公开(公告)号：CN115920021A

公开(公告)日：2023-04-07

申请号：CN202211334750.3

申请日：2022-10-28

申请人： 兰州大学

发明人： 祝秉东 ,  王娟 ,  何朴 ,  谭大权 ,  焦磊 ,  胡丽娜 ,  马岩林 ,  曹倩倩 ,  张婷婷

IPC分类号： A61K39/04 ,  A61K39/39 ,  A61P31/06 ,  C07K19/00 ,  C07K1/36 ,  C07K1/30 ,  C07K1/18 ,  C07K1/16 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供一种结核亚单位疫苗，所述结核亚单位疫苗包括融合蛋白LT33、融合蛋白LT28和佐剂；所述融合蛋白LT33由ESAT6、CFP10、Rv1738依次连接制备而成；所述融合蛋白LT28由MPT6461‑170、Rv19788‑60和Rv264521‑80依次连接制备而成。本发明还提供其制备方法。采用本发明的结核亚单位疫苗，可以在小鼠体内有效诱导结核抗原特异性的细胞和体液免疫应答反应，同时，该疫苗可以介导小鼠针对结核分枝杆菌H37Rv感染的保护。该疫苗有望成为一种新型的结核亚单位疫苗。具有较好的应用开发前景。

公开(公告)号：CN112972673B

公开(公告)日：2023-04-11

申请号：CN202110142607.3

申请日：2021-02-02

申请人： 兰州大学

发明人： 祝秉东 ,  杜秀芬 ,  龚洋 ,  谭大权 ,  何朴 ,  谭继英 ,  牛红霞 ,  李菲

IPC分类号： A61K39/39 ,  A61K39/04 ,  A61K47/59 ,  A61K47/69 ,  A61P31/06

摘要： 本发明公开了PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒的制备方法，先用化学合成的方法使PLGA和NH2‑PEG形成PLGA‑PEG共聚物，然后用复乳溶剂挥发法(W/O/W)将本实验构建的两个结核分枝杆菌融合蛋白ESAT6‑Rv2626c和Mtb10.4‑HspX(简称为M4)包裹在纳米颗粒中，进而应用聚多巴胺和PolyI:C进行修饰，形成包裹结核分枝杆菌融合蛋白M4的PLGA‑PEG‑PolyI：C(简称为NP)纳米颗粒结核亚单位疫苗NP/M4。采用本发明所提供的纳米颗粒结核亚单位疫苗免疫小鼠后，NP/M4组在HspX蛋白、Rv2626c蛋白刺激后，脾脏淋巴细胞分泌IFN‑γ和IL‑2的水平明显高于PBS组和BCG组，表明NP/M4组可产生较高水平的IFN‑γ和IL‑2；此外，NP/M4组HpsX和Rv2626c特异性IgG和sIgA抗体水平明显高于PBS、BCG和融合蛋白M4组。PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒可辅助抗原诱导细胞免疫和体液免疫，是结核亚单位疫苗理想的佐剂。

公开(公告)号：CN112111462A

公开(公告)日：2020-12-22

申请号：CN202010963441.7

申请日：2020-09-14

申请人： 兰州大学

发明人： 李菲 ,  祝秉东 ,  刘会玲 ,  苟元凤 ,  韩雪 ,  牛红霞 ,  杨小娟 ,  谭大权 ,  裴亚萍 ,  李娜

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/40 ,  A61K39/395 ,  A61K9/51 ,  A61K47/34 ,  A61P35/00

摘要： 本发明提供两株分泌烯醇化酶ENO1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏编号分别为：CCTCCNO:C2020150和CCTCCNO:C2020151，保藏日期为：2020年9月6日。本发明还提供由上述的杂交瘤细胞株产生的烯醇化酶ENO1单克隆抗体，在制备抑制宫颈癌迁移或宫颈癌细胞增殖的药物中的应用。本发明首次将ENO1基因克隆入真核表达载体，表达和纯化出ENO1蛋白。应用ENO1蛋白免疫小鼠，通过杂交瘤技术成功制备并筛选出高效价ENO1mAb，并测序获得其可变区基因序列。本发明的ENO1mAb具有较好的安全性和抗宫颈癌效果，有望应用于临床肿瘤治疗。

公开(公告)号：CN112111462B

公开(公告)日：2022-08-23

申请号：CN202010963441.7

申请日：2020-09-14

申请人： 兰州大学

发明人： 李菲 ,  祝秉东 ,  刘会玲 ,  苟元凤 ,  韩雪 ,  牛红霞 ,  杨小娟 ,  谭大权 ,  裴亚萍 ,  李娜

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/40 ,  A61K39/395 ,  A61K9/51 ,  A61K47/34 ,  A61P35/00

摘要： 本发明提供两株分泌烯醇化酶ENO1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏编号分别为：CCTCCNO:C2020150和CCTCCNO:C2020151，保藏日期为：2020年9月6日。本发明还提供由上述的杂交瘤细胞株产生的烯醇化酶ENO1单克隆抗体，在制备抑制宫颈癌迁移或宫颈癌细胞增殖的药物中的应用。本发明首次将ENO1基因克隆入真核表达载体，表达和纯化出ENO1蛋白。应用ENO1蛋白免疫小鼠，通过杂交瘤技术成功制备并筛选出高效价ENO1mAb，并测序获得其可变区基因序列。本发明的ENO1mAb具有较好的安全性和抗宫颈癌效果，有望应用于临床肿瘤治疗。

公开(公告)号：CN112972673A

公开(公告)日：2021-06-18

申请号：CN202110142607.3

申请日：2021-02-02

申请人： 兰州大学

发明人： 祝秉东 ,  杜秀芬 ,  龚洋 ,  谭大权 ,  何朴 ,  谭继英 ,  牛红霞 ,  李菲

IPC分类号： A61K39/39 ,  A61K39/04 ,  A61K47/59 ,  A61K47/69 ,  A61P31/06

摘要： 本发明公开了PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒的制备方法，先用化学合成的方法使PLGA和NH2‑PEG形成PLGA‑PEG共聚物，然后用复乳溶剂挥发法(W/O/W)将本实验构建的两个结核分枝杆菌融合蛋白ESAT6‑Rv2626c和Mtb10.4‑HspX(简称为M4)包裹在纳米颗粒中，进而应用聚多巴胺和PolyI:C进行修饰，形成包裹结核分枝杆菌融合蛋白M4的PLGA‑PEG‑PolyI：C(简称为NP)纳米颗粒结核亚单位疫苗NP/M4。采用本发明所提供的纳米颗粒结核亚单位疫苗免疫小鼠后，NP/M4组在HspX蛋白、Rv2626c蛋白刺激后，脾脏淋巴细胞分泌IFN‑γ和IL‑2的水平明显高于PBS组和BCG组，表明NP/M4组可产生较高水平的IFN‑γ和IL‑2；此外，NP/M4组HpsX和Rv2626c特异性IgG和sIgA抗体水平明显高于PBS、BCG和融合蛋白M4组。PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒可辅助抗原诱导细胞免疫和体液免疫，是结核亚单位疫苗理想的佐剂。

公开(公告)号：CN112979825A

公开(公告)日：2021-06-18

申请号：CN202110155163.7

申请日：2021-02-04

申请人： 兰州大学

发明人： 祝秉东 ,  马岩林 ,  张艺凡 ,  石新彤 ,  杜秀芬 ,  谭大权 ,  牛红霞 ,  李菲 ,  龚洋

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/70 ,  C07K1/20 ,  C07K1/18 ,  C07K1/14 ,  A61K39/04 ,  A61K39/39 ,  A61P31/06

摘要： 本发明公开了结核分枝杆菌融合蛋白LT29的表达纯化方法，将结核分枝杆菌活动期抗原EAST6和结核分支杆菌潜伏期抗原Rv2626c进行融合，中间以柔性肽段连接，构建了融合蛋白ESAT6‑linker‑Rv2626c。将该融合蛋白在大肠埃希菌B21工程菌中进行表达纯化，与佐剂DP联合构建结核亚单位疫苗。该融合蛋白在大肠杆菌中成功得到表达纯化；在小鼠体内可以诱导产生较强的针对结核杆菌特定抗原(ESAT6和Rv2626c)的特异性细胞免疫反应，并促进较长期的记忆性T细胞的产生，具有较强的免疫原性。本发明成功构建、表达和纯化了不带标签的新型融合蛋白LT29，该蛋白融合了结核菌活动期抗原和潜伏期抗原，可诱导产生抗原特异性细胞免疫和体液免疫，有望成为结核病预防和治疗的有效候选疫苗。