公开(公告)号：CN115786282A

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202211600743.3

申请日：2022-12-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 郭艺文 ,  邵红霞 ,  林昀 ,  叶建强 ,  谢泉 ,  张雯苑 ,  秦爱建 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/861 ,  C12N15/65 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种表达鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的重组血清4型禽腺病毒的构建，构建方法包括以下步骤：设计针对血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的sgRNA；通过PCR和同源重组的方法构建携带鸭3型腺病毒Fiber‑2基因和RFP表达盒的供体质粒，其中的RFP表达盒两端分别带有LoxP位点；将生长良好的LMH细胞经胰酶消化后接种六孔板培养，第二天转染sgRNA和供体质粒各3μg，转染6h后换成细胞生长液；转染48h后感染血清4型禽腺病毒，感染2h后换成细胞维持液；感染血清4型禽腺病毒后观察RFP红色荧光，进行红色荧光重组病毒的纯化，获得带有RFP表达盒的表达鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的重组血清4型禽腺病毒。通过本发明，为构建鸭3型腺病毒和血清4型禽腺病毒的二价疫苗提供了技术支撑。

公开(公告)号：CN116359496A

公开(公告)日：2023-06-30

申请号：CN202211601049.3

申请日：2022-12-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  林昀 ,  张雯苑 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  万志敏 ,  李拓凡 ,  谢泉 ,  钱琨 ,  金文杰

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/535 ,  G01N33/58 ,  C12N15/70 ,  C12N15/34 ,  C07K16/08 ,  C12N5/20

Abstract: 一种基于Fiber‑2蛋白检测鸭3型腺病毒的双抗体夹心ELISA，包括:1)包被抗体：鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的单克隆抗体，即捕获抗原的抗体；2)酶标二抗：酶标的鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的单克隆抗体，即检测抗体；其中，包被抗体与酶标二抗是针对鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的同一株单克隆抗体，由杂交瘤细胞株DAdV‑3‑Fiber‑2‑3D9分泌获得。通过本发明，建立的鸭3型腺病毒夹心ELISA检测方法快速、稳定、特异性高，使用本发明只需采集泄殖腔分泌物或其它含有鸭3型腺病毒的样品，即可快速准确地检测样品中是否含有鸭3型腺病毒。本发明适合应用于鸭群是否感染鸭3型腺病毒的大批量检测。

公开(公告)号：CN117825704A

公开(公告)日：2024-04-05

申请号：CN202410020201.1

申请日：2024-01-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  林昀 ,  万志敏 ,  李拓凡 ,  谢泉 ,  王伟康 ,  邵红霞 ,  秦爱建

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/58 ,  G01N33/535 ,  C07K14/075 ,  C12N15/70 ,  C12N5/20 ,  C12N15/34 ,  C07K16/08

Abstract: 本发明涉及一种基于Fiber‑2蛋白和抗Fiber‑2蛋白单克隆抗体的检测鸭3型腺病毒抗体的竞争ELISA方法，首次使用单克隆抗体进行鸭3型腺病毒抗体的检测，与间接ELISA技术相比，本发明的特异性高，能够有效提高检测的准确性，且不依赖于商品化的酶标二抗，可以应用于不同物种（鸡、鸭和鹅）血清中鸭3型腺病毒抗体检测，是一种简便、快速、稳定、特异的检测鸭3型腺病毒抗体的ELISA方法。使用本发明只需采集鸭群的血清，即可快速准确地检测血清中是否含有鸭3型腺病毒抗体，本发明适合应用于基层鸭群的大批量检测。本发明为鸭3型腺病毒的感染检测以及免疫效果监测提供了技术支持，具有一定的市场应用价值。