源于鸡传染性贫血病毒VP1-aa 23-43多肽作为高效细胞穿膜肽的应用

    公开(公告)号:CN106995487B

    公开(公告)日:2019-12-03

    申请号:CN201710248386.1

    申请日:2017-04-17

    申请人: 扬州大学

    IPC分类号: C07K14/01

    摘要: 本发明涉及一种源于鸡传染性贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)VP1‑aa 23‑43多肽作为高效细胞穿膜肽的应用。所述VP1‑aa 23‑43多肽序列如SEQ ID NO.2所示。该多肽可以携带FITC在30min内进入293T细胞、HCT‑116细胞、3T3细胞、MDCK细胞、MSB1细胞,而且穿膜效率与穿膜肽浓度呈正相关性,关键特点其可高效进入悬浮培养细胞。结合激光共聚焦显微镜和流式细胞术结果显示,鸡传染性贫血病毒VP1‑aa 23‑43多肽在10μM时具有比TAT短肽的穿膜效率高2倍多。

    一种山羊痘病毒p32可溶性蛋白的制备方法

    公开(公告)号:CN109957575A

    公开(公告)日:2019-07-02

    申请号:CN201910278888.8

    申请日:2019-04-09

    申请人: 扬州大学

    IPC分类号: C12N15/70 C12N15/66 C12N15/62

    摘要: 本发明涉及一种山羊痘病毒p32可溶性蛋白的制备方法,利用双酶切获得pGEX‑6p‑1线性化载体以及通过设计扩增山羊痘病毒p32基因片段的引物,利用T4连接酶连接,直接在体外快速重组,获得重组质粒pGEX‑6p‑1‑P32,并将其转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达、实现山羊痘病毒的p32蛋白与GST的融合可溶性表达,并获得纯化的可溶性蛋白GST‑P32;本发明设计的引物及基于T4连接酶的克隆策略,可快速构建山羊痘病毒p32基因的原核可溶性表达载体。本发明获得的山羊痘病毒p32可溶性表达及纯化的蛋白,可直接提供p32可溶性蛋白作为山羊痘病毒诊断抗原;作为免疫原获得抗p32蛋白多克隆抗体;为开展山羊痘病毒流行病学调查提供有效诊断试剂;并为进一步探究p32蛋白的生物学功能具有重要意义。