公开(公告)号：CN111500572B

公开(公告)日：2022-04-22

申请号：CN202010319823.6

申请日：2020-04-22

Applicant: 南京大学

Inventor： 于涵洋 ,  郑鹏 ,  连恩晓

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/115

Abstract: 本发明公开了一种基于毛细管电泳筛选非天然核酸适体的方法，包括以下步骤：首先合成初始DNA分子随机文库和引物，然后进行循环筛选。在每一轮筛选里，采用引物延伸的方法获得非天然核酸文库，以CTLA‑4为靶蛋白，将非天然核酸文库与靶蛋白共孵育，利用CE‑LIF方法分离结合靶蛋白的非天然核酸分子，然后进行逆转录和PCR扩增，获得富集DNA分子文库，并应用于下一轮筛选。如此重复筛选若干轮，对富集DNA分子进行测序，可推断得到非天然核酸分子的序列信息。最后制备单链非天然核酸分子，测试其与靶蛋白结合的亲和力，获得有特异性的非天然核酸适体。本发明方法能够高效筛选出高亲和力和稳定性的非天然核酸适体，有利于提高功能性核酸在生物环境下的作用效果。

公开(公告)号：CN111500572A

公开(公告)日：2020-08-07

申请号：CN202010319823.6

申请日：2020-04-22

Applicant: 南京大学

Inventor： 于涵洋 ,  郑鹏 ,  连恩晓

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/115

Abstract: 本发明公开了一种基于毛细管电泳筛选非天然核酸适体的方法，包括以下步骤：首先合成初始DNA分子随机文库和引物，然后进行循环筛选。在每一轮筛选里，采用引物延伸的方法获得非天然核酸文库，以CTLA-4为靶蛋白，将非天然核酸文库与靶蛋白共孵育，利用CE-LIF方法分离结合靶蛋白的非天然核酸分子，然后进行逆转录和PCR扩增，获得富集DNA分子文库，并应用于下一轮筛选。如此重复筛选若干轮，对富集DNA分子进行测序，可推断得到非天然核酸分子的序列信息。最后制备单链非天然核酸分子，测试其与靶蛋白结合的亲和力，获得有特异性的非天然核酸适体。本发明方法能够高效筛选出高亲和力和稳定性的非天然核酸适体，有利于提高功能性核酸在生物环境下的作用效果。