公开(公告)号：CN107625960B

公开(公告)日：2020-10-02

申请号：CN201710868395.0

申请日：2017-09-22

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 张雪寒 ,  张碧成 ,  俞正玉 ,  郭芸芸 ,  刘静静 ,  茅爱华 ,  何孔旺 ,  袁朗

IPC: A61K39/108 ,  A61K39/39 ,  A61P31/04 ,  A61P1/12

Abstract: 本发明提供一种通用型猪大肠杆菌病疫苗及其制备方法，属于动物细菌基因工程技术领域。所述疫苗，含有如下抗原：由周质伴侣蛋白Skp、MltA‑相关蛋白MipA和长链脂肪酸外膜转运蛋白Lomt形成的融合蛋白、不耐热肠毒素的B亚基和志贺毒素2e的B亚基，所述抗原的序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。本发明通用型猪大肠杆菌病疫苗免疫后，可以使动物产生较高的IgG和IgA抗体水平，抗体持续期超过120天。本发明疫苗免疫后，能够同时保护ETEC F4、F5、F6、F41和O139的攻击，保护率均为100%，且无腹泻现象发生，与现有疫苗相比，保护范围显著扩大。

公开(公告)号：CN107937619A

公开(公告)日：2018-04-20

申请号：CN201711497886.5

申请日：2017-12-29

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 肖琦 ,  何孔旺 ,  茅爱华 ,  汪伟 ,  俞正玉 ,  郭佳慧 ,  温立斌 ,  胡屹屹 ,  朱雪蛟 ,  李彬 ,  郭容利 ,  范宝超 ,  周萍 ,  曲梦 ,  倪艳秀 ,  周俊明 ,  祝昊丹 ,  王丹丹 ,  张雪寒 ,  张碧成 ,  吕立新 ,  沈江萍

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供一种用于检测猪圆环病毒3型的引物组合物及其应用，涉及生物技术领域。用于检测猪圆环病毒3型的引物组合物，包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还提供以非诊断为目的的检测猪圆环病毒3型的方法，以待检样品中提取的总DNA为模板，采用权利要求1-3之一所述引物组合物进行PCR扩增，从而确定待检样品中是否存在猪圆环病毒3型。采用本发明引物组合物及检测方法，能够快速、准确、灵敏的检测出样品中是否存PCV3。

公开(公告)号：CN107267532A

公开(公告)日：2017-10-20

申请号：CN201710674137.9

申请日：2017-08-09

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 范宝超 ,  李彬 ,  何孔旺 ,  焦点 ,  郭容利 ,  俞正玉 ,  朱琳

IPC: C12N15/50 ,  C12N15/63 ,  C12N7/00

CPC classification number: C07K14/005 ,  C12N15/63 ,  C12N2770/20021

Abstract: 本发明提供PEDV JS2008株全长感染性cDNA的构建方法及应用，属于分子生物学和病毒学领域。构建PEDV JS2008株全长感染性cDNA的方法，包括如下步骤：以PEDV JS2008株病毒总RNA的反转录产物为模板，扩增6片段，分别插入载体pSMART中，然后将位置不合适的内切酶PflmI酶切位点进行沉默突变；将各重组载体酶切，回收目标的cDNA片段，连接后得到所述PEDV JS2008株全长感染性cDNA。本发明PEDV JS2008株全长感染性cDNA的构建方法，该方法巧妙，效率高，可以应用于拯救猪流行性腹泻病毒，以研究PEDV致病机制及新型疫苗。

公开(公告)号：CN107099506A

公开(公告)日：2017-08-29

申请号：CN201710269905.2

申请日：2017-04-24

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 李彬 ,  何孔旺 ,  孙杰 ,  俞正玉 ,  范宝超 ,  郭容利 ,  茅爱华 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  袁万哲 ,  张雪寒 ,  肖琦

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明提供猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒及其应用，涉及生物检测领域。抗PEDV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株PEDV，保藏编号为CCTCC NO:C201710。猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒，包括预包被酶标板和酶标记抗体，预包被酶标板是采用所述抗PEDV N蛋白单克隆抗体包被的酶标板，酶标记抗体是辣根过氧化物酶标记的抗PEDV N蛋白多克隆抗体；抗PEDV N蛋白多克隆抗体通过用猪流行性腹泻病毒N蛋白免疫兔子，获取兔子血清后纯化获得。本发明试剂盒特异性好、灵敏度高、稳定性好，能够快速、简便、高效的定量检测猪流行性腹泻病毒，成本低、适合高通量检测。

公开(公告)号：CN106039302A

公开(公告)日：2016-10-26

申请号：CN201610450557.4

申请日：2016-06-21

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 李彬 ,  杜露平 ,  何孔旺 ,  俞正玉 ,  逄凤娇 ,  徐向伟 ,  范宝超 ,  温立斌

IPC: A61K39/12 ,  A61K39/39 ,  A61P31/14

CPC classification number: A61K39/12 ,  A61K39/39 ,  A61K2039/53 ,  A61K2039/55511 ,  C12N2770/10034

Abstract: 本发明提供猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸疫苗及其制备方法，涉及生物技术领域。该猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸疫苗，含有BPEI/PLGA纳米颗粒佐剂和携带有PRRSV ORF5基因的重组质粒，所述携带有PRRSV ORF5基因的重组质粒吸附于BPEI/PLGA纳米颗粒佐剂表面。本发明还提供所述猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸疫苗的制备方法，包括如下步骤：将BPEI/PLGA纳米颗粒佐剂与携带有PRRSV ORF5基因的重组质粒混合均匀，静置后得到所述猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸疫苗。本发明旨猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸疫苗，免疫效果较好，制备方法简单、高效。

公开(公告)号：CN105400881A

公开(公告)日：2016-03-16

申请号：CN201510925222.9

申请日：2015-12-14

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 倪艳秀 ,  何孔旺 ,  周俊明 ,  祝昊丹 ,  孙学飞 ,  吕立新 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  张雪寒 ,  温立斌 ,  李彬 ,  郭容利 ,  王小敏 ,  汪伟 ,  胡屹屹

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/689 ,  C12Q2600/158

Abstract: 本发明提供了胸膜肺炎放线杆菌血清4型PCR检测用引物及其试剂盒，属于生物技术领域。以基因组DNA为模板，利用所提供引物进行PCR扩增，反应结束后根据扩增片段的数量和分子量大小判定结果。本发明的引物特异性好，检测方法快速简单，灵敏度高，不仅可从细菌培养液，也能直接从病料中检测胸膜肺炎放线杆菌血清4型，可用于胸膜肺炎放线杆菌血清4型的分子流行病学调查、疫病诊断及疫苗菌株的筛选。

公开(公告)号：CN102206607A

公开(公告)日：2011-10-05

申请号：CN201110087699.6

申请日：2011-04-08

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 何孔旺 ,  张雪寒 ,  卢维彩 ,  赵攀登 ,  叶青 ,  温立斌 ,  郭容利 ,  李彬 ,  王小敏 ,  倪艳秀 ,  吕立新 ,  周俊明 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  A61K39/108 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7三基因缺失菌株，属于生物技术领域。①抗性诱导，获得具有链霉素抗性的EHECO157:H7菌株。②缺失株构建，首先EHECO157:H7（△hly），而后依次构建EHECO157:H7（△hly△stx）和EHECO157:H7（△hly△stx△toxB）。EHECO157:H7（△hly△stx△toxB）致病性和小鼠体内定植能力较亲本菌株有明显降低而免疫原性良好。本发明构建了EHECO157:H7（△hly△stx△toxB），并明确了致病性和定植特性。本发明构建的缺失菌株EHECO157:H7（△hly△stx△toxB），可用于研制EHEC基因缺失活疫苗，免疫接种动物以减少EHECO157:H7在肠道内的定植，进而降低人类感染EHECO157:H7的机会，保障人类身心健康。

公开(公告)号：CN101289658A

公开(公告)日：2008-10-22

申请号：CN200810024644.9

申请日：2008-03-28

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 何孔旺 ,  潘群兴 ,  温立斌 ,  张雪寒 ,  倪艳秀 ,  俞正玉 ,  郭容利 ,  吕立新 ,  茅爱华 ,  肖琦 ,  黄克和

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/861 ,  A61K39/12 ,  A61P31/12

Abstract: 本发明涉及表达2型猪圆环病毒核衣壳蛋白Cap基因的重组病毒样粒子的构建及应用，属于基因工程疫苗领域。将猪细小病毒(PPV)VP2基因的C端基因片段克隆于人5型腺病毒穿梭载体，获得重组腺病毒rAd－ΔVP2，ΔVP2蛋白成功的高效表达，并能自我装配成病毒样粒子[PPV:VLPs]。以PPV VP2病毒样粒子作为抗原转运载体，将2型猪圆环病毒(PCV2)核衣壳蛋白(Cap)的165－200位氨基酸(ΔCap)基因嵌合在PPV VP2的N端(ΔVP2)，获得重组腺病毒rAd－ΔCap－ΔVP2。嵌合的VP2(ΔCap－ΔVP2)蛋白成功的高效表达，并能自我装配成病毒样粒子[PPV:VLP(PCV2)]。本发明还涉及该重组病毒及其表达Cap基因的重组PPV VP2病毒样粒子在疫苗免疫等方面的应用。

公开(公告)号：CN101173243A

公开(公告)日：2008-05-07

申请号：CN200710134465.6

申请日：2007-10-23

Applicant: 江苏省农业科学院 ,  南京天邦生物科技有限公司

Inventor： 张雪寒 ,  何孔旺 ,  刘亚彬 ,  周俊明 ,  俞正玉 ,  倪艳秀 ,  郭容利 ,  吕立新 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/09 ,  C12R1/46

Abstract: 本发明涉及次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)猪链球菌2型(S52)缺失株，属于生物技术领域。包括设计引物，获取impdh基因上下游序列(IN和IC)和氯霉素(cat)基因完整表达盒，基因经串联并克隆入simple pMD18－T载体，串联片段经测序后再经酶切后克隆入温敏质粒pSET4s载体，构建重组基因敲除质粒pSET4s－IN－cat－IC，转化入SS2。IMPDHm培养特性、生化特性和致病性较亲本菌株SS2有明显的不同。本发明构建了IMPDH缺失菌株(IMPDHm)，可用于研制SS2的基因缺失灭活疫苗，为更加安全而有效的防控猪链球菌病提供技术方法。

公开(公告)号：CN1292254C

公开(公告)日：2006-12-27

申请号：CN200510038211.5

申请日：2005-01-24

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 何孔旺 ,  彭小华 ,  王芳 ,  邱索平 ,  张雪寒 ,  倪艳秀 ,  郭容利 ,  俞正玉 ,  陆承平

IPC: G01N33/569 ,  C12N15/31 ,  C12Q1/04 ,  G01N33/543 ,  G01N33/535 ,  C07K14/36

Abstract: 一种检测胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropeumoniae，App)野毒感染的试剂盒，其组成成分如下：细菌毒素ApxIV纯化表达蛋白包被好的酶标板、辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG抗体、柠檬酸、碳酸氢二钠、EDTA缓冲系统加TMB构成的显色系统、阳性血清、阴性血清和试剂盒说明书。其特征是利用聚合酶链反应(PCR)从App血清1型的ApxIV基因中扩增出目的基因，构建了含目的基因的表达质粒pET32a-ApxIV，该质粒转化入宿主菌BL21(DE3)，体外表达蛋白经镍柱纯化后作为抗原，建立酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法并优化反应条件形成了检测试剂盒，该试剂盒在App的诊断、流行病学调查和免疫监测等方面具有重要应用价值。