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公开(公告)号：CN105420161B
公开(公告)日：2018-07-31
申请号：CN201510964760.9
申请日：2015-12-21
Applicant: 江苏省农业科学院
Abstract: 本发明涉及种猪胸膜肺炎放线杆菌外膜囊泡的制备方法及其疫苗,属生物技术领域。体外以铁离子限制的培养基培养猪胸膜肺炎放线杆菌shope菌株,经离心、0.22µm过滤处理后获取无细胞培养上清,继而超速离心制备出细菌释放的外膜囊泡,经过透射电镜观察可见大部分外膜囊泡直径50nm~100nm之间,以外膜囊泡作为亚单位疫苗二次鼻内免疫小鼠,外膜囊泡免疫小鼠长期增重及肺脏眼观形态与PBS免疫组无显著差异。同时实验表明外膜囊泡是种高效免疫刺激物,不仅能够刺激小鼠血清产生高水平的IgG,而且在小鼠肺脏中产生高水平的IgA,有效的刺激了小鼠肺脏的黏膜免疫,显现出外膜囊泡作为亚单位疫苗较好的应用前景。
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公开(公告)号：CN103969450A
公开(公告)日：2014-08-06
申请号：CN201410224227.4
申请日：2014-05-26
Applicant: 江苏省农业科学院
Inventor： 李彬 , 孙冰 , 何孔旺 , 杜露平 , 郭容利 , 倪艳秀 , 温立斌 , 俞正玉 , 张雪寒 , 茅爱华 , 吕立新 , 胡屹屹 , 周俊明 , 王小敏 , 祝昊丹 , 于洋
IPC: G01N33/68 , G01N33/531
CPC classification number: C07K14/005 , C12N2770/24322 , G01N33/56983 , G01N33/68 , G01N2333/183
Abstract: 本发明提供了一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的ELISA试剂盒，属于生物技术领域。该试剂盒是以纯化的重组猪流行性腹泻病毒N蛋白作为包被抗原的ELISA板条。RT-PCR方法扩增获得猪流行性腹泻病毒N基因，定向插入pET-28a载体构建pET-28a-N重组质粒，转化BL21（DE3）感受态细胞，获得原核表达菌pET-28a-N/BL21。经IPTG诱导表达、纯化，获得重组N蛋白。本发明试剂盒用于检测猪流行性腹泻病毒的抗体，经检验，该试剂盒特异性、敏感性、重复性均良好。该试剂盒检测准确、操作简便，适合于在临床应用中进行推广，为猪流行性腹泻病的快速检测提供了可靠手段。
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公开(公告)号：CN103320452A
公开(公告)日：2013-09-25
申请号：CN201310285870.3
申请日：2013-07-08
Applicant: 江苏省农业科学院
Inventor： 李彬 , 孙冰 , 何孔旺 , 郭容利 , 杜露平 , 倪艳秀 , 温立斌 , 俞正玉 , 张雪寒 , 茅爱华 , 吕立新 , 胡屹屹 , 周俊明 , 王小敏 , 祝昊丹 , 于洋
Abstract: 本发明提供了一种猪流行性腹泻病毒变异株N基因全序列的扩增方法，包括如下具体步骤：1.提取猪流行性腹泻病毒变异株RNA；2.依据猪流行性腹泻病毒变异株的N基因全序列设计引物，并用RT-PCR的方法扩增猪流行性腹泻病毒变异株的N基因；3.PCR产物的克隆与测序分析：将PCR产物纯化并连接pMD18-T载体，转化trans5a感受态细胞，筛选阳性克隆，将阳性克隆进行测序分析。可以通过该方法扩增获取病料中猪流行性腹泻病毒变异株的N基因、并可以捕获猪流行性腹泻病毒变异株在细胞培养传代过程中N基因序列的变化。也可以作为一种检测病料中PEDV的方法，并为PEDV的N基因相关研究奠定基础。
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公开(公告)号：CN103275937A
公开(公告)日：2013-09-04
申请号：CN201310072686.0
申请日：2013-03-07
Applicant: 江苏省农业科学院
Abstract: 本发明涉及一种PCV2密码子优化ORF1和ORF2串联基因的重组病毒，属于生物制药领域。人工合成密码子优化的PCV2ORF1和ORF2基因，命名为YHsfORF1-2。将YHsfORF1-2克隆入杆状病毒表达载体pFastBacHTA中，即获得重组质粒pFBHYHsfORF1-2。而后将重组质粒转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒vFBHYHsfORF1-2。在重组杆状病毒vFBHYHsfORF1-2中，ORF1和ORF2蛋白能够成功的高效表达，并能形成病毒样颗粒。本发明还涉及该重组病毒在疫苗方面的应用，动物试验证明由该重组病毒所制的灭活疫苗，可刺激机体产生高效的免疫应答，对PCV2有较好的免疫保护作用。
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公开(公告)号：CN102206607B
公开(公告)日：2013-05-08
申请号：CN201110087699.6
申请日：2011-04-08
Applicant: 江苏省农业科学院
Inventor： 何孔旺 , 张雪寒 , 卢维彩 , 赵攀登 , 叶青 , 温立斌 , 郭容利 , 李彬 , 王小敏 , 倪艳秀 , 吕立新 , 周俊明 , 俞正玉 , 茅爱华 , 周萍 , 沈江萍
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , A61K39/108 , A61P31/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7三基因缺失菌株，属于生物技术领域。①抗性诱导，获得具有链霉素抗性的EHECO157:H7菌株。②缺失株构建，首先EHECO157:H7（△hly），而后依次构建EHECO157:H7（△hly△stx）和EHECO157:H7（△hly△stx△toxB）。EHECO157:H7（△hly△stx△toxB）致病性和小鼠体内定植能力较亲本菌株有明显降低而免疫原性良好。本发明构建了EHECO157:H7（△hly△stx△toxB），并明确了致病性和定植特性。本发明构建的缺失菌株EHECO157:H7（△hly△stx△toxB），可用于研制EHEC基因缺失活疫苗，免疫接种动物以减少EHECO157:H7在肠道内的定植，进而降低人类感染EHECO157:H7的机会，保障人类身心健康。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103060474A
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201310012559.1
申请日：2013-01-07
Applicant: 江苏省农业科学院
Abstract: 本发明提供了猪流行性腹泻病毒变异株检测用引物及其检测试剂盒，属于生物技术领域。所述正向引物PEDV-VF（SEQ ID NO.1）5’-TTGGTGAAAACCAGGGTGTC-3’和反向引物PEDV-VR（SEQ ID NO.2）：5’-CAACACTATGTTCACTCA-3’。本发明还进一步提供了检测猪流行性腹泻病毒变异株的检测试剂盒。其检测方法以总RNA为模板，利用上述引物进行反转录PCR（RT-PCR）扩增，反应结束后根据扩增片段的位置判定结果。本发明的引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，为猪流行性腹泻病毒变异株的检测提供了保证。
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公开(公告)号：CN102928605A
公开(公告)日：2013-02-13
申请号：CN201210436636.1
申请日：2012-11-06
Applicant: 江苏省农业科学院
Inventor： 何孔旺 , 文世富 , 温立斌 , 王小敏 , 李彬 , 郭容利 , 俞正玉 , 茅爱华 , 倪艳秀 , 张雪寒 , 吕立新 , 周俊明 , 胡屹屹 , 汪伟 , 叶青 , 祝昊丹 , 于洋 , 沈江萍 , 周萍
IPC: G01N33/68 , G01N33/531
Abstract: 本发明涉及一种用于检测类猪圆环病毒P1抗体的间接ELISA试剂盒。属于生物技术领域。包括抗原重组蛋白的制备、间接ELISA建立、判定标准及临床血清学检测的应用。所述的抗原重组蛋白是利用pET-28a(+)原核表达载体，构建的表达类猪圆环病毒P1Cap衣壳蛋白C端部分氨基酸序列的3个重复的基因工程菌BLpET-28a-3pCap,并将表达的重组蛋白纯化后的Cap蛋白。该方法用于检测猪血清中类猪圆环病毒P1的抗体水平具有重复性好、特异性高的特点，可用于类猪圆环病毒P1血清学调查，为该病的防治和流行情况的掌握提供一种快速、简便的检测方法。目前该方法是国际上首次利用P1衣壳蛋白建立检测猪群中P1抗体的ELISA。
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公开(公告)号：CN105400881A
公开(公告)日：2016-03-16
申请号：CN201510925222.9
申请日：2015-12-14
Applicant: 江苏省农业科学院
CPC classification number: C12Q1/689 , C12Q2600/158
Abstract: 本发明提供了胸膜肺炎放线杆菌血清4型PCR检测用引物及其试剂盒，属于生物技术领域。以基因组DNA为模板，利用所提供引物进行PCR扩增，反应结束后根据扩增片段的数量和分子量大小判定结果。本发明的引物特异性好，检测方法快速简单，灵敏度高，不仅可从细菌培养液，也能直接从病料中检测胸膜肺炎放线杆菌血清4型，可用于胸膜肺炎放线杆菌血清4型的分子流行病学调查、疫病诊断及疫苗菌株的筛选。
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公开(公告)号：CN103866030B
公开(公告)日：2015-10-28
申请号：CN201410130191.3
申请日：2014-04-02
Applicant: 江苏省农业科学院
Abstract: 本发明涉及食品和生物领域检测，特别是涉及大肠杆菌O157:H7的LAMP检测引物及检测试剂盒。是一种运用4条特异性引物检测样品中大肠杆菌O157:H7的方法及试剂盒。其步骤为：步骤一，提取待检样品中的核苷酸；步骤二，利用所述LAMP检测试剂盒检测样品中核苷酸，判断样品中是否含有大肠杆菌O157:H7。本发明的试剂盒操作简便、结果直观，敏感性和特异性良好。
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公开(公告)号：CN103866035A
公开(公告)日：2014-06-18
申请号：CN201410132107.1
申请日：2014-04-02
Applicant: 江苏省农业科学院
CPC classification number: C12Q1/686 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明涉及一种用于检测大肠杆菌O157:H7核苷酸片段的引物和探针序列，属于生物和食品检测技术领域。引物包括：由序列为gccaggcaaatatgtttgtga的上游引物pZF和序列为catttggcatttgaacgatgaa的下游引物pZR组成的引物对。探针pZP序列为cctggataccgctactcaaattctgtcaaaat。该套引物和探针根据GenBank上大肠杆菌O157:H7？EDL933（登录号：AE005174）设计，具有较高的灵敏度和特异性。
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