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公开(公告)号：CN105779649A
公开(公告)日：2016-07-20
申请号：CN201610186635.4
申请日：2016-03-29
申请人： 扬州大学 , 国药集团扬州威克生物工程有限公司
CPC分类号： C12Q1/702 , C12Q1/6804 , C12Q2531/113 , C12Q2563/107 , C12Q2545/113
摘要： 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种检测禽白血病病毒的免疫PCR试剂盒。所述试剂盒包括：两个抗体寡核苷酸探针、连接反应液、DNA连接酶、蛋白酶、Fast Master混合液和Universal qPCR反应液。本发明利用生物素标记的抗禽白血病病毒特异性抗体以及商品化邻位连接试剂，通过免疫PCR检测样品中禽白血病病毒抗原。实现不用对样品进行繁琐的核酸提取过程，通过PCR方法对禽白血病病毒抗原进行快速高通量检测。这一检测禽白血病病毒免疫PCR试剂盒将应用于禽白血病病毒临床检测与净化中，将填补国内外相关技术空白。
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公开(公告)号：CN113929753A
公开(公告)日：2022-01-14
申请号：CN202111207794.5
申请日：2021-10-18
申请人： 扬州大学 , 国药集团扬州威克生物工程有限公司
IPC分类号： C07K14/075 , C12N15/866 , C12N5/10 , G01N33/569 , G01N33/543
摘要： 本发明公开了一种真核重组蛋白在试剂盒中的应用、试剂盒及其应用。将真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白应用在制备用于检测Fiber蛋白抗体的试剂盒中，所述真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白由Sf9昆虫表达系统表达获得。本发明将由Sf9昆虫表达系统表达获得的真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白应用在制备用于检测Fiber蛋白抗体的试剂盒中，具有良好的FAdV‑4特异性、敏感性，能够特异地、有效地检测出感染FAdV‑4或免疫FAdV‑4疫苗的鸡群中抗FAdV‑4抗体，在FAdV‑4病毒流行病学调查中具有良好的应用价值，可用于FAdV‑4感染及免疫状况流行病学调查。
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公开(公告)号：CN113917139A
公开(公告)日：2022-01-11
申请号：CN202111207886.3
申请日：2021-10-18
申请人： 扬州大学 , 国药集团扬州威克生物工程有限公司
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/68
摘要： 本发明公开了一种基于重组荧光病毒的血清4型禽腺病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将待检血清稀释后与10000～20000TCID50/50μL的荧光病毒FAdV‑4‑EGFP混合，恒温孵育1～2h；S2、将孵育好的病毒与血清的混合物接种于LMH细胞中并培养24～36h，然后在荧光显微镜下观察荧光病毒被中和情况。本发明以前期拯救的表达绿色荧光蛋白的重组病毒FAdV‑4‑EGFP为基础，该毒株为高度致弱疫苗候选株，高剂量肌注感染鸡也不发病，与亲本株生长特性相近、生物安全性高、不存在散播强毒的隐患；相比于传统的中和试验，本发明提供的方案最短仅需要感染重组病毒24h后即可观察结果，可实现中和试验结果提前2‑3天，大幅缩短了检测所需时间。
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公开(公告)号：CN118185885A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202410361207.5
申请日：2024-03-27
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术构建的表达H3N8禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法，H3N8禽流感病毒HA蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；重组血清4型禽腺病毒，其中使用H3N8禽流感病毒HA基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸。本发明利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入H3N8禽流感病毒HA基因，成功获得了表达H3N8禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒，此重组病毒可作为免疫防控H3N8以及血清4型腺病毒的二联疫苗候选株。
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公开(公告)号：CN113354717B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202110631147.0
申请日：2021-06-07
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C07K14/165 , C07K19/00 , C12N15/50 , C12N15/70 , C07K16/10 , G01N33/569 , A61K39/42 , A61P31/14
摘要： 本发明提供了一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原及其特异性中和抗体和应用，属于病毒免疫检测技术领域。一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，与SARS‑CoV‑2人阳性血清的反应，能够特异性与新冠病毒抗体结合。基于本发明的多肽序列，利用PCR、原核表达及蛋白纯化技术，制备了三重SARS‑CoV‑2广谱多肽串联融合蛋白，模拟SARS‑CoV‑2S蛋白自然状态下三聚体模式，以该融合蛋白作为抗原免疫小鼠，可以产生抗SARS‑CoV‑2特异性中和抗体，所述中和抗体在SARS‑CoV‑2抗感染治疗、疫苗研发和检测试剂盒研制中将具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113201561A
公开(公告)日：2021-08-03
申请号：CN202110497755.7
申请日：2021-05-08
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及到一种精确敲除鸡NHE1基因W38位氨基酸的细胞系构建方法，本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡NHE1基因W38位氨基酸的sgRNA，之后转染带有sgRNA和Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒，利用CRISPR‑Cas9系统达到基因位点的精确敲除，通过药物筛选及亚克隆的方法获得单克隆细胞株，从而获得鸡源NHE1基因W38位敲除的细胞系。
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公开(公告)号：CN110615839A
公开(公告)日：2019-12-27
申请号：CN201910987165.5
申请日：2019-10-17
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种鸡源化抗禽流感神经氨酸酶单克隆抗体及其制备方法和应用。通过PCR方法小鼠特异性的Fab与鸡Fc片段拼接并克隆入哺乳动物表达载体中，获得表达重组重链的质粒。两质粒共转染哺乳动物细胞，即可获得分泌表达的鸡源化抗禽流感神经氨酸酶单克隆抗体。本发明可广泛用于抗病毒、细菌单克隆抗体的鸡源化表达，获得的鸡源化抗禽流感神经氨酸酶单克隆抗体既能够保持Fab识别、中和抗原的能力，又具备在体内呈递抗原的潜力。
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公开(公告)号：CN105973854B
公开(公告)日：2018-10-23
申请号：CN201610327763.6
申请日：2016-05-17
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于F2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒。该试剂盒包括表达F2蛋白的293T细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液和洗涤液。本发明试剂盒具有良好的特异性。该试剂盒不仅能用于血清4型禽腺病毒感染状况流行病学调查，而且能有效用于监测免疫鸡群血清4型禽腺病毒抗体水平，用于评价免疫保护性抗体水平等。
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公开(公告)号：CN106018780B
公开(公告)日：2017-12-26
申请号：CN201610327488.8
申请日：2016-05-17
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于F1蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒。该试剂盒包括表达F1蛋白的293T细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液，洗涤液。本发明试剂盒具有良好的特异性；该试剂盒不仅能用于血清4型禽腺病毒感染状况流行病学调查，而且能有效用于监测免疫鸡群血清4型禽腺病毒抗体水平，用于评价免疫保护性抗体水平等。
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公开(公告)号：CN104450695B
公开(公告)日：2017-08-25
申请号：CN201410704520.0
申请日：2014-11-26
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种流感病毒基因克隆方法，具体涉及A型流感病毒基因PCR扩增引物及A型流感病毒基因快速克隆方法。本发明提供了A型流感病毒8个基因片段的PCR扩增引物和流感病毒反向遗传线性化载体的引物。本发明还提供了A型流感病毒基因快速克隆方法，用上述引物通过PCR反应即聚合酶链式反应扩增出流感病毒基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体，然后利用重组酶将上述线流感病毒各基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体在体外重组克隆，并转化到大肠杆菌进行克隆。本发明的大大简化了传统的流感病毒反向遗传技术中的基因克隆过程，解决传统的流感病毒反向遗传技术中流感病毒基因的克隆过程复杂、效率不高的问题。
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