公开(公告)号：CN108441459A

公开(公告)日：2018-08-24

申请号：CN201810147126.X

申请日：2018-02-12

申请人： 浙江工业大学

发明人： 柳志强 ,  张博 ,  郑裕国 ,  黄恺 ,  牛坤 ,  周奕腾

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12P19/62 ,  C12R1/465

摘要： 本发明公开了一种产两性霉素的重组结节链霉菌及其应用，所述重组结节链霉菌是将SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4与SEQ ID NO.5所示的透明颤菌血红蛋白(Vhb)、S-腺苷甲硫氨酸合成酶(Metk)、两性霉素合成基因簇调控因子(AmphRIV)、次级代谢产物全局调控因子(AraC)以及红霉素强启动子ermE*p序列导入结节链霉菌(Streptomyces nodosus)ZJB2016050获得。通过导入并过表达上述基因，使重组结节链霉菌中，两性霉素B产量提高约45％，副产物两性霉素A产量降低60％，并缩短在发酵过程中菌体生长周期，达到提升生产效率的目的。

公开(公告)号：CN108410831A

公开(公告)日：2018-08-17

申请号：CN201810239718.4

申请日：2018-03-22

申请人： 浙江工业大学

发明人： 薛亚平 ,  郑裕国 ,  王闯 ,  柳志强

IPC分类号： C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N1/21 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种酮酸还原酶、基因、工程菌及在合成手性芳香2-羟酸中的应用，所述酮酸还原酶氨基酸序列为SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.10之一所示；本发明提供一种来源于乳酸明串珠菌的高效酮酸还原酶，其能够催化广谱芳香族2-酮酸，且以苯乙酮酸为底物的底物装载量由100mM提升至400mM。利用酮酸还原酶、2-羟酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶建立的单菌双质粒三酶串联氧化还原级联体系，能够催化大多数外消旋芳香2-羟酸高效去消旋化为手性芳香(R)-2-羟酸，收率和e.e.值均大于99％。最终应用于去消旋300mM邻氯扁桃酸制备光学纯(R)-邻氯扁桃酸，收率高达83.8g/(L·d)。

公开(公告)号：CN107653238A

公开(公告)日：2018-02-02

申请号：CN201710965085.0

申请日：2017-10-17

申请人： 浙江工业大学

发明人： 柳志强 ,  郑裕国 ,  张晓健 ,  姚丹凯 ,  王亚军 ,  郑玲 ,  王文重

IPC分类号： C12N11/14 ,  C12P7/62 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

CPC分类号： C12N11/14 ,  C12P7/62 ,  C12P13/004

摘要： 本发明提供了一种利用固定化大肠杆菌(E.coli)工程菌细胞催化合成他汀类药物手性中间体(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯与(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的方法。包括含羰基还原酶大肠杆菌工程菌的培养、固定化细胞的制备、固定化细胞催化新型药物手性中间体(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯与(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁的合成。本发明方法采用固定化生物大肠杆菌工程菌细胞为催化剂，稳定性好，使用寿命长，有机溶剂耐受性好，可多次重复利用，并且无需昂贵的外源辅酶添加，可在有机相反应体系中催化他汀药物中间体的合成，产品产率与纯度高，并可大幅度降低生产成本，简化工艺步骤，减少“三废”排放，在他汀类药物手性中间体的工业化生产中具有极高应用价值。

公开(公告)号：CN107058251A

公开(公告)日：2017-08-18

申请号：CN201710257065.8

申请日：2017-04-19

申请人： 浙江工业大学

发明人： 柳志强 ,  郑裕国 ,  吴林 ,  张晓建 ,  薛亚平 ,  王亚军

IPC分类号： C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/62

摘要： 本发明公开了一种重组羰基还原酶突变体、基因、载体、工程菌及其应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第95位、第144位或第156位进行单点突变获得的。本发明提供一种具有还原(S)‑6‑氯‑5‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯的重组羰基还原酶突变体，该突变体相比于野生型酶在转化上述反应时催化活力和底物耐受性大大提高，反应进程耗时明显缩短。相比于化学法制备(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯，本发明提供的技术所得产品立体选择性高，简化了繁琐的化学催化步骤，反应条件更加温和，对设备要求低，降低了反应成本，且对环境友好。

公开(公告)号：CN104212784B

公开(公告)日：2017-06-23

申请号：CN201410394471.5

申请日：2014-08-12

申请人： 浙江工业大学

发明人： 郑裕国 ,  柳志强 ,  张新红 ,  薛亚平 ,  徐喆 ,  贾东旭 ,  沈寅初

IPC分类号： C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00

摘要： 本发明公开了一种源自于敏捷食酸菌(Acidovorax facilis)ZJB09122的重组腈水解酶、编码基因、突变体、工程菌，以及在制备1‑氰基环己基乙酸中的应用；本发明提供一种水解1‑氰基环己基乙腈的腈水解酶及其突变体，该酶及其突变体在催化上述反应时具有良好的区域选择性和催化活力，生产过程对环境友好；解决传统的化学法水解1‑氰基环己基乙腈为1‑氰基环己基乙酸的工艺中，反应条件苛刻，反应中需要大量的有机溶剂，成本较高，收率较低，环境污染较为严重的问题。

公开(公告)号：CN104130992B

公开(公告)日：2017-01-04

申请号：CN201410308584.9

申请日：2014-06-30

申请人： 浙江工业大学 ,  杭州中美华东制药有限公司

发明人： 柳志强 ,  郑裕国 ,  林善 ,  薛亚平 ,  吴晖 ,  李邦良 ,  许静 ,  许峰 ,  王鸿艳

IPC分类号： C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N1/21 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供了一种来自“百令”生产菌冬虫夏草中国被毛孢的参与水解胶体几丁质生成N-乙酰-D-氨基葡萄糖的几丁质酶(Chitinase)A，编码这个酶基因及其应用。所述几丁质酶A的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，编码基因如SEQ ID No.2所示。本发明所提供的核苷酸序列的克隆DNA可以用来通过转导、转化、结合转移的方法转入工程菌中，通过调节几丁质水解以及N-乙酰-D-氨基葡萄糖合成基因的表达，赋予宿主几丁质酶A的高表达性，为扩大几丁质酶A的生物应用提供了有效途径，具有重大应用前景。

公开(公告)号：CN104120118B

公开(公告)日：2017-01-04

申请号：CN201410307406.4

申请日：2014-06-30

申请人： 浙江工业大学 ,  杭州中美华东制药有限公司

发明人： 柳志强 ,  郑裕国 ,  林善 ,  薛亚平 ,  吴晖 ,  李邦良 ,  许静 ,  许峰 ,  王鸿艳

IPC分类号： C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

摘要： 性，为扩大精氨酸酶的生物应用提供了有效途本发明涉及来自“百令”生产菌冬虫夏草中 径，具有重大应用前景。国被毛孢参与尿素循环机制机理的精氨酸酶(Arginase)，编码这个酶的基因及其应用。所述精氨酸酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其编码基因核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明从原理上对L-精氨酸合成尿素进行了详细研究，提供了“百令”生产菌冬虫夏草中国被毛孢参与尿素循环机制机理的精氨酸酶及其编码基因，本发明所提供的核苷酸序列的克隆DNA可以用来

公开(公告)号：CN105886449A

公开(公告)日：2016-08-24

申请号：CN201610232254.5

申请日：2016-04-14

申请人： 浙江工业大学

发明人： 郑裕国 ,  柳志强 ,  黄建峰 ,  沈寅初

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12P13/12 ,  C12R1/19

CPC分类号： C12N9/10 ,  C07K14/00 ,  C12P13/12

摘要： 本发明公开了一种重组大肠杆菌及其生产L?甲硫氨酸的应用，所述重组大肠杆菌构建方法为：将大肠杆菌的metJ基因敲除后，转入metA*基因和yjeH基因，再敲除metI基因，然后敲除lysA基因和/或thrB基因构建而成；所相比较于出发菌株E.coli W3110几乎不能在胞外积累L?甲硫氨酸(

公开(公告)号：CN104962540A

公开(公告)日：2015-10-07

申请号：CN201510381618.1

申请日：2015-06-30

申请人： 浙江工业大学

发明人： 郑裕国 ,  郑仁朝 ,  张琴 ,  柳志强 ,  徐明波

IPC分类号： C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12P13/00

CPC分类号： C12N9/78 ,  C12P13/002 ,  C12Y305/05001

摘要： 本发明公开了一种来源于芜菁(Brassica rapa)的腈水解酶，编码基因及其在生物催化制备普瑞巴林手性中间体(S)-3-氰基-5-甲基己酸中的应用，所述腈水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；本发明提供了一种高区域、高立体选择性水解制备(S)-3-氰基-5-甲基己酸的新腈水解酶，该腈水解酶水解底物浓度可达1M以上，且ee值保持在99％以上。通过该腈水解酶可制备普瑞巴林的重要手性中间体——(S)-3-氰基-5-甲基己酸；本发明中所述(S)-3-氰基-5-甲基己酸的制备方法具有原子经济性高、条件温和、环境友好等优点，具有较高的工业化应用潜力。

公开(公告)号：CN104774825A

公开(公告)日：2015-07-15

申请号：CN201510127744.4

申请日：2015-03-23

申请人： 浙江工业大学

发明人： 薛亚平 ,  郑裕国 ,  施成赐 ,  徐喆 ,  柳志强

IPC分类号： C12N9/78 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P41/00 ,  C12P7/42

CPC分类号： C12N9/78 ,  C12P7/42 ,  C12Y305/05001

摘要： 本发明公开了一种腈水解酶突变体及其在R-邻氯扁桃酸合成中的应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第132位苏氨酸或第189位苯丙氨酸进行单突变或双突变获得的；本发明所述的腈水解酶突变体较未突变的腈水解酶比酶活提高3.70倍，达到1.08U/mg，对映体选择性达到99％，且结果表明，腈水解酶突变体在两相体系中(甲苯：水＝2：8)，可催化300mM邻氯扁桃腈，产率90.8％，通过流加底物的方式，最高可催化500mM邻氯扁桃腈，产率90％，对映体选择性大于99％。