新的紫杉醇产生菌及其发酵法生产紫杉醇

    公开(公告)号:CN1377957A

    公开(公告)日:2002-11-06

    申请号:CN01111070.8

    申请日:2001-03-28

    IPC分类号: C12N1/20 C12P17/02

    摘要: 本发明涉及到从东北红豆杉中分离到一种内生真菌——树状多节孢(Nodulisporium sylviforme),是我国的一新记录属和新记录种。也是国际上新发现的紫杉醇产生菌,经过常规与生物工程手段选育出来的工程菌株,发酵后其紫杉醇产量可达420ug/L以上。这是目前已有报道中紫杉醇产量最高的菌种。用该工程菌株及其衍生株,通过发酵法生产紫杉醇,具有生产方法新,生产周期短,菌种的选育及保藏容易,紫杉醇药源可以得到充分保证等优点,且有利于维持生态平衡和保护自然资源。

    紫杉醇产生菌的工程菌株及其应用

    公开(公告)号:CN100451100C

    公开(公告)日:2009-01-14

    申请号:CN01111070.8

    申请日:2001-03-28

    IPC分类号: C12N1/20 C12P17/02 C12R1/645

    摘要: 紫杉醇产生菌及其应用,它涉及一种可生产紫杉醇的菌种及其应用。本发明的紫杉醇产生菌已在中国典型培养物保藏中心保藏,分类命名为树状多节孢(Nodulisporium sylviforme),保藏编号为CCTCC M201007,保藏日期为2001年3月26日。紫杉醇产生菌可用于微生物发酵法生产紫杉醇。本发明经过常规与生物工程手段选育出的工程菌株,发酵后的紫杉醇产量可达到420μg/L以上。

    一种乳酸菌二腺苷酸环化酶基因敲除方法

    公开(公告)号:CN118086348A

    公开(公告)日:2024-05-28

    申请号:CN202410104051.2

    申请日:2024-01-25

    申请人: 黑龙江大学

    摘要: 一种乳酸菌二腺苷酸环化酶基因敲除方法,属于基因工程技术领域。本发明涉及一种乳酸菌二腺苷酸环化酶基因敲除方法,通过融合PCR的方法构建含有氯霉素抗性基因及目的基因上下游同源臂的同源重组片段,并利用自杀质粒同源重组的技术将同源重组片段电转化到宿主基因组,在抗性基因及sacB蔗糖毒杀位点的作用下筛选单、双交换菌株以实现无痕敲除,获得乳酸菌二腺苷酸环化酶基因缺失菌株。本发明通过构建肠膜明串珠菌二腺苷酸环化酶基因缺失菌株,探明二腺苷酸环化酶在乳酸菌EPS生物合成过程中的作用,提高EPS产量。

    一种乳酸菌葡聚糖蔗糖酶的分离纯化方法

    公开(公告)号:CN113430185A

    公开(公告)日:2021-09-24

    申请号:CN202110861556.X

    申请日:2021-07-29

    申请人: 黑龙江大学

    IPC分类号: C12N9/10 C12N1/20 C12R1/01

    摘要: 一种乳酸菌葡聚糖蔗糖酶的分离纯化方法,涉及一种蛋白酶的分离纯化方法。乳酸菌葡聚糖蔗糖酶的分离纯化方法:一、将柠檬明串珠菌N21接种于MRS液体培养基;再将种子液接种于产酶液体培养基发酵;二、将发酵液离心,取上清液,得到葡聚糖蔗糖酶粗酶液;三、粗酶液中加入硫酸铵并连续搅拌,再将沉淀溶于去离子水中透析;四、用DEAE‑sepharose FF阴离子交换层析和Sepadex G75分子筛层析纯化浓缩,超滤浓缩,之后冷冻干燥,得到固态葡聚糖蔗糖酶。本发明葡聚糖蔗糖酶分子量为170kDa,体外最适反应温度为30℃、最适pH值为5.5。金属离子K+、Na+、Ca2+和Tween 80对本发明获得的乳酸菌葡聚糖蔗糖酶具有促进作用,Zn2+、Hg+、Cu2+和Fe3+对本发明获得的乳酸菌葡聚糖蔗糖酶有抑制作用。

    高产2,3-丁二醇的产酸克雷伯氏基因工程菌株的构建方法及其发酵方法

    公开(公告)号:CN105647954A

    公开(公告)日:2016-06-08

    申请号:CN201610157906.3

    申请日:2016-03-18

    申请人: 黑龙江大学

    CPC分类号: C12N9/0006 C12P7/18

    摘要: 高产2,3-丁二醇的产酸克雷伯氏基因工程菌株的构建方法及其发酵方法,涉及一种高产2,3-丁二醇的基因工程菌株的构建方法及其发酵方法。本发明是为了解决目前产酸克雷伯氏菌产2,3-丁二醇产量低、转化率低、生产强度低及纯度低的问题。构建方法:一、ldh基因同源左臂片段ldh-L和右臂片段ldh-R的构建;二、pldh-L和pldh-R质粒构建;三、pldh-LR质粒构建;四、pT-Cmr质粒构建;五、同源重组片段ldhL-Cmr-ldhR的构建;六、K.oxytoca HD79/pKD46菌株构建;七、ldhL-Cmr-ldhR转化K.oxytoca HD79/pKD46。发酵方法:一、将产酸克雷伯氏基因工程菌株接种到种子培养基中,培养至对数生长期,得种子液;二、将种子液接种到发酵培养基中,底物葡萄糖150g/L,发酵,结束。本发明用于生产2,3-丁二醇。

    一种亚麻脱胶液及其制备方法

    公开(公告)号:CN104928763A

    公开(公告)日:2015-09-23

    申请号:CN201510271462.1

    申请日:2015-05-26

    申请人: 黑龙江大学

    IPC分类号: D01C1/04

    CPC分类号: D01C1/04

    摘要: 一种亚麻脱胶液及其制备方法,它涉及一种植物纤维脱胶液及其制备方法。它解决了目前沤麻脱胶的方法中加入的微生物污染沤麻液、污染环境;以及加入纯酶制剂成本大幅上升、而且容易失活的问题。亚麻脱胶液由接种地衣芽胞杆菌HDYM-03的魔芋粉液体培养基发酵、离心取上清液制备而成。亚麻脱胶液按以下步骤制备:将地衣芽胞杆菌HDYM-03接种于魔芋粉液体培养基中,培养,然后离心,取上清液即得到亚麻脱胶液。亚麻脱胶液脱胶时间短、脱胶彻底、残胶率低,纤维素得率高、强度高。亚麻脱胶液的制备方法简单,成本低廉。

    副干酪乳杆菌HD1.7prcK基因siRNA

    公开(公告)号:CN104845972A

    公开(公告)日:2015-08-19

    申请号:CN201510259660.6

    申请日:2015-05-20

    申请人: 黑龙江大学

    IPC分类号: C12N15/113

    摘要: 副干酪乳杆菌HD1.7prcK基因siRNA,它涉及副干酪乳杆菌基因的siRNA分子。它解决构建自杀质粒难度大,同源臂的长短依赖目的基因的长短,不利于同源重组的发生等问题。siRNA-K1核苷酸序列为5'-GCAACGCUCCAACUUUCAUTT-3'。siRNA-K2核苷酸序列为5'-CCAACUUUCAUUGCAACAATT-3'。本发明的两种siRNA分子都能够高效的阻断副干酪乳杆菌HD1.7prcK基因的表达,从而降低副干酪乳杆菌HD1.7细菌素的产量。

    一株用于直投式酸菜发酵的干酪乳杆菌及其液体培养基

    公开(公告)号:CN104694444A

    公开(公告)日:2015-06-10

    申请号:CN201510149247.4

    申请日:2015-04-01

    申请人: 黑龙江大学

    IPC分类号: C12N1/20 C12R1/245

    CPC分类号: C12R1/245 C12N1/20

    摘要: 一株用于直投式酸菜发酵的干酪乳杆菌及其液体培养基,它涉及一株用于直投式酸菜发酵的微生物及其液体培养基。它解决了现有酸菜直投式发酵剂所选用的乳酸菌存在营养要求复杂、生长缓慢,种子液制备的成本高且周期长,多数乳酸菌产乳酸等有益代谢产物能力有限,与天然发酵酸菜营养成分无明显差异等问题。用于直投式酸菜发酵的干酪乳杆菌为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)HDS-01,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2014648。用于直投式酸菜发酵的干酪乳杆菌的液体培养基由牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、磷酸氢二钾乙酸钠、硫酸镁、硫酸锰、吐温80和蒸馏水组成。