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公开(公告)号：CN118389470A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410617468.9
申请日：2024-05-17
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种具有高热稳定性的几丁质酶突变体D615S及其构建方法与应用。对野生型几丁质酶Chi1通过半理性设计的方法进行了热稳定改造，将位于第615位天冬氨酸的点突变为丝氨酸，得到的突变体与野生型的相比，在40℃的半衰期提高了3.6倍，45℃的半衰期提高了24倍。当对100 g/L的粉粒几丁质在45℃下降解60 h，得到48 g/L的还原糖，降解率为48%，对100 g/L几丁质含量为20%的龙虾壳降解60 h，得9 g/L的还原糖，降解率可达到45%，通过对降解产物进行鉴定，发现产物为N‑乙酰氨基葡萄糖和几丁二糖的质量比为4:1，具有良好的市场前景。
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公开(公告)号：CN111647099B
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN202010654591.X
申请日：2020-07-09
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种从废弃小龙虾壳中制备几丁质纳米纤维的方法。该方法的步骤如下：废弃的小龙虾壳经过分拣，除去油脂及附着物，清洗后烘干并磨成虾壳粉；称取虾壳粉0.2‑1g，加入4‑20的强极性有机试剂在室温下进行搅拌溶解，搅拌转速应不低于1200 rpm，搅拌时间不低于12 h；溶解结束后，加入4‑20mL强极性有机试剂稀释，并滤去不溶物，收集过滤清液，加40‑400mL水充分析出几丁质，收集几丁质，干燥后称量并计算提取率；将上述步骤中含有强极性有机试剂的混合液通过离心收集至溶剂回收装置，加热回收。该方法可有效提取虾壳粉中的几丁质，提取率可达到15.26%，条件温和、操作简单，且试剂可回收利用。
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公开(公告)号：CN109810966B
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN201910242877.4
申请日：2019-03-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明涉及一种几丁质酶CmChi6基因及其克隆表达与应用。本发明首次克隆出具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的外切几丁质酶CmChi6基因，并获得了高活性外切几丁质酶，其制备方法简单，生产成本低，产品易保存，适宜的酶解温度为45℃，酶解最适pH为7.4，在25‑50℃时热稳定性良好，33 h仍保持60%以上酶活；最适pH 7.4，在pH7.0‑10.0，33h酶活仍保持75％以上；Ba2+对CmChi6活力具有稍微的激活作用；CmChi6对胶体几丁质具有高降解活性，可用该酶制备几丁二糖，转化率高，能源消耗少，环境友好，在工业化降解几丁质应用中具有重要的经济价值。
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公开(公告)号：CN111647099A
公开(公告)日：2020-09-11
申请号：CN202010654591.X
申请日：2020-07-09
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种从废弃小龙虾壳中制备几丁质纳米纤维的方法。该方法的步骤如下：废弃的小龙虾壳经过分拣，除去油脂及附着物，清洗后烘干并磨成虾壳粉；称取虾壳粉0.2-1g，加入4-20的强极性有机试剂在室温下进行搅拌溶解，搅拌转速应不低于1200 rpm，搅拌时间不低于12 h；溶解结束后，加入4-20mL强极性有机试剂稀释，并滤去不溶物，收集过滤清液，加40-400mL水充分析出几丁质，收集几丁质，干燥后称量并计算提取率；将上述步骤中含有强极性有机试剂的混合液通过离心收集至溶剂回收装置，加热回收。该方法可有效提取虾壳粉中的几丁质，提取率可达到15.26%，条件温和、操作简单，且试剂可回收利用。
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公开(公告)号：CN110029097A
公开(公告)日：2019-07-19
申请号：CN201910243768.4
申请日：2019-03-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种糖苷水解酶CmNAGase及其克隆表达与应用。将从土壤中筛到的菌株Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1进行基因组测序分析、克隆CmNAGase、构建重组菌株、表达CmNAGase蛋白、纯化HIS-TAG，并鉴定重组蛋白具有糖苷水解酶的性质，在高温环境下仍保证良好的酶活性，属于内切酶，且能分别向几丁二糖、几丁三糖、几丁四糖、几丁五糖和几丁六糖的糖链转移一个乙酰氨基基葡萄糖使其糖链长度增加，可通过酶工程、合成生物学对其进行分子改造使该酶的酶促反应的方向朝增加糖链的方向进行，为人工合成几丁寡糖奠定基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116949078A
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202310726503.6
申请日：2023-06-19
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本申请公开了一种高产假尿苷的工程菌的构建方法及其应用，首先在基因工程菌E.coli中，过表达了假尿苷5‑磷酸糖苷酶和假尿苷磷酸酶构建了假尿苷合成路径，同时过表达了大肠杆菌磷酸戊糖途径中的葡萄糖6‑磷酸脱氢酶和葡萄糖酸6‑磷酸脱氢酶增强了体内的5‑磷酸核糖的供给构建了可利用葡萄糖和尿嘧啶作为底物生产假尿苷的基因工程菌。最适发酵温度为20℃，最适发酵pH为8，IPTG浓度为0.6 mM时，发酵假尿苷最高产量可达39.6 g/L。本发明所述的方法可代替方法目前化学法和酶法，避免了生产假尿苷造成的环境污染以及酶催化法做以及使用底物成本高的问题。
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公开(公告)号：CN112553183B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202011509092.8
申请日：2020-12-18
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种糖苷水解酶CmChi3及其在降解胶体几丁质上的应用。将从土壤中筛选到的菌株Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC‑H1进行基因组测序分析、克隆CmChi3、构建重组菌株、表达CmChi3蛋白、纯化HIS‑TAG、并鉴定重组蛋白具有两个催化结构域，两个几丁质结合域，具有内切酶和糖苷水解酶两种酶的性质，能高效水解几丁质并以GlcNAc为终产物。此研究预期为单酶法高效生产GlcNAc提供理论依据和基础。
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公开(公告)号：CN110656140A
公开(公告)日：2020-01-07
申请号：CN201910974341.1
申请日：2019-10-14
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法。该方法包括如下步骤：（1）利用微生物发酵获得几丁质酶；（2）称取适量几丁质，加入碱溶液中并搅拌分散，在适宜冻融模式处理下，取出室温融化，煮沸析出几丁质后离心去上清，利用PBS（pH 7.0）缓冲液搅拌重悬，清洗pH至中性；（3）吸取预处理几丁质和几丁质酶于水浴锅中反应，反应结束后，测定还原糖含量。与现有技术相比，本发明方法通过改性处理几丁质，提高几丁质与其酶的附着力，转化效率是未处理的11.01倍，且用时间较短，操作简单，污染较小，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN109880859A
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201910256808.9
申请日：2019-04-01
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种固定化赖氨酸脱羧酶生产戊二胺的方法。该方法通过将几丁质结合域（ChBD）基因接至赖氨酸脱羧酶基因（CadA）N端构建得融合蛋白，并将该融合蛋白发酵得赖氨酸脱羧酶粗酶液，再向粗酶液中加入几丁质，即得固定化的赖氨酸脱羧酶，最后将所得固定化酶参与L-赖氨酸的脱羧反应制备1，5-戊二胺。本发明巧妙利用底物几丁质与融合蛋白的特异性亲和作用来吸附赖氨酸脱羧酶，固定化载体几丁质成本低廉，固定化效率高，酶的活力稳定性较好，同时特异性的亲和吸附可省去蛋白纯化的步骤。本发明提供一种重复生产1，5-戊二胺的方法，可降低成生产成本并简化下游产品与酶的分离步骤，具有显著的经济效益。
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公开(公告)号：CN109735452A
公开(公告)日：2019-05-10
申请号：CN201910225398.1
申请日：2019-03-25
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明属于生物反应器领域，具体涉及一种膜管布气的气升式生物反应器及其应用。该生物反应器既可以通过外循环进行发酵，也可以通过通过内循环进行发酵，结构简单，解决搅拌式生物反应器在气液传质过程中，气液传质效率低，剪切力大。特别在高耗氧培养，对剪切力敏感的体系中。本发明是将膜管更好的应用于生物反应器中，气泡可达1000μm以下，实现微小气泡产生，布气均匀，提高气液气液传质，提高体积溶氧系数，增加气含率，其体积溶氧系数比传统的环状布气气升式生物反应器提高30%，具有良好的应用前景。
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