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公开(公告)号：CN116463297A
公开(公告)日：2023-07-21
申请号：CN202310238092.6
申请日：2023-03-09
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法,属于基因工程技术领域。本发明的关键技术是在血清4型禽腺病毒中寻找到合适的位置插入外源基因；同时利用CRISPR‑Cas9技术在血清4型禽腺病毒中插入鸡传染性贫血病病毒VP1基因以及带有LoxP位点的RFP表达盒，利用RFP蛋白进行病毒的纯化，纯化完成后使用Cre重组酶敲除RFP表达盒，最后获得可以稳定表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒。本发明构建的表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为血清4型禽腺病毒和鸡传染性贫血病病毒的联防联控提供了二联候选疫苗。因此，本发明具有良好的市场应用价值。
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公开(公告)号：CN113061586B
公开(公告)日：2023-07-21
申请号：CN202110332476.5
申请日：2021-03-29
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/861 , C12N15/113 , C12N15/34 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，发明的原理和最核心的关键技术是利用sgRNA，替换EGFP后进行病毒纯化，获得可以稳定扩增血清8型禽腺病的纤突蛋白的重组禽腺病毒。利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入的血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F，成功获得了表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白的重组FAdV‑4，在体外实验结果显示，FAdV4‑F1‑F‑F2重组病毒与FAdV‑4野毒的复制能力几乎相同，可作为防控FAdV‑4和FAdV‑8的灭活重组多价苗。
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公开(公告)号：CN116359496A
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202211601049.3
申请日：2022-12-12
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/535 , G01N33/58 , C12N15/70 , C12N15/34 , C07K16/08 , C12N5/20
Abstract: 一种基于Fiber‑2蛋白检测鸭3型腺病毒的双抗体夹心ELISA，包括:1)包被抗体：鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的单克隆抗体，即捕获抗原的抗体；2)酶标二抗：酶标的鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的单克隆抗体，即检测抗体；其中，包被抗体与酶标二抗是针对鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的同一株单克隆抗体，由杂交瘤细胞株DAdV‑3‑Fiber‑2‑3D9分泌获得。通过本发明，建立的鸭3型腺病毒夹心ELISA检测方法快速、稳定、特异性高，使用本发明只需采集泄殖腔分泌物或其它含有鸭3型腺病毒的样品，即可快速准确地检测样品中是否含有鸭3型腺病毒。本发明适合应用于鸭群是否感染鸭3型腺病毒的大批量检测。
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公开(公告)号：CN114703147A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210405848.7
申请日：2022-04-18
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/577 , A61K39/42 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供了一种抗SARS‑CoV‑2广谱中和性单克隆抗体及其杂交瘤细胞株、检测试剂盒和应用，属于病毒检测技术领域。本发明筛选得到一株杂交瘤细胞株CoV2‑S2‑G5，分泌具有抗SARS‑CoV‑2广谱中和特性的单克隆抗体G5。所述单克隆抗体G5能有效中和SARS‑CoV‑2野生株以及多种突变毒株(包括奥密克戎突变株、德尔塔突变株和南非突变株)，为预防或治疗由新冠病毒感染引起的疾病的药物制剂、诊断新冠肺炎以及新冠病毒疫苗筛选提供了有效工具，具有极大的应用前景。
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公开(公告)号：CN113929753A
公开(公告)日：2022-01-14
申请号：CN202111207794.5
申请日：2021-10-18
Applicant: 扬州大学 , 国药集团扬州威克生物工程有限公司
IPC: C07K14/075 , C12N15/866 , C12N5/10 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种真核重组蛋白在试剂盒中的应用、试剂盒及其应用。将真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白应用在制备用于检测Fiber蛋白抗体的试剂盒中，所述真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白由Sf9昆虫表达系统表达获得。本发明将由Sf9昆虫表达系统表达获得的真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白应用在制备用于检测Fiber蛋白抗体的试剂盒中，具有良好的FAdV‑4特异性、敏感性，能够特异地、有效地检测出感染FAdV‑4或免疫FAdV‑4疫苗的鸡群中抗FAdV‑4抗体，在FAdV‑4病毒流行病学调查中具有良好的应用价值，可用于FAdV‑4感染及免疫状况流行病学调查。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113917139A
公开(公告)日：2022-01-11
申请号：CN202111207886.3
申请日：2021-10-18
Applicant: 扬州大学 , 国药集团扬州威克生物工程有限公司
IPC: G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种基于重组荧光病毒的血清4型禽腺病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将待检血清稀释后与10000～20000TCID50/50μL的荧光病毒FAdV‑4‑EGFP混合，恒温孵育1～2h；S2、将孵育好的病毒与血清的混合物接种于LMH细胞中并培养24～36h，然后在荧光显微镜下观察荧光病毒被中和情况。本发明以前期拯救的表达绿色荧光蛋白的重组病毒FAdV‑4‑EGFP为基础，该毒株为高度致弱疫苗候选株，高剂量肌注感染鸡也不发病，与亲本株生长特性相近、生物安全性高、不存在散播强毒的隐患；相比于传统的中和试验，本发明提供的方案最短仅需要感染重组病毒24h后即可观察结果，可实现中和试验结果提前2‑3天，大幅缩短了检测所需时间。
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公开(公告)号：CN113061585A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110332191.1
申请日：2021-03-29
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的重组血清4型禽腺病毒以及制备方法，本发明的原理和最核心的关键技术是选择合适插入位点以及sgRNA。插入RFP后进行病毒的纯化，获得可以稳定扩增的重组禽腺病毒。利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入外源基因RFP，成功获得了表达RFP的重组FAdV‑4病毒，由此可见，RFP的插入位置可以作为插入其他病原的保护性抗原插入位点，为构建FAdV‑4重组多价苗提供了夯实的理论基础。
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公开(公告)号：CN113005102A
公开(公告)日：2021-06-22
申请号：CN202110332457.2
申请日：2021-03-29
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种绿色荧光蛋白替换Fiber‑2的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，本发明利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体，将病毒的毒力基因之一F2进行删除，纯化后成功获得了表达EGFP的F2完全缺失的重组FAdV4病毒，在体内及体外实验结果均显示，FAV4‑EGFP‑rF2重组病毒毒力显著降低，且攻毒后保护率很好，由此可见，本发明提供的F2完全缺失型重组病毒不仅能够为FAdV‑4的防控提供生物材料，同时EGFP替换F2的位置可以作为插入其他病原保护性抗原的插入位点，为构建FAdV‑4重组多价苗提供了坚实的理论依据。
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公开(公告)号：CN106443015A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610837860.X
申请日：2016-09-21
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/535
CPC classification number: G01N33/6857 , G01N33/535 , G01N33/56983 , G01N2333/075
Abstract: 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于hexon蛋白N端保守区的检测禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒。该试剂盒包括包被有hexon蛋白N端保守区表达产物的ELISA酶标板，HRP标记的兔抗鸡抗体，样品稀释液，洗涤液；所述的hexon蛋白N端保守区序列如SEQ ID NO.5所示。本发明建立的禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒能特异性的检测出抗禽腺病毒抗体，而不能检测出抗其它病原的抗体。因此，该试剂盒具有良好禽腺病毒的特异性，能用于禽腺病毒感染状况流行病学调查。
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公开(公告)号：CN105037503A
公开(公告)日：2015-11-11
申请号：CN201510357985.8
申请日：2015-06-25
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种AGV2型环形病毒VP3可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX-6p-1线性化载体以及AGV2病毒VP3基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP3，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP3蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP3可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP3可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供VP3可容性蛋白作为AGV2诊断抗原；作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体；为开展AGV2血清学流行病学调查及VP3功能研究提供有效免疫学试剂，填补国内外空白；并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。
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