公开(公告)号：CN107625960B

公开(公告)日：2020-10-02

申请号：CN201710868395.0

申请日：2017-09-22

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 张雪寒 ,  张碧成 ,  俞正玉 ,  郭芸芸 ,  刘静静 ,  茅爱华 ,  何孔旺 ,  袁朗

IPC分类号： A61K39/108 ,  A61K39/39 ,  A61P31/04 ,  A61P1/12

摘要： 本发明提供一种通用型猪大肠杆菌病疫苗及其制备方法，属于动物细菌基因工程技术领域。所述疫苗，含有如下抗原：由周质伴侣蛋白Skp、MltA‑相关蛋白MipA和长链脂肪酸外膜转运蛋白Lomt形成的融合蛋白、不耐热肠毒素的B亚基和志贺毒素2e的B亚基，所述抗原的序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。本发明通用型猪大肠杆菌病疫苗免疫后，可以使动物产生较高的IgG和IgA抗体水平，抗体持续期超过120天。本发明疫苗免疫后，能够同时保护ETEC F4、F5、F6、F41和O139的攻击，保护率均为100%，且无腹泻现象发生，与现有疫苗相比，保护范围显著扩大。

公开(公告)号：CN107937619A

公开(公告)日：2018-04-20

申请号：CN201711497886.5

申请日：2017-12-29

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 肖琦 ,  何孔旺 ,  茅爱华 ,  汪伟 ,  俞正玉 ,  郭佳慧 ,  温立斌 ,  胡屹屹 ,  朱雪蛟 ,  李彬 ,  郭容利 ,  范宝超 ,  周萍 ,  曲梦 ,  倪艳秀 ,  周俊明 ,  祝昊丹 ,  王丹丹 ,  张雪寒 ,  张碧成 ,  吕立新 ,  沈江萍

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

摘要： 本发明提供一种用于检测猪圆环病毒3型的引物组合物及其应用，涉及生物技术领域。用于检测猪圆环病毒3型的引物组合物，包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还提供以非诊断为目的的检测猪圆环病毒3型的方法，以待检样品中提取的总DNA为模板，采用权利要求1-3之一所述引物组合物进行PCR扩增，从而确定待检样品中是否存在猪圆环病毒3型。采用本发明引物组合物及检测方法，能够快速、准确、灵敏的检测出样品中是否存PCV3。

公开(公告)号：CN107099506A

公开(公告)日：2017-08-29

申请号：CN201710269905.2

申请日：2017-04-24

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 李彬 ,  何孔旺 ,  孙杰 ,  俞正玉 ,  范宝超 ,  郭容利 ,  茅爱华 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  袁万哲 ,  张雪寒 ,  肖琦

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91

摘要： 本发明提供猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒及其应用，涉及生物检测领域。抗PEDV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株PEDV，保藏编号为CCTCC NO:C201710。猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒，包括预包被酶标板和酶标记抗体，预包被酶标板是采用所述抗PEDV N蛋白单克隆抗体包被的酶标板，酶标记抗体是辣根过氧化物酶标记的抗PEDV N蛋白多克隆抗体；抗PEDV N蛋白多克隆抗体通过用猪流行性腹泻病毒N蛋白免疫兔子，获取兔子血清后纯化获得。本发明试剂盒特异性好、灵敏度高、稳定性好，能够快速、简便、高效的定量检测猪流行性腹泻病毒，成本低、适合高通量检测。

公开(公告)号：CN105878369A

公开(公告)日：2016-08-24

申请号：CN201610460029.7

申请日：2016-06-22

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 胡屹屹 ,  茅爱华 ,  何孔旺 ,  温立斌 ,  倪艳秀 ,  郭容利 ,  范宝超

IPC分类号： A61K36/53 ,  A61P1/12 ,  A61P31/14

CPC分类号： A61K36/53 ,  A61K36/47 ,  A61K2236/333 ,  A61K2300/00

摘要： 本发明公开了一种防治猪流行性腹泻病毒病的中草药复方，将叶下珠、牛至、荔枝草按质量比3:2:1制成散剂，将散剂和饲粮按照质量比1:100混合，喂养患病猪，或者散剂加10倍散剂质量的蒸馏水，浸泡1h后加热回流1h，趁热用纱布过滤，药渣再分别加8倍质量的水和6倍质量的水加热回流1h，合并3次滤液，减压浓缩成生药浓度为1g/mL的药液，对患病猪肌肉注射。能显著上调TFF3含量，提升动物小肠粘膜防御功能，下调NO水平，改善小肠的蠕动性和肠液的电解质平衡，增强动物体质，降低机体的尿素水平；能显著上调ALB水平，增加机体肝脏代谢功能，能显著提高GLO水平，增强机体免疫功能。

公开(公告)号：CN105400881A

公开(公告)日：2016-03-16

申请号：CN201510925222.9

申请日：2015-12-14

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 倪艳秀 ,  何孔旺 ,  周俊明 ,  祝昊丹 ,  孙学飞 ,  吕立新 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  张雪寒 ,  温立斌 ,  李彬 ,  郭容利 ,  王小敏 ,  汪伟 ,  胡屹屹

IPC分类号： C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC分类号： C12Q1/689 ,  C12Q2600/158

摘要： 本发明提供了胸膜肺炎放线杆菌血清4型PCR检测用引物及其试剂盒，属于生物技术领域。以基因组DNA为模板，利用所提供引物进行PCR扩增，反应结束后根据扩增片段的数量和分子量大小判定结果。本发明的引物特异性好，检测方法快速简单，灵敏度高，不仅可从细菌培养液，也能直接从病料中检测胸膜肺炎放线杆菌血清4型，可用于胸膜肺炎放线杆菌血清4型的分子流行病学调查、疫病诊断及疫苗菌株的筛选。

公开(公告)号：CN102154513B

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201110063355.1

申请日：2011-03-16

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 李彬 ,  何孔旺 ,  毛立 ,  温立斌 ,  张雪寒 ,  倪艳秀 ,  郭容利 ,  周俊明 ,  茅爱华 ,  王小敏

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

摘要： 本发明涉及一种检测猪Hokovirus的PCR检测方法，属于生物技术领域。具体采用25μl的PCR反应体系，在0.2mlPCR反应管内分别加入缓冲液，上、下游引物，DNA聚合酶以及提取的DNA模板，用灭菌超纯水加至总体积，将试剂混合均匀后，至于PCR扩增仪中，进行变性、退火、延伸，共循环35次；PCR反应结束后，取10μl产物在琼脂糖凝胶上，使用TAE缓冲液进行电泳，在紫外投射仪下观察PCR产物，并与标准分子量相对照，阳性样品可出现540bp片段。本发明所提供的检测方法敏感性高、特异性好、操作简便、迅速，并且对检测材料质量要求低，便于临床上的应用。

公开(公告)号：CN102206607A

公开(公告)日：2011-10-05

申请号：CN201110087699.6

申请日：2011-04-08

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 何孔旺 ,  张雪寒 ,  卢维彩 ,  赵攀登 ,  叶青 ,  温立斌 ,  郭容利 ,  李彬 ,  王小敏 ,  倪艳秀 ,  吕立新 ,  周俊明 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  A61K39/108 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

摘要： 本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7三基因缺失菌株，属于生物技术领域。①抗性诱导，获得具有链霉素抗性的EHECO157:H7菌株。②缺失株构建，首先EHECO157:H7（△hly），而后依次构建EHECO157:H7（△hly△stx）和EHECO157:H7（△hly△stx△toxB）。EHECO157:H7（△hly△stx△toxB）致病性和小鼠体内定植能力较亲本菌株有明显降低而免疫原性良好。本发明构建了EHECO157:H7（△hly△stx△toxB），并明确了致病性和定植特性。本发明构建的缺失菌株EHECO157:H7（△hly△stx△toxB），可用于研制EHEC基因缺失活疫苗，免疫接种动物以减少EHECO157:H7在肠道内的定植，进而降低人类感染EHECO157:H7的机会，保障人类身心健康。

公开(公告)号：CN102154513A

公开(公告)日：2011-08-17

申请号：CN201110063355.1

申请日：2011-03-16

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 李彬 ,  何孔旺 ,  毛立 ,  温立斌 ,  张雪寒 ,  倪艳秀 ,  郭容利 ,  周俊明 ,  茅爱华 ,  王小敏

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

摘要： 本发明涉及一种检测猪Hokovirus的PCR检测方法，属于生物技术领域。具体采用25μl的PCR反应体系，在0.2mlPCR反应管内分别加入缓冲液，上、下游引物，DNA聚合酶以及提取的DNA模板，用灭菌超纯水加至总体积，将试剂混合均匀后，至于PCR扩增仪中，进行变性、退火、延伸，共循环35次；PCR反应结束后，取10μl产物在琼脂糖凝胶上，使用TAE缓冲液进行电泳，在紫外投射仪下观察PCR产物，并与标准分子量相对照，阳性样品可出现540bp片段。本发明所提供的检测方法敏感性高、特异性好、操作简便、迅速，并且对检测材料质量要求低，便于临床上的应用。

公开(公告)号：CN101289658A

公开(公告)日：2008-10-22

申请号：CN200810024644.9

申请日：2008-03-28

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 何孔旺 ,  潘群兴 ,  温立斌 ,  张雪寒 ,  倪艳秀 ,  俞正玉 ,  郭容利 ,  吕立新 ,  茅爱华 ,  肖琦 ,  黄克和

IPC分类号： C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/861 ,  A61K39/12 ,  A61P31/12

摘要： 本发明涉及表达2型猪圆环病毒核衣壳蛋白Cap基因的重组病毒样粒子的构建及应用，属于基因工程疫苗领域。将猪细小病毒(PPV)VP2基因的C端基因片段克隆于人5型腺病毒穿梭载体，获得重组腺病毒rAd－ΔVP2，ΔVP2蛋白成功的高效表达，并能自我装配成病毒样粒子[PPV:VLPs]。以PPV VP2病毒样粒子作为抗原转运载体，将2型猪圆环病毒(PCV2)核衣壳蛋白(Cap)的165－200位氨基酸(ΔCap)基因嵌合在PPV VP2的N端(ΔVP2)，获得重组腺病毒rAd－ΔCap－ΔVP2。嵌合的VP2(ΔCap－ΔVP2)蛋白成功的高效表达，并能自我装配成病毒样粒子[PPV:VLP(PCV2)]。本发明还涉及该重组病毒及其表达Cap基因的重组PPV VP2病毒样粒子在疫苗免疫等方面的应用。

公开(公告)号：CN107937619B

公开(公告)日：2020-08-04

申请号：CN201711497886.5

申请日：2017-12-29

申请人： 江苏省农业科学院

发明人： 肖琦 ,  何孔旺 ,  茅爱华 ,  汪伟 ,  俞正玉 ,  郭佳慧 ,  温立斌 ,  胡屹屹 ,  朱雪蛟 ,  李彬 ,  郭容利 ,  范宝超 ,  周萍 ,  曲梦 ,  倪艳秀 ,  周俊明 ,  祝昊丹 ,  王丹丹 ,  张雪寒 ,  张碧成 ,  吕立新 ,  沈江萍

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

摘要： 本发明提供一种用于检测猪圆环病毒3型的引物组合物及其应用，涉及生物技术领域。用于检测猪圆环病毒3型的引物组合物，包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还提供以非诊断为目的的检测猪圆环病毒3型的方法，以待检样品中提取的总DNA为模板，采用权利要求1‑3之一所述引物组合物进行PCR扩增，从而确定待检样品中是否存在猪圆环病毒3型。采用本发明引物组合物及检测方法，能够快速、准确、灵敏的检测出样品中是否存PCV3。