一种血浆cfDNA全局性甲基化检测方法及应用

    公开(公告)号:CN109825559A

    公开(公告)日:2019-05-31

    申请号:CN201910180935.5

    申请日:2019-03-11

    Abstract: 本发明公开了一种血浆cfDNA全局性甲基化检测方法及应用,涉及生物检测技术领域,其中,所述血浆cfDNA全局性甲基化检测方法为在从血浆中提取出的少量cfDNA中补加甲基化且含有生物素标记的外源DNA(λDNA),然后进行富集甲基化实验,将收集的产物通过PCR扩增后,再基于生物素-链霉亲和素反应、采用链霉亲和素磁珠去除带有生物素标记的λDNA,得到cfDNA扩增文库,并进行高通量测序。本发明适用于少量的血浆cfDNA甲基化分析,无需特定地商品化试剂盒,操作简便高效,减少了样品的损失、提高了建库效率、且极大地提高了MeDIP等富集甲基化实验方法地检测灵敏性,具有较广泛的适用性。

    一种检测少量样品全基因组DNA甲基化的方法

    公开(公告)号:CN109097439A

    公开(公告)日:2018-12-28

    申请号:CN201811024725.9

    申请日:2018-09-04

    Abstract: 本发明提供了一种检测少量样品全基因组DNA甲基化的方法。具体地,本发明的方法包括步骤:(a)提供DNA片段;(b)在所述DNA片段两端添加接头;(c)向所述末端带有接头的DNA中加入辅助核酸片段,形成第一混合物;(d)将所述第一混合物进行热变性,使双链DNA成为单链DNA,形成第二混合物;(e)用特异性抗体对所述第二混合物中甲基化的核酸片段进行捕获;(f)用特异性引物对被捕获的核酸片段进行扩增,从而获得含有甲基化的核酸片段的扩增产物。本发明的方法适用于极少量来源样品的甲基化核酸测序分析,而且成本较低,具有很高的普遍适用性。

    一种微量DNA样品高通量测序文库的构建技术

    公开(公告)号:CN109023537A

    公开(公告)日:2018-12-18

    申请号:CN201811025369.2

    申请日:2018-09-04

    CPC classification number: C40B50/06

    Abstract: 本发明提供了一种微量DNA样品高通量测序文库的构建技术。具体地,本发明方法包括步骤:(a)提供DNA片段和辅助核酸片段;(b)向DNA片段和辅助核酸片段两端添加接头;(c)用特异性抗体捕获、富集末端带有接头的DNA片段和辅助核酸片段;(d)用特异性酶去除所述辅助核酸片段;(e)用特异性引物对所述步骤(c)中捕获、富集的DNA片段和辅助核酸片段进行扩增,从而获得扩增产物。本发明方法更适用于少量来源的微量样品的文库构建;文库质量好,无污染;成本较低,具有较高的普遍适用性。

    四色荧光标记可逆终端及其在DNA测序中的用途

    公开(公告)号:CN103484106B

    公开(公告)日:2015-08-19

    申请号:CN201310401580.0

    申请日:2013-09-05

    Abstract: 本发明公开了一种四色荧光标记可逆终端及其在DNA测序中的用途;所述可逆终端的结构式如式(I)所示:(I);其中,R1为三磷酸盐;R2为H或者OH;碱基为U,C,A,G或其衍生物;连接单元为在温和条件下可以断裂的双官能团化合物;荧光基团选自BODIPY、荧光素、罗丹明、香豆素、呫吨、花青、芘、酞菁、alexa、squarene染料、产生能量转移染料的组合以及其衍生物中的一种。本发明的可逆终端可用于DNA单分子测序;同时,本发明的可逆终端的合成所需原料简单易得,合成过程均为常规化学反应,可用于大规模推广使用,并且生物学评价结果表明该类可逆终端能完全满足高通量测序的生化反应要求,具备很好的实用前景。

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