RNA引导的基因驱动
    6.
    发明公开

    公开(公告)号:CN106133141A

    公开(公告)日:2016-11-16

    申请号:CN201580012610.6

    申请日:2015-01-08

    IPC分类号: C12N15/63

    摘要: 公开了RNA引导的Cas9基因驱动及其使用方法。本发明的实施方式是基于使用RNA引导的DNA结合蛋白与引导RNA在靶DNA位点处共定位并发挥基因驱动的作用。本发明范围内包括的DNA结合蛋白包括由RNA引导的那些,在本文中称为引导RNA。DNA结合包括天然产生的具有核酸酶活性的DNA结合蛋白,如Cas9蛋白。根据一个方面,本发明的酶,如Cas9展开DNA双链体并且检索与cdRNA匹配的序列以切割。

    用于通过同源重组转化和选择酵母转化体的盒和方法

    公开(公告)号:CN103917648B

    公开(公告)日:2016-09-21

    申请号:CN201180072966.0

    申请日:2011-06-20

    IPC分类号: C12N15/64 C12N15/81 C12N15/90

    摘要: 本发明涉及用于选择具有通过同源重组整合的目的核酸片段的转化酵母细胞的方法,所述方法包括以下步骤:(i)使酵母细胞与以下物质相接触:包含正选择基因和含夹有限制性位点之51和31重组区的同源重组位点的载体,以及待通过同源重组插入所述载体的同源重组位点中的目的核酸片段,所述核酸片段的侧翼是与同源重组位点的51和31重组区基本相同的区域;以及(ii)用所述载体和所述目的核酸片段转化所述酵母细胞;(iii)选择含有带所述正选择基因之所述载体的酵母细胞,所述酵母细胞的特征在于:负选择基因也存在于载体中同源重组位点的下游并且受位于所述同源重组位点上游的启动子控制,所述启动子与负选择基因在目的DNA片段插入之前在所述载体中可操作地连接;以及25(iv)所述方法还包括使用所述负选择基因选择含有所述目的DNA片段的酵母细胞的步骤。本发明还提供了用于实施本发明方法的盒和试剂盒。

    在真核细胞中同源重组的改进的方法

    公开(公告)号:CN101421401A

    公开(公告)日:2009-04-29

    申请号:CN200780012737.3

    申请日:2007-03-14

    IPC分类号: C12N15/80 C12N15/90

    摘要: 本发明公开了构建真核细胞的方法,所述真核细胞染色体DNA序列中的靶序列被置换为想要的置换序列,所述方法包括:修饰对NHR具有偏好的亲本真核细胞,提供与亲本细胞相比具有提高的HR/NHR比例的真核细胞;提供包含第一DNA片段和第二DNA片段的DNA分子,所述第一DNA片段包含想要的置换序列,该置换序列5’和3’侧的侧翼是与靶序列侧翼的染色体DNA序列基本同源的DNA序列,所述第二DNA片段包含表达盒,所述表达盒包含编码选择标记物的基因和与之可操作地连接的、在真核细胞中有功能的调节序列;用DNA分子转化经修饰的真核细胞;培养细胞,获得经转化的后代细胞,所述后代细胞染色体中插入了所述DNA分子,通过表达选择标记物,取消选定其中DNA分子通过非同源重组事件被插入染色体中的后代细胞;和获得其中染色体DNA序列中的靶序列被想要的置换序列置换的细胞。