公开(公告)号：CN112972673A

公开(公告)日：2021-06-18

申请号：CN202110142607.3

申请日：2021-02-02

Applicant: 兰州大学

Inventor： 祝秉东 ,  杜秀芬 ,  龚洋 ,  谭大权 ,  何朴 ,  谭继英 ,  牛红霞 ,  李菲

IPC: A61K39/39 ,  A61K39/04 ,  A61K47/59 ,  A61K47/69 ,  A61P31/06

Abstract: 本发明公开了PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒的制备方法，先用化学合成的方法使PLGA和NH2‑PEG形成PLGA‑PEG共聚物，然后用复乳溶剂挥发法(W/O/W)将本实验构建的两个结核分枝杆菌融合蛋白ESAT6‑Rv2626c和Mtb10.4‑HspX(简称为M4)包裹在纳米颗粒中，进而应用聚多巴胺和PolyI:C进行修饰，形成包裹结核分枝杆菌融合蛋白M4的PLGA‑PEG‑PolyI：C(简称为NP)纳米颗粒结核亚单位疫苗NP/M4。采用本发明所提供的纳米颗粒结核亚单位疫苗免疫小鼠后，NP/M4组在HspX蛋白、Rv2626c蛋白刺激后，脾脏淋巴细胞分泌IFN‑γ和IL‑2的水平明显高于PBS组和BCG组，表明NP/M4组可产生较高水平的IFN‑γ和IL‑2；此外，NP/M4组HpsX和Rv2626c特异性IgG和sIgA抗体水平明显高于PBS、BCG和融合蛋白M4组。PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒可辅助抗原诱导细胞免疫和体液免疫，是结核亚单位疫苗理想的佐剂。

公开(公告)号：CN119192393A

公开(公告)日：2024-12-27

申请号：CN202411183513.0

申请日：2024-08-27

Applicant: 兰州大学

Inventor： 祝秉东 ,  党文瑞 ,  龚洋 ,  米友军 ,  李菲 ,  周婷 ,  何朴 ,  杜蕴洁

IPC: C07K19/00 ,  C07K1/18 ,  C07K1/16 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  A61K39/04 ,  A61P31/06

Abstract: 本发明属于医药技术领域，公开了一种结核分枝杆菌融合蛋白LT57构建及其表达纯化方法，将结核分枝杆菌细胞壁抗原Rv0518和结核分枝杆菌PE/PPE家族抗原PE25和PPE41进行融合，中间以柔性肽段连接，构建了融合蛋白PE25‑linker‑PPE41‑Rv0518。将该融合蛋白在原核表达载体E.coli BL21(DE3)中进行表达，通过柱层析纯化获得。融合蛋白LT57与佐剂DP联合构建结核亚单位疫苗，在小鼠体内可以诱导产生较强的针对结核杆菌特定抗原的特异性细胞免疫反应，并促进长期的记忆性T细胞的产生，具有较强的免疫原性。本发明成功构建、表达和纯化了新型融合蛋白LT57，可诱导产生抗原特异性细胞免疫和体液免疫。

公开(公告)号：CN112979825A

公开(公告)日：2021-06-18

申请号：CN202110155163.7

申请日：2021-02-04

Applicant: 兰州大学

Inventor： 祝秉东 ,  马岩林 ,  张艺凡 ,  石新彤 ,  杜秀芬 ,  谭大权 ,  牛红霞 ,  李菲 ,  龚洋

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/70 ,  C07K1/20 ,  C07K1/18 ,  C07K1/14 ,  A61K39/04 ,  A61K39/39 ,  A61P31/06

Abstract: 本发明公开了结核分枝杆菌融合蛋白LT29的表达纯化方法，将结核分枝杆菌活动期抗原EAST6和结核分支杆菌潜伏期抗原Rv2626c进行融合，中间以柔性肽段连接，构建了融合蛋白ESAT6‑linker‑Rv2626c。将该融合蛋白在大肠埃希菌B21工程菌中进行表达纯化，与佐剂DP联合构建结核亚单位疫苗。该融合蛋白在大肠杆菌中成功得到表达纯化；在小鼠体内可以诱导产生较强的针对结核杆菌特定抗原(ESAT6和Rv2626c)的特异性细胞免疫反应，并促进较长期的记忆性T细胞的产生，具有较强的免疫原性。本发明成功构建、表达和纯化了不带标签的新型融合蛋白LT29，该蛋白融合了结核菌活动期抗原和潜伏期抗原，可诱导产生抗原特异性细胞免疫和体液免疫，有望成为结核病预防和治疗的有效候选疫苗。

公开(公告)号：CN112972673B

公开(公告)日：2023-04-11

申请号：CN202110142607.3

申请日：2021-02-02

Applicant: 兰州大学

Inventor： 祝秉东 ,  杜秀芬 ,  龚洋 ,  谭大权 ,  何朴 ,  谭继英 ,  牛红霞 ,  李菲

IPC: A61K39/39 ,  A61K39/04 ,  A61K47/59 ,  A61K47/69 ,  A61P31/06

Abstract: 本发明公开了PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒的制备方法，先用化学合成的方法使PLGA和NH2‑PEG形成PLGA‑PEG共聚物，然后用复乳溶剂挥发法(W/O/W)将本实验构建的两个结核分枝杆菌融合蛋白ESAT6‑Rv2626c和Mtb10.4‑HspX(简称为M4)包裹在纳米颗粒中，进而应用聚多巴胺和PolyI:C进行修饰，形成包裹结核分枝杆菌融合蛋白M4的PLGA‑PEG‑PolyI：C(简称为NP)纳米颗粒结核亚单位疫苗NP/M4。采用本发明所提供的纳米颗粒结核亚单位疫苗免疫小鼠后，NP/M4组在HspX蛋白、Rv2626c蛋白刺激后，脾脏淋巴细胞分泌IFN‑γ和IL‑2的水平明显高于PBS组和BCG组，表明NP/M4组可产生较高水平的IFN‑γ和IL‑2；此外，NP/M4组HpsX和Rv2626c特异性IgG和sIgA抗体水平明显高于PBS、BCG和融合蛋白M4组。PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒可辅助抗原诱导细胞免疫和体液免疫，是结核亚单位疫苗理想的佐剂。

公开(公告)号：CN116987739A

公开(公告)日：2023-11-03

申请号：CN202310177138.8

申请日：2023-02-28

Applicant: 兰州大学

Inventor： 祝秉东 ,  王娟 ,  米友军 ,  谢涛 ,  徐昆 ,  龚洋 ,  何朴 ,  杜蕴杰 ,  张丹 ,  刘昱淇

IPC: C12N15/866 ,  C12N15/64 ,  C12N15/44 ,  C12N15/62 ,  C07K14/11 ,  C07K19/00 ,  A61K39/04 ,  A61K39/39 ,  A61P31/06

Abstract: 本发明提供一种包含结核分枝杆菌抗原的重组病毒样颗粒的制备方法，步骤如下：在双表达载体的pPH启动子后面插入序列表中SEQ ID No.6，在pP10启动子后面插入序列表中SEQ ID No.7，得到pFastBacDual‑MS质粒；将LT20融合蛋白通过NdeⅠ和EcoRⅠ酶构建入pFastBacDual‑MS质粒中，得到重组质粒pFastBacDual‑MS‑L20；然后转化至DH10BacTM大肠杆菌菌株，转座后形成重组杆状病毒质粒Bacmid‑MS‑L20，最后转染ExpiSf9细胞，胞内共表达结构蛋白，自组装形成重组病毒样颗粒。本发明的病毒样颗粒能够制备结核亚单位疫苗。