ,  Y10S530/84

    摘要： A method for purifying bone-derived osteoinductive factors including an ultrafiltration process, an anion exchange process, a cation exchange process, and a reverse phase HPLC process. The ultrafiltration process preferably includes a first ultrafiltration step using a membrane having a nominal molecular weight cutoff of approximately 100 kilodaltons (kD) and a second ultrafiltration step employing a membrane having a nominal molecular weight cutoff of approximately 10 kD. For the anion exchange process, a strongly cationic resin is used, preferably having quaternary amine functional groups. Typically, the eluant for the anion exchange process has a conductivity from about 10,260 micromhos (.mu.mhos) (1.026.times.10.sup.-2 siemens (S)) to about 11,200 .mu.mhos (1.120.times.10.sup.-2 S). For the cation exchange process, a strongly anionic resin is used, preferably having sulfonic acid functional groups. The eluant for the cation exchange process typically has a conductivity from about 39,100 .mu.mhos (3.91.times.10.sup.-2 S) to about 82,700 .mu.mhos (8.27.times.10.sup.-2 S) or more. The HPLC process typically utilizes a column containing hydrocarbon-modified silica packing material. The osteoinductive proteins can be eluted from the HPLC column with an acetonitrile solution in combination with aqueous trifluoracetic acid. The purification processes yield osteoinductively active protein mixtures.

    摘要翻译： 用于纯化骨衍生的骨诱导因子的方法，包括超滤法，阴离子交换法，阳离子交换法和反相HPLC法。 超滤方法优选包括使用具有约100千道尔顿（kD）的标称分子量截留值的膜的第一超滤步骤和使用标称分子量截留值为约10kD的膜的第二超滤步骤。 对于阴离子交换方法，使用强阳离子树脂，优选具有季胺官能团。 通常，用于阴离子交换方法的洗脱液具有约10,260 micromhos（（my）mhos）（1.026 * 10-2 siemens（S））至约11,200（my）mhos（1.120×10-2 S）的电导率。 对于阳离子交换方法，使用强阴离子树脂，优选具有磺酸官能团。 用于阳离子交换过程的洗脱液通常具有约39,100（my）mhos（3.91×10 -2 S）至约82,700（my）mhos（8.27×10 -2 S）或更高的电导率。 HPLC方法通常使用含有烃改性二氧化硅填充材料的柱。 可以用乙腈溶液与三氟乙酸水溶液从HPLC柱中洗脱骨诱导蛋白。 纯化过程产生骨诱导活性蛋白质混合物。