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公开(公告)号：CN110511971A
公开(公告)日：2019-11-29
申请号：CN201910601859.0
申请日：2019-07-05
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12P19/26
Abstract: 本发明公开了一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，该方法包括如下步骤：（1）利用微生物发酵产几丁质酶，获得浓缩酶液；（2）称取几丁质粉末，依次加入纯水和磷酸缓冲液，再加入几丁质酶进行超声辅助酶解反应；（3）待反应结束后，向超声辅助酶解组中加入DNS，煮沸5min，测定还原糖含量。该方法的优点在于利用超声手段快速简单地获得大量的N-乙酰氨基葡萄糖，相比未处理的酶解几丁质法，前者的效率更高，获得的最高转化效率是未处理的2.9倍。且该方法所用时间较短，耗材少，操作简单，酶解效率高，无化学污染，环境友好，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN109810966A
公开(公告)日：2019-05-28
申请号：CN201910242877.4
申请日：2019-03-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明涉及一种几丁质酶CmChi6基因及其克隆表达与应用。本发明首次克隆出具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的外切几丁质酶CmChi6基因，并获得了高活性外切几丁质酶，其制备方法简单，生产成本低，产品易保存，适宜的酶解温度为45℃，酶解最适pH为7.4，在25-50℃时热稳定性良好，33 h仍保持60%以上酶活；最适pH 7.4，在pH7.0-10.0，33h酶活仍保持75％以上；Ba2+对CmChi6活力具有稍微的激活作用；CmChi6对胶体几丁质具有高降解活性，可用该酶制备几丁二糖，转化率高，能源消耗少，环境友好，在工业化降解几丁质应用中具有重要的经济价值。
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公开(公告)号：CN110029097B
公开(公告)日：2022-09-02
申请号：CN201910243768.4
申请日：2019-03-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种糖苷水解酶CmNAGase及其克隆表达与应用。将从土壤中筛到的菌株Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC‑H1进行基因组测序分析、克隆CmNAGase、构建重组菌株、表达CmNAGase蛋白、纯化HIS‑TAG，并鉴定重组蛋白具有糖苷水解酶的性质，在高温环境下仍保证良好的酶活性，属于内切酶，且能分别向几丁二糖、几丁三糖、几丁四糖、几丁五糖和几丁六糖的糖链转移一个乙酰氨基基葡萄糖使其糖链长度增加，可通过酶工程、合成生物学对其进行分子改造使该酶的酶促反应的方向朝增加糖链的方向进行，为人工合成几丁寡糖奠定基础。
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公开(公告)号：CN110075809B
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN201910326943.6
申请日：2019-04-23
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开一种提高粉粒几丁质对酶蛋白的吸附能力的方法及其应用。将粉粒几丁质通过高压均质机处理后得到纤维直径为纳米级的几丁质纤维，用于吸附带有几丁质结合域蛋白（ChBD）的融合酶，经过一系列的条件优化后发现，预处理后的几丁质纤维对酶蛋白的吸附效果相较未处理几丁质粉末有了较大提升。本发明提供一种改进常规粉粒几丁质对酶蛋白吸附能力的方法，该方法绿色环保不涉及强酸强碱的使用，制备得到的几丁质纤维具有直径小、比较面积大、结合蛋白能力强的特点，在酶的固定化材料领域具有较好的应用与发展前景。
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公开(公告)号：CN110241157A
公开(公告)日：2019-09-17
申请号：CN201910606447.6
申请日：2019-07-05
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种六氟异丙醇预处理辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法。该方法通过六氟异丙醇溶剂对几丁质进行预处理，并对处理后的几丁质粉末洗涤后，再与几丁质粗酶液混合，最后通过降解反应得到N-乙酰氨基葡萄糖。本发明利用六氟异丙醇预处理几丁质可以大大提高几丁质酶降解效率，短时间得到大量N-乙酰氨基葡萄糖。本发明使用的六氟异丙醇溶剂沸点低，易回收，对环境友好，同时处理温度较低，具有显著的经济效益，应用前景广阔。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110075809A
公开(公告)日：2019-08-02
申请号：CN201910326943.6
申请日：2019-04-23
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开一种提高粉粒几丁质对酶蛋白的吸附能力的方法及其应用。将粉粒几丁质通过高压均质机处理后得到纤维直径为纳米级的几丁质纤维，用于吸附带有几丁质结合域蛋白（ChBD）的融合酶，经过一系列的条件优化后发现，预处理后的几丁质纤维对酶蛋白的吸附效果相较未处理几丁质粉末有了较大提升。本发明提供一种改进常规粉粒几丁质对酶蛋白吸附能力的方法，该方法绿色环保不涉及强酸强碱的使用，制备得到的几丁质纤维具有直径小、比较面积大、结合蛋白能力强的特点，在酶的固定化材料领域具有较好的应用与发展前景。
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公开(公告)号：CN109943582A
公开(公告)日：2019-06-28
申请号：CN201910257075.0
申请日：2019-04-01
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于多巴胺脱羧酶催化产多巴胺的方法，该方法具体包括以下步骤：构建表达多巴脱羧酶（DDC）的基因工程菌BL21（DE3）/pET28a-DDC；培养基因工程菌BL21（DE3）/pET28a-DDC并诱导表达DDC；收集上述菌体，用缓冲液重悬菌体后，超声破碎，离心去除杂质，得DDC的粗酶液；以多巴为底物，加入0.1-1mM磷酸吡哆醛后调节反应体系的pH，加入DDC粗酶液反应得产物多巴胺。本发明方法是首次系统的做出从多巴到多巴胺的酶催化生产工艺，催化效率高达7.4g/l，转化率高达95％以上，环境友好，原料易得，生产成本低，工艺简单，反应条件温和，具有很好的工业化生产前景。
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公开(公告)号：CN109880859A
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201910256808.9
申请日：2019-04-01
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种固定化赖氨酸脱羧酶生产戊二胺的方法。该方法通过将几丁质结合域（ChBD）基因接至赖氨酸脱羧酶基因（CadA）N端构建得融合蛋白，并将该融合蛋白发酵得赖氨酸脱羧酶粗酶液，再向粗酶液中加入几丁质，即得固定化的赖氨酸脱羧酶，最后将所得固定化酶参与L-赖氨酸的脱羧反应制备1，5-戊二胺。本发明巧妙利用底物几丁质与融合蛋白的特异性亲和作用来吸附赖氨酸脱羧酶，固定化载体几丁质成本低廉，固定化效率高，酶的活力稳定性较好，同时特异性的亲和吸附可省去蛋白纯化的步骤。本发明提供一种重复生产1，5-戊二胺的方法，可降低成生产成本并简化下游产品与酶的分离步骤，具有显著的经济效益。
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公开(公告)号：CN111647099B
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN202010654591.X
申请日：2020-07-09
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种从废弃小龙虾壳中制备几丁质纳米纤维的方法。该方法的步骤如下：废弃的小龙虾壳经过分拣，除去油脂及附着物，清洗后烘干并磨成虾壳粉；称取虾壳粉0.2‑1g，加入4‑20的强极性有机试剂在室温下进行搅拌溶解，搅拌转速应不低于1200 rpm，搅拌时间不低于12 h；溶解结束后，加入4‑20mL强极性有机试剂稀释，并滤去不溶物，收集过滤清液，加40‑400mL水充分析出几丁质，收集几丁质，干燥后称量并计算提取率；将上述步骤中含有强极性有机试剂的混合液通过离心收集至溶剂回收装置，加热回收。该方法可有效提取虾壳粉中的几丁质，提取率可达到15.26%，条件温和、操作简单，且试剂可回收利用。
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公开(公告)号：CN109810966B
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN201910242877.4
申请日：2019-03-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明涉及一种几丁质酶CmChi6基因及其克隆表达与应用。本发明首次克隆出具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的外切几丁质酶CmChi6基因，并获得了高活性外切几丁质酶，其制备方法简单，生产成本低，产品易保存，适宜的酶解温度为45℃，酶解最适pH为7.4，在25‑50℃时热稳定性良好，33 h仍保持60%以上酶活；最适pH 7.4，在pH7.0‑10.0，33h酶活仍保持75％以上；Ba2+对CmChi6活力具有稍微的激活作用；CmChi6对胶体几丁质具有高降解活性，可用该酶制备几丁二糖，转化率高，能源消耗少，环境友好，在工业化降解几丁质应用中具有重要的经济价值。
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