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公开(公告)号:CN107201348B
公开(公告)日:2021-02-12
申请号:CN201710393430.8
申请日:2017-05-27
Applicant: 兰州大学
IPC: C12N9/10 , C12N15/54 , C12N15/70 , G01N33/573 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供细粒棘球绦虫Sigma‑谷胱甘肽S‑转移酶重组蛋白,所述细粒棘球绦虫Sigma‑谷胱甘肽S‑转移酶重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。本发明还提供其可溶性表达方法,应用本发明的方法可实现Sigma‑GST的高水平表达,且表达的重组蛋白质大部分为可溶性蛋白,占大肠杆菌可溶性总蛋白75%。本发明还提供使用HisPur Cobalt(Clontech)亲和层析从大肠杆菌可溶性总蛋白中纯化出高纯度的重组Sigma‑GST的蛋白纯化方法,可制备大量高纯度的细粒棘球绦虫Sigma‑GST。将该纯化蛋白作为包被抗原,可制备得到一种用于检测细粒棘球蚴病的ELISA试剂盒。
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公开(公告)号:CN107201348A
公开(公告)日:2017-09-26
申请号:CN201710393430.8
申请日:2017-05-27
Applicant: 兰州大学
IPC: C12N9/10 , C12N15/54 , C12N15/70 , G01N33/573 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供细粒棘球绦虫Sigma‑谷胱甘肽S‑转移酶重组蛋白,所述细粒棘球绦虫Sigma‑谷胱甘肽S‑转移酶重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。本发明还提供其可溶性表达方法,应用本发明的方法可实现Sigma‑GST的高水平表达,且表达的重组蛋白质大部分为可溶性蛋白,占大肠杆菌可溶性总蛋白75%。本发明还提供使用HisPur Cobalt(Clontech)亲和层析从大肠杆菌可溶性总蛋白中纯化出高纯度的重组Sigma‑GST的蛋白纯化方法,可制备大量高纯度的细粒棘球绦虫Sigma‑GST。将该纯化蛋白作为包被抗原,可制备得到一种用于检测细粒棘球蚴病的ELISA试剂盒。
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公开(公告)号:CN107236027B
公开(公告)日:2020-10-16
申请号:CN201710393428.0
申请日:2017-05-27
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明提供细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白,所述细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。本发明还提供了一种可溶性表达方法,实现了TSP1重组蛋白的高效可溶性表达:表达的重组蛋白质大部分为可溶性蛋白,占大肠杆菌可溶性总蛋白90%;然后用Ni‑NTA His‑Bind(Clontech)预装柱纯化重组细粒棘球绦虫TSP1,得到TSP1纯化蛋白。在使用洗脱缓冲液(500mM/L咪唑,20mM/L Tris,500mM/L NaCI,PH8.0)时可得到一种高纯度的细粒棘球绦虫TSP1。将该纯化蛋白作为包被抗原,可制备得到一种用于检测细粒棘球蚴病的ELISA试剂盒。
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公开(公告)号:CN107236027A
公开(公告)日:2017-10-10
申请号:CN201710393428.0
申请日:2017-05-27
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明提供细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白,所述细粒棘球绦虫TSP1重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。本发明还提供了一种可溶性表达方法,实现了TSP1重组蛋白的高效可溶性表达:表达的重组蛋白质大部分为可溶性蛋白,占大肠杆菌可溶性总蛋白90%;然后用Ni‑NTA His‑Bind(Clontech)预装柱纯化重组细粒棘球绦虫TSP1,得到TSP1纯化蛋白。在使用洗脱缓冲液(500mM/L咪唑,20mM/L Tris,500mM/L NaCI,PH8.0)时可得到一种高纯度的细粒棘球绦虫TSP1。将该纯化蛋白作为包被抗原,可制备得到一种用于检测细粒棘球蚴病的ELISA试剂盒。
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公开(公告)号:CN107200776A
公开(公告)日:2017-09-26
申请号:CN201710393429.5
申请日:2017-05-27
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明公开了细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白,所述细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。并实现了该重组蛋白的高效可溶性表达,然后使用HisPur Cobalt(Clontech)亲和层析纯化蛋白,在使用洗脱缓冲液(200mM /L咪唑,50mM/L NaH2PO4,300mM/L NaCl)时得到一种高纯度的细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白。将该纯化蛋白作为包被抗原,可制备得到一种用于检测细粒棘球蚴病的ELISA试剂盒。
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公开(公告)号:CN107099519A
公开(公告)日:2017-08-29
申请号:CN201710391543.4
申请日:2017-05-27
Applicant: 兰州大学
IPC: C12N9/12 , C12N15/54 , C12N15/70 , G01N33/573
CPC classification number: C12N9/1205 , C12N15/70 , G01N33/573 , G01N2333/9121
Abstract: 本发明提供细粒棘球绦虫转二羟基丙酮激酶重组蛋白,所述细粒棘球绦虫转二羟基丙酮激酶重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。本发明还提供了一种可溶性表达方法,实现了细粒棘球绦虫转二羟基丙酮激酶重组蛋白的高效可溶性表达:表达的重组蛋白质占大肠杆菌可溶性总蛋白80%。本发明还用Ni‑NTA His‑Bind(Clontech)预装柱纯化细粒棘球绦虫转二羟基丙酮激酶重组蛋白,得到纯化蛋白。将该纯化蛋白作为包被抗原,可制备得到一种用于检测细粒棘球蚴病的ELISA试剂盒。
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公开(公告)号:CN112250738B
公开(公告)日:2023-05-12
申请号:CN202010912170.2
申请日:2020-09-02
Applicant: 兰州大学
IPC: C07K14/165 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供严重急性呼吸综合征冠状病毒2病毒样颗粒的制备方法,包括以下步骤:将pFastBacDual双表达载体改造为三表达载体,将SARS‑CoV‑2的M、S、E基因进行密码子优化,然后将密码子优化的M、S基因依次分别构建至多角体蛋白pPH启动子后,将E基因构建至pP10启动子后,获得表达EMS重组质粒;将EMS重组质粒转化至DH10 BacTM大肠杆菌中,经蓝白筛选挑取白色阳性克隆,提取杆粒转染ExpiSf9TM细胞,胞内共表达E、M、S结构蛋白,自组装形成病毒样颗粒。本发明成功构建了EMS三表达载体,并利用杆状昆虫系统在ExpiSf9TM细胞内成功表达了SARS‑CoV‑2VLPs。
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公开(公告)号:CN112250738A
公开(公告)日:2021-01-22
申请号:CN202010912170.2
申请日:2020-09-02
Applicant: 兰州大学
IPC: C07K14/165 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供严重急性呼吸综合征冠状病毒2病毒样颗粒的制备方法,包括以下步骤:将pFastBacDual双表达载体改造为三表达载体,将SARS‑CoV‑2的M、S、E基因进行密码子优化,然后将密码子优化的M、S基因依次分别构建至多角体蛋白pPH启动子后,将E基因构建至pP10启动子后,获得表达EMS重组质粒;将EMS重组质粒转化至DH10 BacTM大肠杆菌中,经蓝白筛选挑取白色阳性克隆,提取杆粒转染ExpiSf9TM细胞,胞内共表达E、M、S结构蛋白,自组装形成病毒样颗粒。本发明成功构建了EMS三表达载体,并利用杆状昆虫系统在ExpiSf9TM细胞内成功表达了SARS‑CoV‑2VLPs。
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公开(公告)号:CN109022376A
公开(公告)日:2018-12-18
申请号:CN201810963640.0
申请日:2018-08-23
Applicant: 兰州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/861 , A61K39/39 , A61K39/04 , A61P31/06
CPC classification number: C12N7/00 , A61K39/04 , A61K39/39 , A61K2039/5256 , A61K2039/55527 , A61P31/06 , C07K14/5418 , C07K14/5443 , C07K2319/00 , C12N15/86 , C12N2710/10021 , C12N2710/10043
Abstract: 本发明公开了一种重组融合细胞因子IL‑7‑Linker‑IL‑15腺病毒的构建方法,首先构建pDC316‑IL‑7‑Linker载体,然后将IL‑15片段通过基因克隆的方法连到pDC316‑IL‑7‑Linker上,构建pDC316‑IL‑7‑Linker‑IL‑15;最后将pDC316‑IL‑7‑Linker‑IL‑15和骨架载体pBHGlox△E1、3Cre共转染HEK293细胞进行包装,得到表达融合细胞因子IL‑7‑Linker‑IL‑15的腺病毒。重组IL‑7‑Linker‑IL‑15腺病毒作为佐剂应用在结核亚单位疫苗中,调控疫苗免疫后记忆性T细胞的分化,增强了疫苗诱导的中央记忆性T细胞介导的免疫应答,提高了结核亚单位疫苗的免疫保护作用。
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公开(公告)号:CN107200776B
公开(公告)日:2020-10-16
申请号:CN201710393429.5
申请日:2017-05-27
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明公开了细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白,所述细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。并实现了该重组蛋白的高效可溶性表达,然后使用HisPur Cobalt(Clontech)亲和层析纯化蛋白,在使用洗脱缓冲液(200mM/L咪唑,50mM/L NaH2PO4,300mM/L NaCl)时得到一种高纯度的细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白。将该纯化蛋白作为包被抗原,可制备得到一种用于检测细粒棘球蚴病的ELISA试剂盒。
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