基于16SrRNA鹌鹑肉源成分PCR扩增鉴定方法和专用引物

    公开(公告)号:CN107345250B

    公开(公告)日:2020-08-21

    申请号:CN201710503231.8

    申请日:2017-06-27

    Abstract: 本发明公开了一种快速检测食品中鹌鹑源性成分的方法及专用引物。专用引物见序列表SEQ ID NO 1‑2。针对以鹌鹑肉源DNA为阳性模板,牛、羊、猪、兔、鸽、鸡、鸭和鹅8个物种的DNA为干扰模板的混合模板,分别进行PCR和qPCR反应。其中PCR方法的结果以琼脂糖凝胶电泳图谱中电泳条带为阳性结果,而qPCR方法中以扩增曲线的Ct值小于34的扩增作为阳性结果,检测灵敏度达皮克级DNA。该方法首次利用16S rRNA为目标基因对深加工鹌鹑肉进行检测,所设计引物同时适用于PCR和qPCR方法中,不仅具有良好的特异性,且高度的灵敏性为食品中动物源性成分的鉴定探索了新的途径,具有操作便捷,稳定准确等有益结果。

    一种鸡胚肝细胞体外分离培养及脂肪变性模型建立方法

    公开(公告)号:CN109182247A

    公开(公告)日:2019-01-11

    申请号:CN201811026047.X

    申请日:2018-09-04

    Abstract: 本发明公开了细胞毒理技术领域的一种鸡胚肝细胞体外分离培养及脂肪变性模型建立方法。该方法包括如下步骤:(1)取SPF鸡胚;(2)剪碎;(3)消化;(4)离心:弃上清,留取沉淀物加入预热的Williams’E完全培养液重悬,得到细胞悬液B;(5)细胞分离:采用Percoll密度梯度离心;(6)取肝细胞:吸取界面处细胞加入D-Hank’s液吹打混匀,置于离心机离心,弃上清,留取沉淀物加D-Hank’s液冲洗重悬,重复离心2-3次,弃上清,留取沉淀物并加入Williams’E完全培养液,得到细胞悬液C;(7)计数;(8)种板;(9)换液;(10)诱导脂肪变性:种板后30-40h后,更换诱导剂进行培养,培养10-15h,获得脂肪变性肝细胞。本发明能够快速获得原代培养细胞,纯度高,同时诱导时间短。

    鸡mtDNA D-loop区全序列扩增及测序方法和专用引物

    公开(公告)号:CN105039502B

    公开(公告)日:2018-11-09

    申请号:CN201410836929.8

    申请日:2014-12-29

    Abstract: 本发明公开了一种鸡mtDNA D‑loop区全序列扩增及测序方法和专用引物,属于鸡线粒体基因组研究领域。鸡mtDNA D‑loop区全序列扩增及测序用引物,见序列表SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3。扩增及测序方法,包括以下步骤:(1)提取鸡羽毛中的DNA,并检测质量;(2)在鸡mtDNA D‑loop区上下游保守区域设计一对PCR引物(见序列表SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2),通过PCR反应扩增包含Cytb基因的片段,经琼脂糖电泳检测;(3)设计测序引物(见序列表SEQ ID NO.3)对PCR产物进行测序;(4)对测序序列进行拼接。本发明的检测方法具有速度快、成本低、易掌握等优点,所获得的mtDNA D‑loop区全序列可以应用于鸡遗传资源多样性评估、母系起源、系统进化分析和种质资源鉴定与保护等多个领域。

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