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公开(公告)号：CN118638218A
公开(公告)日：2024-09-13
申请号：CN202410651611.6
申请日：2024-05-24
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C07K16/10 , C12N5/20 , G01N33/569
摘要： 本发明涉及一种识别传染性法氏囊病毒新型变异毒株VP2蛋白第221位氨基酸的单克隆抗体制备，本发明提供了一种仅特异性识别IBDV新型变异株VP2蛋白的单克隆抗体VP2‑5B5，经鉴定重链亚型为IgG2b，其识别的构象抗原表位的关键氨基酸位于VP2第221位氨基酸K。与现有技术相比，本发明的有益技术效果在于：1）本发明以IBDV新型变异株VP2的高变区蛋白作为免疫原，该段序列抗原性和亲水性良好，制备的重组蛋白rVP2‑HVR以可溶性形式表达于上清中。2）本发明制备的单克隆抗体VP2‑5B5特异性良好，仅特异性识别IBDV新型变异株VP2蛋白，可用于IBDV新型变异株的鉴别诊断。3）本发明制备的单克隆抗体VP2‑5B5所识别的抗原表位为构象表位，其所识别的关键氨基酸位于VP2第221位氨基酸K。
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公开(公告)号：CN118497134A
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202410694499.4
申请日：2024-05-31
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/577 , C07K14/08 , C12N15/70 , C12R1/19
摘要： 本发明涉及一种识别传染性法氏囊病毒VP2蛋白第343‑348位氨基酸的单克隆抗体制备，本发明提供了一种广谱的识别IBDV VP2高变区蛋白的单克隆抗体5G10，经鉴定重链亚型为IgG1，其识别的线性抗原表位位于343PGALRP348。与现有技术相比，本发明的有益技术效果在于：1）本发明以IBDV新型变异株VP2的高变区蛋白作为免疫原，该段序列抗原性和亲水性良好，制备的重组蛋白rVP2‑HVR以可溶性形式表达于上清中。2）本发明制备的单克隆抗体5G10与不同毒力IBDV毒株的VP2蛋白均有良好的反应性，可用于IBDV的检测。3）本发明制备的单克隆抗体5G10所识别的抗原表位为线性表位，其所识别的关键氨基酸位于VP2 343PGALRP348。
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公开(公告)号：CN117825704A
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202410020201.1
申请日：2024-01-07
申请人： 扬州大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/58 , G01N33/535 , C07K14/075 , C12N15/70 , C12N5/20 , C12N15/34 , C07K16/08
摘要： 本发明涉及一种基于Fiber‑2蛋白和抗Fiber‑2蛋白单克隆抗体的检测鸭3型腺病毒抗体的竞争ELISA方法，首次使用单克隆抗体进行鸭3型腺病毒抗体的检测，与间接ELISA技术相比，本发明的特异性高，能够有效提高检测的准确性，且不依赖于商品化的酶标二抗，可以应用于不同物种（鸡、鸭和鹅）血清中鸭3型腺病毒抗体检测，是一种简便、快速、稳定、特异的检测鸭3型腺病毒抗体的ELISA方法。使用本发明只需采集鸭群的血清，即可快速准确地检测血清中是否含有鸭3型腺病毒抗体，本发明适合应用于基层鸭群的大批量检测。本发明为鸭3型腺病毒的感染检测以及免疫效果监测提供了技术支持，具有一定的市场应用价值。
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公开(公告)号：CN113005101A
公开(公告)日：2021-06-22
申请号：CN202110332197.9
申请日：2021-03-29
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，其载体骨架为野生型血清4型禽腺病毒SD株；本发明所述的一种基于CRISPR‑Cas9技术的F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒的构建及其应用，选择当下流行的血清4型禽腺病毒作为骨架，通过银染、质谱和免疫共沉淀等技术发现并鉴定FAdV‑4中F2基因与宿主蛋白互作的功能区，随后将功能区删除后成功获得了F2部分缺失型重组FAdV‑4病毒，在体内及体外实验结果均显示，FA4‑Del重组病毒毒力显著降低，能够为SPF鸡提供很好的免疫保护。
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公开(公告)号：CN109957575A
公开(公告)日：2019-07-02
申请号：CN201910278888.8
申请日：2019-04-09
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种山羊痘病毒p32可溶性蛋白的制备方法，利用双酶切获得pGEX‑6p‑1线性化载体以及通过设计扩增山羊痘病毒p32基因片段的引物，利用T4连接酶连接，直接在体外快速重组，获得重组质粒pGEX‑6p‑1‑P32，并将其转化至大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导表达、实现山羊痘病毒的p32蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的可溶性蛋白GST‑P32；本发明设计的引物及基于T4连接酶的克隆策略，可快速构建山羊痘病毒p32基因的原核可溶性表达载体。本发明获得的山羊痘病毒p32可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供p32可溶性蛋白作为山羊痘病毒诊断抗原；作为免疫原获得抗p32蛋白多克隆抗体；为开展山羊痘病毒流行病学调查提供有效诊断试剂；并为进一步探究p32蛋白的生物学功能具有重要意义。
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公开(公告)号：CN105037504B
公开(公告)日：2016-11-30
申请号：CN201510359309.4
申请日：2015-06-25
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明提供了一种AGV2型环形病毒VP2可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX‑6p‑1线性化载体以及AGV2病毒VP2基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP2，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP2蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP2可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP2可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供VP2可容性蛋白作为AGV2诊断抗原；作为免疫原获得抗VP2多克隆抗体；为开展AGV2血清学流行病学调查及VP2功能研究提供有效免疫学试剂，填补国内外空白；并为进一步探究VP2生物学功能具有重要意义。
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公开(公告)号：CN118185885A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202410361207.5
申请日：2024-03-27
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术构建的表达H3N8禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法，H3N8禽流感病毒HA蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；重组血清4型禽腺病毒，其中使用H3N8禽流感病毒HA基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸。本发明利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入H3N8禽流感病毒HA基因，成功获得了表达H3N8禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒，此重组病毒可作为免疫防控H3N8以及血清4型腺病毒的二联疫苗候选株。
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公开(公告)号：CN113354717B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202110631147.0
申请日：2021-06-07
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C07K14/165 , C07K19/00 , C12N15/50 , C12N15/70 , C07K16/10 , G01N33/569 , A61K39/42 , A61P31/14
摘要： 本发明提供了一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原及其特异性中和抗体和应用，属于病毒免疫检测技术领域。一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，与SARS‑CoV‑2人阳性血清的反应，能够特异性与新冠病毒抗体结合。基于本发明的多肽序列，利用PCR、原核表达及蛋白纯化技术，制备了三重SARS‑CoV‑2广谱多肽串联融合蛋白，模拟SARS‑CoV‑2S蛋白自然状态下三聚体模式，以该融合蛋白作为抗原免疫小鼠，可以产生抗SARS‑CoV‑2特异性中和抗体，所述中和抗体在SARS‑CoV‑2抗感染治疗、疫苗研发和检测试剂盒研制中将具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113201561A
公开(公告)日：2021-08-03
申请号：CN202110497755.7
申请日：2021-05-08
申请人： 扬州大学
摘要： 本发明涉及到一种精确敲除鸡NHE1基因W38位氨基酸的细胞系构建方法，本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡NHE1基因W38位氨基酸的sgRNA，之后转染带有sgRNA和Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒，利用CRISPR‑Cas9系统达到基因位点的精确敲除，通过药物筛选及亚克隆的方法获得单克隆细胞株，从而获得鸡源NHE1基因W38位敲除的细胞系。
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公开(公告)号：CN113061586A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110332476.5
申请日：2021-03-29
申请人： 扬州大学
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/861 , C12N15/113 , C12N15/34 , C12R1/93
摘要： 本发明涉及表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，发明的原理和最核心的关键技术是利用sgRNA，替换EGFP后进行病毒纯化，获得可以稳定扩增血清8型禽腺病的纤突蛋白的重组禽腺病毒。利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入的血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F，成功获得了表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白的重组FAdV‑4，在体外实验结果显示，FAdV4‑F1‑F‑F2重组病毒与FAdV‑4野毒的复制能力几乎相同，可作为防控FAdV‑4和FAdV‑8的灭活重组多价苗。
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