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公开(公告)号：CN112920247B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202110088599.9
申请日：2021-01-22
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种利用糖苷酶和氧胺化合物修饰DNA的方法，包括如下步骤：固相合成带有非典型碱基的DNA链；该带有非典型碱基的DNA链在选择性识别非典型碱基的糖苷酶的催化下，反应产生带有缺碱基位点的DNA链；带有缺碱基位点的DNA链与氧胺化合物反应，生成带有化学官能团修饰的DNA。该方法可以实现对DNA进行多样化定点修饰，对功能DNA的碱基结构‑功能关系进行研究，构建更强活性的功能DNA。本方法简单易用，可以降低修饰的成本，减少修饰所需的时间；修饰后的功能DNA活性更高，能够为生物技术和疾病诊疗提供更好的工具分子。
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公开(公告)号：CN114317677A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202111561034.4
申请日：2021-12-15
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种通过体外筛选产生对RNA进行可变剪接分子工具的方法。属于生物医药领域，具体步骤：利用脱氧核酶对前体mRNA进行可变剪接，产生两个待连接片段；利用具有RNA连接活性的脱氧核酶对片段进行连接，形成成熟的RNA，验证脱氧核酶进行体外剪接的可行性；利用具有RNA切割活性的脱氧核酶切除目的前体信使RNA的一个内含子，产生两个待连接的RNA片段；通过体外筛选的技术手段获得具有RNA连接酶活性的苏糖核酸酶；利用苏糖核酸酶连接两个外显子，产生有功能的信使RNA；苏糖核酸酶较天然核酸酶具有稳定性好，不易降解，安全低毒等优点。本发明有效地实现RNA的剪接，为治疗由RNA剪接错误导致的疾病提供一种分子工具。
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公开(公告)号：CN119587705A
公开(公告)日：2025-03-11
申请号：CN202411792266.4
申请日：2024-12-06
Applicant: 江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院) , 南京大学
IPC: A61K47/54 , A61K47/60 , A61K31/4745 , A61P35/00 , A61P15/14
Abstract: 本发明提供了一种靶向三阴性乳腺癌的适体偶联物及其制备方法与应用。本发明利用细胞内化筛选技术鉴定出能够靶向内化进入三阴性乳腺癌细胞的非天然核酸适体，进一步通过pH响应的可降解连接子CL2A将适体与细胞毒性剂进行偶联，构建基于非天然核酸的适体偶联物，该适体偶联物能特异性靶向并内化进入三阴性乳腺癌细胞，精准释放细胞毒性剂。本发明适体偶联物在三阴性乳腺癌荷瘤鼠体内能较好的靶向肿瘤灶，并高效抑制三阴性乳腺癌荷瘤鼠肿瘤的生长，同时无明显的生物学毒性，为三阴性乳腺癌的靶向治疗提供了新的手段。
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公开(公告)号：CN117701657A
公开(公告)日：2024-03-15
申请号：CN202311347519.2
申请日：2023-10-18
Applicant: 南京大学
IPC: C12P19/34 , G01N27/447 , G01N21/64
Abstract: 本发明公开了一种酶促引入苏糖核酸以提高DNA折纸生物稳定性的方法；属于核酸纳米技术和非天然核酸应用领域，步骤：利用末端脱氧核苷酸转移酶在单链DNA的3’末端延伸苏糖核酸，鉴定出当单体为苏糖鸟苷三磷酸时，相应单链产物的抗Exo I降解能力获得提升，P‑tG在14h时仅降解30％，而未进行末端TNA延伸的单链DNA在5min时便降解70％；利用TdT和tGTP同时在多条DNA订书钉链的3’末端延伸TNA，形成含有TNA的DNA折纸；比较DON和DON‑tG的稳定性，在12h时，DON仅剩约20％，DON‑tG仍有约80％；本发明相比于未进行末端TNA延伸的单链DNA，P‑tG显示了最高的抗Exo I降解能力，使用tGTP对DNA订书钉链进行延伸后，延伸产物与DNA骨架链退火所形成的DON‑tG在10％FBS存在下显示了比未保护DNA折纸更高的稳定性。
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公开(公告)号：CN114317545B
公开(公告)日：2023-12-15
申请号：CN202210058295.2
申请日：2022-01-19
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/115 , C12Q1/6886 , A61K45/00 , A61K47/26 , A61K47/54 , A61K49/00 , A61P13/10 , A61P35/00
Abstract: 本发明涉及一种核酸适体及其应用，所述核酸适体为能够特异性地识别膀胱肿瘤细胞，并且能够内化进入膀胱肿瘤细胞内的核酸适体。该核酸适体的特异性、内化力以及稳定性均好，可以用作检测及标记肿瘤细胞的分子工具，还可将该靶向性较强的核酸适体与具有治疗效果的药物结合应用，可定向作用于肿瘤细胞中，提高对肿瘤细胞的治疗效果，减少了目前抗肿瘤药物特异(56)对比文件王瑶.化学修饰功能核酸的筛选与应用研究《.中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）基础科学辑》.2022,(第5期),A006-29.Fjelstrup S 等.Differential RNAaptamer affinity profiling on plasma as apotential diagnostic tool for bladdercancer《.NAR Cancer》.2022,第4卷(第3期),1-11.Zhang Y 等.Recent Advances in AptamerDiscovery and Applications《.Molecules》.2019,第25卷(第5期),1-22.Wang Y 等.Development of NovelAptamer-Based Targeted Chemotherapy forBladder Cancer《.Cancer Res》.2022,第82卷(第6期),1128-1139.
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109295187B
公开(公告)日：2021-02-09
申请号：CN201811284679.6
申请日：2018-10-31
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/6869
Abstract: 本发明公开了一种基于纳米孔对非天然核酸直接测序的错位测序方法，包括以下步骤：(1)通过固相合成非天然核酸待测序链，通过酶促连接的方法，将非天然核酸待测序链与DNA引导测序链连接起来，作为完整的待测序链；(2)制备具有单分子分辨能力的纳米传感孔道；(3)将待测序链和DNA引物混合，变性退火构建测序文库，然后与核酸聚合酶一起加入纳米孔的cis室，在电场力作用下核酸链通过纳米孔，读取核酸链过孔时产生的电信号，解析信号得到序列。相对于现有技术，本发明利用低成本的、高效的纳米孔测序方法，首次对连续非天然核酸链实现直接测序。
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公开(公告)号：CN114592022A
公开(公告)日：2022-06-07
申请号：CN202210322009.9
申请日：2022-03-30
Applicant: 南京大学
IPC: C12P19/34 , C12N15/113 , C12N15/115 , C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种基于DNA模板的长链TNA合成方法。该方法属于非天然核酸合成技术领域，具体步骤：获得DNA模板及对应引物；配置TNA引物延伸的反应体系；特定温度下进行以DNA为模板的TNA引物延伸反应；取小部分反应产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)实验，检验引物延伸反应是否成功进行；TNA产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验，分离模板DNA和TNA，切胶回收TNA。相比于固相合成，本发明可以有效地合成长达300nt的TNA，大幅提高了TNA合成的长度上限，并降低了合成的成本。为较长的TNA合成提供了优良的合成方式，支持了TNA在分子生物学中的研究和应用。
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公开(公告)号：CN111500572B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202010319823.6
申请日：2020-04-22
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/10 , C12N15/115
Abstract: 本发明公开了一种基于毛细管电泳筛选非天然核酸适体的方法，包括以下步骤：首先合成初始DNA分子随机文库和引物，然后进行循环筛选。在每一轮筛选里，采用引物延伸的方法获得非天然核酸文库，以CTLA‑4为靶蛋白，将非天然核酸文库与靶蛋白共孵育，利用CE‑LIF方法分离结合靶蛋白的非天然核酸分子，然后进行逆转录和PCR扩增，获得富集DNA分子文库，并应用于下一轮筛选。如此重复筛选若干轮，对富集DNA分子进行测序，可推断得到非天然核酸分子的序列信息。最后制备单链非天然核酸分子，测试其与靶蛋白结合的亲和力，获得有特异性的非天然核酸适体。本发明方法能够高效筛选出高亲和力和稳定性的非天然核酸适体，有利于提高功能性核酸在生物环境下的作用效果。
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公开(公告)号：CN114317684A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202111533253.1
申请日：2021-12-15
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/6825 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种基于TNA分子的细胞内镁离子成像的方法。属于金属离子成像技术领域，具体步骤：体外筛选镁离子依赖的具有RNA切割活性的TNA分子；对筛选获得的TNA分子序列进行活性测试及截短分析；选择其中活性最高的TNA分子进行生物化学表征；将TNA分子切割体系构建为镁离子荧光传感器；在体外缓冲液中验证该荧光传感器的性能；将该传感器转染至细胞中进行体内镁离子的成像。本发明可以有效地在体外对不同浓度的镁离子进行荧光响应，检测限达到0.35mM，并且可在活细胞内对镁离子进行荧光成像，比利用天然核酸进行检测的方法更稳定，更耐核酸酶的降解，为分子生物学提供了新的工具。
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公开(公告)号：CN113278607A
公开(公告)日：2021-08-20
申请号：CN202110422936.3
申请日：2021-04-20
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种核酸适配体整合的环状单链DNA的制备方法及其在DNA折纸术中的应用。属于DNA纳米技术及生物学应用领域，主要步骤包括：(1.1)、构建含有核酸适配体序列的环状双链重组噬菌粒；(1.2)、将构建的环状双链重组噬菌粒转化大肠杆菌感受态细胞；提取具有核酸适配体整合的环状单链DNA。本发明所述的一种核酸适配体整合的环状单链DNA的制备方法可以设计和生产由用户自定义的骨架链序列，以在用户定义的位置添加各种功能序列，并且突破了传统DNA折纸结构功能化的效率和稳定性低的问题。
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