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公开(公告)号：CN112250738B
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202010912170.2
申请日：2020-09-02
Applicant: 兰州大学
IPC: C07K14/165 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供严重急性呼吸综合征冠状病毒2病毒样颗粒的制备方法，包括以下步骤：将pFastBacDual双表达载体改造为三表达载体，将SARS‑CoV‑2的M、S、E基因进行密码子优化，然后将密码子优化的M、S基因依次分别构建至多角体蛋白pPH启动子后，将E基因构建至pP10启动子后，获得表达EMS重组质粒；将EMS重组质粒转化至DH10 BacTM大肠杆菌中，经蓝白筛选挑取白色阳性克隆，提取杆粒转染ExpiSf9TM细胞，胞内共表达E、M、S结构蛋白，自组装形成病毒样颗粒。本发明成功构建了EMS三表达载体，并利用杆状昆虫系统在ExpiSf9TM细胞内成功表达了SARS‑CoV‑2VLPs。
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公开(公告)号：CN112250738A
公开(公告)日：2021-01-22
申请号：CN202010912170.2
申请日：2020-09-02
Applicant: 兰州大学
IPC: C07K14/165 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供严重急性呼吸综合征冠状病毒2病毒样颗粒的制备方法，包括以下步骤：将pFastBacDual双表达载体改造为三表达载体，将SARS‑CoV‑2的M、S、E基因进行密码子优化，然后将密码子优化的M、S基因依次分别构建至多角体蛋白pPH启动子后，将E基因构建至pP10启动子后，获得表达EMS重组质粒；将EMS重组质粒转化至DH10 BacTM大肠杆菌中，经蓝白筛选挑取白色阳性克隆，提取杆粒转染ExpiSf9TM细胞，胞内共表达E、M、S结构蛋白，自组装形成病毒样颗粒。本发明成功构建了EMS三表达载体，并利用杆状昆虫系统在ExpiSf9TM细胞内成功表达了SARS‑CoV‑2VLPs。
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公开(公告)号：CN118436772A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410503188.5
申请日：2024-04-25
Applicant: 兰州大学
IPC: A61K39/04 , A61K39/39 , A61P31/06 , C07K19/00 , C07K1/18 , C07K1/36 , C07K1/34 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了结核亚单位疫苗LT20的制备及应用，发明人选择细胞壁抗原肝素结合血凝黏附素HBHA免疫优势序列(HBHAP109‑199)和结核分枝杆菌菌毛免疫优势序列进行组合，克隆入原核表达载体，表达出无标签的融合蛋白LT20。通过离子交换层析柱纯化出LT20蛋白。采用本发明的亚单位疫苗LT20联合DP佐剂【由双十八烷基二甲基溴化铵和聚肌胞苷酸混合配制成DP佐剂】免疫小鼠，能评价亚单位疫苗的免疫原性和保护效果。本发明的亚单位疫苗LT20联合DP佐剂具有较好的免疫原性和抗分枝杆菌保护效果，应用开发前景较好。
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公开(公告)号：CN116987739A
公开(公告)日：2023-11-03
申请号：CN202310177138.8
申请日：2023-02-28
Applicant: 兰州大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/64 , C12N15/44 , C12N15/62 , C07K14/11 , C07K19/00 , A61K39/04 , A61K39/39 , A61P31/06
Abstract: 本发明提供一种包含结核分枝杆菌抗原的重组病毒样颗粒的制备方法，步骤如下：在双表达载体的pPH启动子后面插入序列表中SEQ ID No.6，在pP10启动子后面插入序列表中SEQ ID No.7，得到pFastBacDual‑MS质粒；将LT20融合蛋白通过NdeⅠ和EcoRⅠ酶构建入pFastBacDual‑MS质粒中，得到重组质粒pFastBacDual‑MS‑L20；然后转化至DH10BacTM大肠杆菌菌株，转座后形成重组杆状病毒质粒Bacmid‑MS‑L20，最后转染ExpiSf9细胞，胞内共表达结构蛋白，自组装形成重组病毒样颗粒。本发明的病毒样颗粒能够制备结核亚单位疫苗。
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