蛋白质
    9.
    发明授权

    公开(公告)号:CN102459581B

    公开(公告)日:2014-10-29

    申请号:CN201080028819.9

    申请日:2010-06-23

    摘要: 本发明涉及制备变体脂肪分解酶的方法,其包括在宿主生物中表达核苷酸序列,所述核苷酸序列与编码真菌脂肪分解酶的核苷酸序列具有至少90%的同一性并且在对应于所编码氨基酸序列中的位置包含至少一个以下修饰:a)与原真菌脂肪分解酶相比在所述氨基酸序列中引入至少一个糖基化位点(或一个额外的糖基化位点);b)在所述多肽的表面位置和所述酶活性位点(催化三联体)的远侧外环内的位置引入至少一个氨基酸,所述氨基酸更加亲水(与原氨基酸相比);或c)在33、63、78、190、305、306或320位中的一个或多个位置的取代或插入,或者在311-312或307-319位中的一个或多个位置的删除,其中各氨基酸位置均对应于与SEQ ID No.2比对时所述氨基酸序列的位置;其中当所述核苷酸序列与编码SEQ ID No.22或SEQ ID No.23所示的真菌脂肪分解酶序列的核苷酸序列具有至少90%的同一性时,所述修饰不是在63位的取代并且所述删除不在311-312位。优选地,所述核苷酸序列与SEQ ID No.1具有至少90%同一性。本发明还涉及通过所述方法产生的多肽以及新核酸。

    酸性磷脂酶的克隆、表达及应用

    公开(公告)号:CN102803455A

    公开(公告)日:2012-11-28

    申请号:CN201080059893.7

    申请日:2010-10-27

    申请人: AB酶有限公司

    IPC分类号: C11B3/00 C12N9/16

    摘要: 本发明涉及一种DNA序列,其编码具有磷脂酶活性但基本上不具有脂肪酶活性的多肽,其特征在于所述DNA序列选自a)含有SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的DNA序列,b)含有SEQ ID NO:1所示编码序列的DNA序列,c)编码SEQ ID NO:2所示蛋白序列的DNA序列,d)由具有图7所示限制性内切酶图谱的质粒pPL3940-Topo2.5编码的DNA序列,该质粒保藏号为DSM 22741,e)能在严格条件下与a)、b)、c)或d)的DNA序列之一杂交的DNA序列,f)由于遗传密码的简并性而与a)、b)、c)、d)或e)的DNA序列相关的DNA序列,以及g)a)至f)的序列的互补链,其中所述DNA序列优选地来自曲霉,更优选地来自烟曲霉;本发明还涉及一种具有磷脂酶活性但基本上不具有脂肪酶活性的多肽,其选自a)由上述DNA序列的编码部分编码的多肽,b)具有SEQ ID NO:2所示序列或由其衍生的序列的多肽,其可以通过对一个或多个氨基酸的置换、增加或缺失获得,c)与SEQ ID NO:2的氨基酸1至299有至少83%同一性的序列的多肽,d)由可与下述序列在严格条件下杂交的核酸序列编码的多肽:(i)SEQ ID NO:1的核苷酸55至1106,(ii)SEQ ID NO:1的核苷酸55至1106中包含的cDNA序列,(iii)由至少100个核苷酸组成的(i)或(ii)中的部分序列,或(iv)(i)、(ii)或(iii)的互补链,e)具有SEQ ID NO:2序列的多肽的变体,其包含对一个或多个氨基酸的置换、缺失和/或插入,f)a)至e)的氨基酸序列的等位基因变体。