一种低丰度基因突变的富集方法

    公开(公告)号:CN107858401A

    公开(公告)日:2018-03-30

    申请号:CN201711050889.4

    申请日:2017-10-31

    IPC分类号: C12Q1/6806

    摘要: 本发明公开了一种低丰度基因突变的富集方法,本发明方法在PCR反应体系中使用高保真DNA聚合酶和3'末端碱基在基因突变位点上且3'末端被封闭的引物,并加入3'末端被封闭的含所述突变位点的核苷酸单链,通过设置关键变性温度Tc使所述3'末端被封闭的核苷酸单链与突变型序列杂交形成的异源双链DNA解链,但与野生型序列杂交形成的同源双链DNA不能解链,然后引物退火后高保真DNA聚合酶将3'末端被封闭且3'末端碱基错配的引物的配错碱基移除使其继续延伸,从而选择性地从大量野生型序列中扩增低丰度突变序列,使突变序列得以富集。该发明操作简单易行且扩增准确度和灵敏度高,可应用于医学和生物学的诸多领域。

    用于次要等位基因和多态性的鉴定和定量的多重化方法

    公开(公告)号:CN107406882A

    公开(公告)日:2017-11-28

    申请号:CN201680013462.4

    申请日:2016-04-22

    IPC分类号: C12Q1/68

    摘要: 本文提供了用于检测含有次要核酸物质和一种或多种主要核酸物质的混合物的样品中次要核酸物质是否存在的产品和方法,其中次要核酸物质的量(频率或拷贝数)小于主要核酸物质的量。某些方法包括扩增混合物并用链终止剂和与扩增子特异性杂交的延伸引物延伸所得的扩增子,其中针对主要核酸物质特异性的链终止剂具有小于对于次要核酸物质特异性的链终止剂的浓度。使链终止剂的浓度倾向于相对于主要核酸物质特异性链终止剂有利于对于次要核酸物质特异性的链终止剂的高浓度改善了检测在混合物中以低频率或拷贝数存在的次要核酸物质的检测限(灵敏度)。另外,从主要核酸物质扩增子的延伸产物生成的信号可用作阳性对照并且允许相对于混合物中的主要核酸物质对次要核酸物质进行定量。