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公开(公告)号：CN113151354A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110300094.4
申请日：2021-03-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于在病毒或细胞基因组上条件性敲除目的基因的条件性敲除片段、质粒及条件性敲除目的基因的方法，所述条件性敲除片段包括目的基因左同源重组臂LA、筛选标记物基因表达元件、lac阻遏子基因表达元件、lac操纵子基因表达元件、目的基因右同源重组臂RA；同时构建了含有所述条件性敲除片段的质粒；并提供了一种运用上述质粒进行目的基因条件性敲除的方法。相对于现有技术，本发明仅通过一个条件敲除片段或含有条件敲除的质粒就实现了目的基因的条件性敲除，具有操作流程简单，敲除效率高，筛选过程便捷等优势。
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公开(公告)号：CN105567873B
公开(公告)日：2020-01-21
申请号：CN201610054568.0
申请日：2016-01-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种快速检测羊痘病毒的实时荧光RPA试剂盒及其用途，还公开了一种快速检测羊痘病毒的试纸条RPA试剂盒及其用途。该两种试剂盒分别包括SEQ ID NO.1及SEQ ID NO.2所示的引物及各自的探针，虽然针对同一靶标序列，但引物和探针的修饰碱基和检测平台不同。实验证明本发明的两个试剂盒的敏感性均为102拷贝/反应，并均只能特异性检测绵羊痘病毒和山羊痘病毒。分别用本发明的两个试剂盒检测羊痘病毒疑似样品，结果表明这两个试剂盒的检测结果与qPCR均具有很高的符合度。因此，本发明的两个试剂盒均能快捷、高效、灵敏的检测绵羊痘或山羊痘病毒，为绵羊痘或山羊痘病毒的鉴别诊断提供了有效技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110317777A
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201910735940.8
申请日：2019-08-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明公开了一种口腔黏膜上皮细胞的分离和培养方法，具体涉及细胞培养技术领域，具体分离和培养步骤如下：无菌条件下取唇裂整复术中切除的多余口腔黏膜组织，用PBS反复冲洗，用眼科剪除去黏膜下组织，剪成小块，置于DispaseⅡ酶中，4℃过夜消化18h，用眼科镊分离上皮层，PBS液冲洗上皮层，将上皮剪切成小片加入混合消化液中，37℃消化7分钟，加胎牛血清终止消化，用吸管反复吹打至单细胞悬液，离心弃上清，加入无血清培养基，接种于培养瓶中倒置培养，当原代培养的细胞汇合率达70％-80％时，用0.25％胰蛋白酶/0.02％EDTA消化并以1:2传代。本发明整个培养过程简单，得到的原代培养细胞成活率高，并且不易出现双核、多核、畸形核细胞。
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公开(公告)号：CN109837250A
公开(公告)日：2019-06-04
申请号：CN201910087613.6
申请日：2019-01-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用。所述的羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系，命名为羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系hTERT-LSC，其保藏编号为CCTCC NO：C2018202。试验发现，hTERT–LSC细胞系可以连续传代60代以上，且生长增殖特性保持不变，该细胞系对接种羊痘病毒较为敏感，可以高效增殖羊痘病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞系所增殖的羊痘病毒滴度与羔羊睾丸支持细胞LSC相当，且细胞分种率高于LSC，分种率可达1:3。同时利用该永生化细胞系来制备疫苗，简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的羊痘病毒疫苗的质量稳定。因此，本发明的提出对羊痘病毒疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN105525040B
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201610060957.4
申请日：2016-01-28
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种快速检测猪2型圆环病毒的实时荧光RPA试剂盒及其用途，还公开了一种快速检测猪2型圆环病毒的试纸条RPA试剂盒及其用途。该两种试剂盒分别包括SEQ ID NO.1及SEQ ID NO.2所示的引物及各自的探针，虽然针对同一靶标序列，但引物和探针的修饰碱基和检测平台不同。实验证明本发明的两个试剂盒的敏感性均为102拷贝/反应，并均只能特异性检测猪2型圆环病毒。分别用本发明的两个试剂盒检测猪2型圆环病毒疑似样品，结果表明这两个试剂盒的检测结果与qPCR的符合度均为100％。因此，本发明的两个试剂盒均能快捷、高效、灵敏的检测猪2型圆环病毒，为猪2型圆环病毒的鉴别诊断提供了有效技术手段。
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公开(公告)号：CN105567873A
公开(公告)日：2016-05-11
申请号：CN201610054568.0
申请日：2016-01-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种快速检测羊痘病毒的实时荧光RPA试剂盒及其用途，还公开了一种快速检测羊痘病毒的试纸条RPA试剂盒及其用途。该两种试剂盒分别包括SEQ ID NO.1及SEQ ID NO.2所示的引物及各自的探针，虽然针对同一靶标序列，但引物和探针的修饰碱基和检测平台不同。实验证明本发明的两个试剂盒的敏感性均为102拷贝/反应，并均只能特异性检测绵羊痘病毒和山羊痘病毒。分别用本发明的两个试剂盒检测羊痘病毒疑似样品，结果表明这两个试剂盒的检测结果与qPCR均具有很高的符合度。因此，本发明的两个试剂盒均能快捷、高效、灵敏的检测绵羊痘或山羊痘病毒，为绵羊痘或山羊痘病毒的鉴别诊断提供了有效技术手段。
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公开(公告)号：CN105525040A
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201610060957.4
申请日：2016-01-28
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2521/507 , C12Q2563/107 , C12Q2565/625
Abstract: 本发明公开了一种快速检测猪2型圆环病毒的实时荧光RPA试剂盒及其用途，还公开了一种快速检测猪2型圆环病毒的试纸条RPA试剂盒及其用途。该两种试剂盒分别包括SEQ ID NO.1及SEQ ID NO.2所示的引物及各自的探针，虽然针对同一靶标序列，但引物和探针的修饰碱基和检测平台不同。实验证明本发明的两个试剂盒的敏感性均为102拷贝/反应，并均只能特异性检测猪2型圆环病毒。分别用本发明的两个试剂盒检测猪2型圆环病毒疑似样品，结果表明这两个试剂盒的检测结果与qPCR的符合度均为100％。因此，本发明的两个试剂盒均能快捷、高效、灵敏的检测猪2型圆环病毒，为猪2型圆环病毒的鉴别诊断提供了有效技术手段。
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