公开(公告)号：CN105037503B

公开(公告)日：2016-12-21

申请号：CN201510357985.8

申请日：2015-06-25

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  田晓彦 ,  施洋洋 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  谢泉 ,  夏驰超 ,  周晓祥 ,  范中雷

IPC分类号： C07K14/01 ,  C12N15/70 ,  C12P21/02 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种AGV2型环形病毒VP3可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX-6p-1线性化载体以及AGV2病毒VP3基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP3，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP3蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP3可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP3可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供VP3可容性蛋白作为AGV2诊断抗原；作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体；为开展AGV2血清学流行病学调查及VP3功能研究提供有效免疫学试剂，填补国内外空白；并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。

公开(公告)号：CN105037503A

公开(公告)日：2015-11-11

申请号：CN201510357985.8

申请日：2015-06-25

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  田晓彦 ,  施洋洋 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  谢泉 ,  夏驰超 ,  周晓祥 ,  范中雷

IPC分类号： C07K14/01 ,  C12N15/70 ,  C12P21/02 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种AGV2型环形病毒VP3可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX-6p-1线性化载体以及AGV2病毒VP3基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP3，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP3蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP3可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP3可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供VP3可容性蛋白作为AGV2诊断抗原；作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体；为开展AGV2血清学流行病学调查及VP3功能研究提供有效免疫学试剂，填补国内外空白；并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。

公开(公告)号：CN105037504A

公开(公告)日：2015-11-11

申请号：CN201510359309.4

申请日：2015-06-25

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  田晓彦 ,  施洋洋 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  谢泉 ,  夏驰超 ,  周晓祥 ,  范中雷

IPC分类号： C07K14/01 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

CPC分类号： C07K14/01 ,  C07K2319/23 ,  C12N2750/10011

摘要： 本发明提供了一种AGV2型环形病毒VP2可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX-6p-1线性化载体以及AGV2病毒VP2基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP2，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP2蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP2可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP2可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供VP2可容性蛋白作为AGV2诊断抗原；作为免疫原获得抗VP2多克隆抗体；为开展AGV2血清学流行病学调查及VP2功能研究提供有效免疫学试剂，填补国内外空白；并为进一步探究VP2生物学功能具有重要意义。

公开(公告)号：CN105037504B

公开(公告)日：2016-11-30

申请号：CN201510359309.4

申请日：2015-06-25

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  田晓彦 ,  施洋洋 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  谢泉 ,  夏驰超 ,  周晓祥 ,  范中雷

IPC分类号： C07K14/01 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供了一种AGV2型环形病毒VP2可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX‑6p‑1线性化载体以及AGV2病毒VP2基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP2，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP2蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP2可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP2可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供VP2可容性蛋白作为AGV2诊断抗原；作为免疫原获得抗VP2多克隆抗体；为开展AGV2血清学流行病学调查及VP2功能研究提供有效免疫学试剂，填补国内外空白；并为进一步探究VP2生物学功能具有重要意义。

公开(公告)号：CN104726498A

公开(公告)日：2015-06-24

申请号：CN201510153415.7

申请日：2015-04-02

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  范中雷 ,  田晓彦 ,  秦爱建 ,  邵红霞

IPC分类号： C12N15/867

摘要： 本发明涉及一种基于J亚群禽白血病病毒LTR的线性化真核表达载体的构建及应用。本发明是SEQ ID NO.1和2的序列为引物，以JSNT毒株为模板，进行PCR扩增得ALV-J病毒LTR线性化载体；本发明不仅可用于研究ALV-J或其它反转录病毒的复制、转译、致病等机制；而且能实现对外源基因的快速克隆、高效表达。

公开(公告)号：CN104450695A

公开(公告)日：2015-03-25

申请号：CN201410704520.0

申请日：2014-11-26

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  范中雷 ,  田晓彦 ,  万志敏 ,  秦爱建 ,  邵红霞

IPC分类号： C12N15/11 ,  C12N15/44 ,  C12N15/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66

摘要： 本发明涉及一种流感病毒基因克隆方法，具体涉及A型流感病毒基因PCR扩增引物及A型流感病毒基因快速克隆方法。本发明提供了A型流感病毒8个基因片段的PCR扩增引物和流感病毒反向遗传线性化载体的引物。本发明还提供了A型流感病毒基因快速克隆方法，用上述引物通过PCR反应即聚合酶链式反应扩增出流感病毒基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体，然后利用重组酶将上述线流感病毒各基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体在体外重组克隆，并转化到大肠杆菌进行克隆。本发明的大大简化了传统的流感病毒反向遗传技术中的基因克隆过程，解决传统的流感病毒反向遗传技术中流感病毒基因的克隆过程复杂、效率不高的问题。

公开(公告)号：CN104450695B

公开(公告)日：2017-08-25

申请号：CN201410704520.0

申请日：2014-11-26

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  范中雷 ,  田晓彦 ,  万志敏 ,  秦爱建 ,  邵红霞

IPC分类号： C12N15/11 ,  C12N15/44 ,  C12N15/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66

摘要： 本发明涉及一种流感病毒基因克隆方法，具体涉及A型流感病毒基因PCR扩增引物及A型流感病毒基因快速克隆方法。本发明提供了A型流感病毒8个基因片段的PCR扩增引物和流感病毒反向遗传线性化载体的引物。本发明还提供了A型流感病毒基因快速克隆方法，用上述引物通过PCR反应即聚合酶链式反应扩增出流感病毒基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体，然后利用重组酶将上述线流感病毒各基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体在体外重组克隆，并转化到大肠杆菌进行克隆。本发明的大大简化了传统的流感病毒反向遗传技术中的基因克隆过程，解决传统的流感病毒反向遗传技术中流感病毒基因的克隆过程复杂、效率不高的问题。

公开(公告)号：CN104711294A

公开(公告)日：2015-06-17

申请号：CN201510154789.0

申请日：2015-04-02

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  田晓彦 ,  范中雷 ,  秦爱建 ,  邵红霞

IPC分类号： C12N15/867 ,  C12N15/66

摘要： 本发明涉及一种基于禽网状内皮组织增生症病毒LTR的真核表达载体的构建及应用。该方法是利用序列如SEQ ID NO.1和2的引物，以SNV毒株为模板，进行PCR扩增得REV病毒LTR线性化载体。此发明不仅可用于研究REV或其它反转录病毒的复制、转译、致病等机制；而且能实现对外源基因的快速克隆、高效表达。