公开(公告)号：CN105420161A

公开(公告)日：2016-03-23

申请号：CN201510964760.9

申请日：2015-12-21

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 周俊明 ,  祝昊丹 ,  倪艳秀 ,  何孔旺 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  吕立新 ,  温立斌 ,  张雪寒 ,  李彬 ,  郭容利 ,  王小敏 ,  汪伟 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC: C12N1/20 ,  A61K39/02 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

CPC classification number: C12N1/20 ,  A61K39/0208 ,  A61K2039/52 ,  A61K2039/543

Abstract: 本发明涉及一种猪胸膜肺炎放线杆菌外膜囊泡的制备方法及其疫苗，属生物技术领域。体外以铁离子限制的培养基培养猪胸膜肺炎放线杆菌shope菌株，经离心、0.22μm过滤处理后获取无细胞培养上清，继而超速离心制备出细菌释放的外膜囊泡，经过透射电镜观察可见大部分外膜囊泡直径50nm~100nm之间，以外膜囊泡作为亚单位疫苗二次鼻内免疫小鼠，外膜囊泡免疫小鼠长期增重及肺脏眼观形态与PBS免疫组无显著差异。同时实验表明外膜囊泡是一种高效免疫刺激物，不仅能够刺激小鼠血清产生高水平的IgG，而且在小鼠肺脏中产生高水平的IgA，有效的刺激了小鼠肺脏的黏膜免疫，显现出外膜囊泡作为亚单位疫苗较好的应用前景。

公开(公告)号：CN103275912B

公开(公告)日：2016-03-02

申请号：CN201310099542.4

申请日：2013-03-10

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 张雪寒 ,  何孔旺 ,  叶青 ,  栾晓婷 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  郭容利 ,  李彬 ,  周俊明 ,  王小敏 ,  吕立新 ,  俞正玉 ,  茅爱华

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C07K19/00 ,  C12P21/02 ,  A61K39/108 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7多价fliC-hcpA-tir-eae重组菌及疫苗，属于生物制药领域。分别扩增出EHEC O157:H7的H7鞭毛(fliC)基因、菌毛(hcpA)基因、转位紧密素受体(tir)基因和紧密素(eae)基因，依次串联，克隆入表达载体pCold I中，获得重组质粒pCold-fliC-hcpA-tir-eae，在BL21(DE3)获得高效表达。经过高密度发酵和一系列的纯化程序获得高纯度的融合蛋白分子疫苗。该疫苗的制备工艺简捷、易于放大、重复性好，所获得目标蛋白纯度较高，动物试验证明可刺激机体在体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫方面产生高效的免疫应答，免疫预防保护和治疗作用。

公开(公告)号：CN105061602A

公开(公告)日：2015-11-18

申请号：CN201510481575.4

申请日：2015-08-03

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 张雪寒 ,  俞正玉 ,  张强 ,  张碧成 ,  汪伟 ,  茅爱华 ,  周俊明 ,  何孔旺 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  李彬 ,  周萍

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/52 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用，属于生物技术领域。所述融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。制备融合蛋白的方法，包括：将所述融合蛋白的编码基因插入pCold I质粒，得到重组载体；将所述重组载体转化宿主细胞，获得阳性重组菌；诱导所述阳性重组菌表达融合蛋白，纯化后得到所述融合蛋白。本发明融合蛋白，免疫反应性良好，产量较高，可以用于同时检测抗F4和F5型猪产肠毒素性大肠杆菌抗体。本发明试剂盒方面，检测准确、操作简便，特异性、敏感性、重复性均良好，适合于在临床应用中进行推广，为抗ETEC抗体的快速检测提供了可靠手段。

公开(公告)号：CN103235121B

公开(公告)日：2015-08-05

申请号：CN201310087506.6

申请日：2013-03-18

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 何孔旺 ,  王小敏 ,  张文文 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  俞正玉 ,  张雪寒 ,  郭容利 ,  吕立新 ,  李彬 ,  周俊明 ,  茅爱华 ,  叶青 ,  汪伟 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC: G01N33/569

Abstract: 本发明涉及一种用于检测猪输血传播病毒2型（TTV2）抗体的间接ELISA试剂盒，属于生物技术领域。包括抗原重组蛋白的制备、间接ELISA的建立、判定标准及临床血清学检测的应用。所述的抗原重组蛋白是利用pcoldI原核表达载体，构建表达猪TTV2 ORF1截短蛋白的基因工程菌pcoldI-ORF1，并将表达的重组蛋白纯化作为抗原建立了间接ELISA检测方法。该方法用于检测猪血清中TTV2的抗体水平具有重复性好、特异性高的特点，可用于猪TTV2的血清学调查，为该病的防治和流行情况的掌握提供一种快速、简便的血清学检测方法。目前该方法是国内首次利用猪TTV2 ORF1重组蛋白建立检测猪群中TTV2抗体的ELISA检测方法。

公开(公告)号：CN103865859A

公开(公告)日：2014-06-18

申请号：CN201410130127.5

申请日：2014-04-02

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 吕立新 ,  何孔旺 ,  倪艳秀 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  周俊明 ,  张雪寒 ,  郭容利 ,  李彬 ,  温立斌 ,  王小敏 ,  汪伟

IPC: C12N1/20 ,  A61K39/085 ,  A61P31/04 ,  C12R1/44

Abstract: 本发明提供一株松鼠葡萄球菌、疫苗及其制备方法，属生物技术领域。本发明提供松鼠葡萄球菌（Staphylococcussciuri）NJ1306，保藏号为CCTCC？NO:M2013702。试验证明松鼠葡萄球菌（Staphylococcussciuri）NJ1306对BALB/c小鼠和仔猪都有致病性。本发明还提供松鼠葡萄球菌灭活疫苗，含有灭活的NJ1306株。将灭活的松鼠葡萄球菌培养液和佐剂混合均匀，得到松鼠葡萄球菌灭活油乳剂疫苗。采用本发明松鼠葡萄球菌NJ1306制成的灭活油乳剂疫苗，可以对BALB/c小鼠提供很好的保护力，说明该菌株具有良好的免疫原性。

公开(公告)号：CN102888471B

公开(公告)日：2014-02-12

申请号：CN201210436587.1

申请日：2012-11-06

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 温立斌 ,  何孔旺 ,  高晓静 ,  王小敏 ,  李彬 ,  郭容利 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  倪艳秀 ,  张雪寒 ,  吕立新 ,  周俊明 ,  胡屹屹 ,  汪伟 ,  叶青 ,  祝昊丹 ,  于洋 ,  沈江萍 ,  周萍

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及一种利用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测类猪圆环病毒P1的方法，属于分子生物学领域。本发明方法包括特异性引物的设计、标准质粒的构建、实时荧光定量PCR扩增方法的建立和优化、样本DNA提取及结果检测判定。本发明检测灵敏度高，稳定性高、特异性好，可以检测样本中类猪圆环病毒P1的含量，同时可以鉴别样本中猪圆环病毒2型的感染。

公开(公告)号：CN101830985B

公开(公告)日：2012-04-25

申请号：CN201010118499.8

申请日：2010-03-05

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 何孔旺 ,  张雪寒 ,  卢维彩 ,  赵攀登 ,  温立斌 ,  郭容利 ,  李彬 ,  王小敏 ,  倪艳秀 ,  吕立新 ,  周俊明 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  A61K39/108 ,  A61P31/04 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7转位紧密粘附素受体(Tir)与内膜素受体偶联细胞骨架蛋白(TccP)重组蛋白的制备方法及应用，属于生物技术领域。取tir和tccp基因C端序列串联克隆，获得pGEM-T-tir-tccp重组质粒，构建重组质粒pGEX-4T-1-tir-tccp，转化入感受态细胞BL21(DE3)中，获得重组菌株，经IPTG诱导后获得高效表达。本发明制备的重组蛋白Tir-TccP具有良好的免疫原性，可诱导机体产生高滴度的保护性抗体。Tir-TccP可作为研制亚单位疫苗的候选多价融合蛋白，为预防和治疗肠出血性大肠杆菌O157:H7感染提供了技术平台和防控手段。

公开(公告)号：CN100594237C

公开(公告)日：2010-03-17

申请号：CN200710134465.6

申请日：2007-10-23

Applicant: 江苏省农业科学院 ,  南京天邦生物科技有限公司

Inventor： 张雪寒 ,  何孔旺 ,  刘亚彬 ,  周俊明 ,  俞正玉 ,  倪艳秀 ,  郭容利 ,  吕立新 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/09 ,  C12R1/46

Abstract: 本发明涉及次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)猪链球菌2型(SS2)缺失株，属于生物技术领域。包括设计引物，获取impdh基因上下游序列(IN和IC)和氯霉素(cat)基因完整表达盒，基因经串联并克隆入simple pMD18-T载体，串联片段经测序后再经酶切后克隆入温敏质粒pSET4s载体，构建重组基因敲除质粒pSET4s-IN-cat-IC，转化入SS2。IMPDHm培养特性、生化特性和致病性较亲本菌株SS2有明显的不同。本发明构建了IMPDH缺失菌株(IMPDHm)，可用于研制SS2的基因缺失灭活疫苗，为更加安全而有效的防控猪链球菌病提供技术方法。

公开(公告)号：CN1645148A

公开(公告)日：2005-07-27

申请号：CN200510038211.5

申请日：2005-01-24

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 何孔旺 ,  彭小华 ,  王芳 ,  邱索平 ,  张雪寒 ,  倪艳秀 ,  郭容利 ,  俞正玉 ,  陆承平

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  G01N33/535 ,  G01N33/52 ,  C07H19/00 ,  C07H21/00

Abstract: 一种检测胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropeumoniae，App)野毒感染的试剂盒，其组成成分如下：细菌毒素ApxIV纯化表达蛋白包被好的酶标板、辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG抗体、柠檬酸、碳酸氢二钠、EDTA缓冲系统加TMB构成的显色系统、阳性血清、阴性血清和试剂盒说明书。其特征是利用聚合酶链反应(PCR)从App血清1型的ApxIV基因中扩增出目的基因，构建了含目的基因的表达质粒pET32a－ApxIV，该质粒转化入宿主菌BL21(DE3)，体外表达蛋白经镍柱纯化后作为抗原，建立酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法并优化反应条件形成了检测试剂盒，该试剂盒在App的诊断、流行病学调查和免疫监测等方面具有重要应用价值。

公开(公告)号：CN108950033B

公开(公告)日：2022-01-11

申请号：CN201810831206.7

申请日：2018-07-26

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 张雪寒 ,  葛东红 ,  张碧成 ,  王警 ,  郭芸芸 ,  俞正玉 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  李彬 ,  汪伟 ,  胡屹屹 ,  周俊明 ,  祝昊丹 ,  肖琦 ,  范宝超 ,  朱雪娇

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/10 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供同时检测肠出血性大肠杆菌O45和O145的纳米PCR试剂盒及其应用，涉及出血性大肠杆菌的检测技术领域。该试剂盒，包括第一引物对和第二引物对，所述第一引物对包括序列如SEQ ID No：3和SEQ ID No：4所示的引物；所述第二引物对包括序列如SEQ ID No：7和SEQ ID No：8所示的引物。本发明还提供所述纳米PCR试剂盒在以非诊断为目的检测肠出血性大肠杆菌O45和O145中的应用。本发明纳米PCR试剂盒，能够快速、特异的同时检测样品中两种血清型的EHEC，具有很好的应用前景。