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公开(公告)号：CN114317684B
公开(公告)日：2023-12-26
申请号：CN202111533253.1
申请日：2021-12-15
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/6825 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种基于TNA分子的细胞内镁离子成像的方法。属于金属离子成像技术领域，具体步骤：体外筛选镁离子依赖的具有RNA切割活性的TNA分子；对筛选获得的TNA分子序列进行活性测试及截短分析；选择其中活性最高的TNA分子进行生物化学表征；将TNA分子切割体系构建为镁离子荧光传感器；在体外缓冲液中验证该荧光传感器的性能；将该传感器转染至细胞中进行体内镁离子的成像。本发明可以有效地在体外对不同浓度的镁离子进行荧光响应，检测限达到0.35mM，并且可在活细胞内对镁离子进行荧光成像，比利用天然核酸进行检测的方法更稳定，更耐核酸酶的降解，为分子生物学提供了新的工具。
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公开(公告)号：CN115372331A
公开(公告)日：2022-11-22
申请号：CN202211171658.X
申请日：2022-09-26
Applicant: 南京大学
IPC: G01N21/64 , C12N15/113 , C12P19/34
Abstract: 本发明公开了一种基于化学修饰后的脱氧核酶成像活细胞内镁离子的方法。属于金属离子成像技术领域，步骤：对脱氧核酶10‑23进行化学修饰，筛选获得在其催化环8号位点修饰羧基(Ca)12号位点修饰苯环(Bn)的脱氧核酶10‑23(CaBn)；进行生物化学表征及对比；构建响应镁离子的荧光传感器；对其性能进行表征；应用于活细胞中进行细胞内镁离子的成像。对比野生型，本发明在更低浓度的镁离子条件下也能催化切割反应；故由其构建成的荧光传感器可更加有效地在体外对更低浓度的镁离子进行荧光响应，检测限达到0.03mM；此外，该荧光传感器可在活细胞内对细胞内源性镁离子进行荧光成像，为分子生物学领域提供了一种新的分子工具。
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公开(公告)号：CN108707601A
公开(公告)日：2018-10-26
申请号：CN201810581512.X
申请日：2018-06-07
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/10
CPC classification number: C12N15/1027
Abstract: 本发明公开了一种序列及长度定制化的环状单链DNA的制备方法及其在DNA折纸术中的应用，本发明的一种序列及长度定制化的环状单链DNA的制备方法，包括如下步骤：(1)设计并合成环状的双链重组噬菌粒；(2)重组噬菌粒转化大肠杆菌，并通过辅助噬菌体侵染，制备对应形式的环状单链DNA；(3)以制备的ssDNA作为骨架链分别组装不同的折纸结构，并通过原子力显微镜成像进行表征。本发明的方法不针对某种特定的DNA，可以根据应用需求设计出多种具有不同碱基序列及长度的单链DNA，从而实现定制化。
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公开(公告)号：CN114317684A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202111533253.1
申请日：2021-12-15
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/6825 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种基于TNA分子的细胞内镁离子成像的方法。属于金属离子成像技术领域，具体步骤：体外筛选镁离子依赖的具有RNA切割活性的TNA分子；对筛选获得的TNA分子序列进行活性测试及截短分析；选择其中活性最高的TNA分子进行生物化学表征；将TNA分子切割体系构建为镁离子荧光传感器；在体外缓冲液中验证该荧光传感器的性能；将该传感器转染至细胞中进行体内镁离子的成像。本发明可以有效地在体外对不同浓度的镁离子进行荧光响应，检测限达到0.35mM，并且可在活细胞内对镁离子进行荧光成像，比利用天然核酸进行检测的方法更稳定，更耐核酸酶的降解，为分子生物学提供了新的工具。
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公开(公告)号：CN113278607A
公开(公告)日：2021-08-20
申请号：CN202110422936.3
申请日：2021-04-20
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种核酸适配体整合的环状单链DNA的制备方法及其在DNA折纸术中的应用。属于DNA纳米技术及生物学应用领域，主要步骤包括：(1.1)、构建含有核酸适配体序列的环状双链重组噬菌粒；(1.2)、将构建的环状双链重组噬菌粒转化大肠杆菌感受态细胞；提取具有核酸适配体整合的环状单链DNA。本发明所述的一种核酸适配体整合的环状单链DNA的制备方法可以设计和生产由用户自定义的骨架链序列，以在用户定义的位置添加各种功能序列，并且突破了传统DNA折纸结构功能化的效率和稳定性低的问题。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112680504A
公开(公告)日：2021-04-20
申请号：CN202011404585.5
申请日：2020-12-04
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/6841
Abstract: 本发明公开了一种外泌体内多种miRNA特异性检测方法，包括如下步骤：构建非天然核酸框架探针结构；将所述非天然核酸框架探针结构与外泌体样品共孵育，通过荧光分析检测多种miRNA。该结构可以实现对外泌体内多种miRNA的特异性检测：将非天然核酸框架探针与外泌体共孵育，前者进入外泌体后可对多种miRNA进行检测。在无目标miRNA的环境中，纳米夹子保持关闭，无荧光信号；当检测到目标miRNA时，夹子打开并产生荧光信号。本方法可以有效地原位检测外泌体内miRNA，避免对外泌体结构的破坏；可以同时检测多种miRNA，提高检测的效率；并具有抗酶降解等特性，可应用于临床外泌体诊断。
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公开(公告)号：CN112920247B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202110088599.9
申请日：2021-01-22
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种利用糖苷酶和氧胺化合物修饰DNA的方法，包括如下步骤：固相合成带有非典型碱基的DNA链；该带有非典型碱基的DNA链在选择性识别非典型碱基的糖苷酶的催化下，反应产生带有缺碱基位点的DNA链；带有缺碱基位点的DNA链与氧胺化合物反应，生成带有化学官能团修饰的DNA。该方法可以实现对DNA进行多样化定点修饰，对功能DNA的碱基结构‑功能关系进行研究，构建更强活性的功能DNA。本方法简单易用，可以降低修饰的成本，减少修饰所需的时间；修饰后的功能DNA活性更高，能够为生物技术和疾病诊疗提供更好的工具分子。
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公开(公告)号：CN114317677A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202111561034.4
申请日：2021-12-15
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种通过体外筛选产生对RNA进行可变剪接分子工具的方法。属于生物医药领域，具体步骤：利用脱氧核酶对前体mRNA进行可变剪接，产生两个待连接片段；利用具有RNA连接活性的脱氧核酶对片段进行连接，形成成熟的RNA，验证脱氧核酶进行体外剪接的可行性；利用具有RNA切割活性的脱氧核酶切除目的前体信使RNA的一个内含子，产生两个待连接的RNA片段；通过体外筛选的技术手段获得具有RNA连接酶活性的苏糖核酸酶；利用苏糖核酸酶连接两个外显子，产生有功能的信使RNA；苏糖核酸酶较天然核酸酶具有稳定性好，不易降解，安全低毒等优点。本发明有效地实现RNA的剪接，为治疗由RNA剪接错误导致的疾病提供一种分子工具。
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公开(公告)号：CN119064576A
公开(公告)日：2024-12-03
申请号：CN202411059105.4
申请日：2024-08-02
Applicant: 江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院) , 南京大学
IPC: G01N33/569 , G01N21/64 , G01N33/574 , G01N33/531 , C12N15/115
Abstract: 本发明提供了一种用于HER2相关外泌体的检测方法及其应用本发明应用。借助于双DNA四面体纳米材料检测样品中HER2相关外泌体的浓度，相比于传统方法，对HER2相关外泌体具有更好的富集作用，从而为精准的浓度检测提供了有效的手段。借助于以上富集手段检测样本，结果发现人血清中HER2相关外泌体水平的升高与HER2阳性乳腺癌的发生发展关系密切。借助于更为精准的检测，利用双DNA四面体纳米材料能够对HER2阳性乳腺癌起到筛查、诊断、转移、预后评估的作用，并且对不同HER2表达水平的乳腺癌患者起到鉴别作用。
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公开(公告)号：CN112920247A
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202110088599.9
申请日：2021-01-22
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种利用糖苷酶和氧胺化合物修饰DNA的方法，包括如下步骤：固相合成带有非典型碱基的DNA链；该带有非典型碱基的DNA链在选择性识别非典型碱基的糖苷酶的催化下，反应产生带有缺碱基位点的DNA链；带有缺碱基位点的DNA链与氧胺化合物反应，生成带有化学官能团修饰的DNA。该方法可以实现对DNA进行多样化定点修饰，对功能DNA的碱基结构‑功能关系进行研究，构建更强活性的功能DNA。本方法简单易用，可以降低修饰的成本，减少修饰所需的时间；修饰后的功能DNA活性更高，能够为生物技术和疾病诊疗提供更好的工具分子。
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