公开(公告)号：CN111944847A

公开(公告)日：2020-11-17

申请号：CN202010889546.2

申请日：2020-08-28

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  李鹏程 ,  李欣憶 ,  唐宝莹 ,  魏泽辉

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/90

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一套等位基因高效替换系统及其建立方法。该系统依赖于一套双筛选表达盒，所述双筛选表达盒针对位于两条姐妹染色单体的等位基因，分别引入了两种不同的荧光蛋白、两种不同的抗性基因，并分别添加胸腺激酶负向筛选基因。利用该表达盒和对应的基因替换系统，我们提供了一种新的基于SSA修复机制的精确编辑思路，可以在实现高效基因组精确编辑的同时，有效避免传统基于Cre/LoxP重组酶系统的LoxP序列残留、转座子系统敲出的筛选基因序列在基因组“跳跃”造成的插入，以及同源重组修复系统二次HDR筛选效率低等问题，为基因组精确编辑提供了一条简洁高效的新思路。

公开(公告)号：CN111961686B

公开(公告)日：2024-08-06

申请号：CN202010888329.1

申请日：2020-08-28

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  李倩 ,  徐坤 ,  李欣憶 ,  邢佳妮 ,  李鹏程 ,  麻丽霞 ,  吕明

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9和PiggyBac实现双等位精确基因组编辑的系统。构建CRISPR/Cas9表达载体、PiggyBac系统介导的供体载体以及PiggyBac转座酶表达载体，通过CRISPR/Cas9表达载体打靶基因组，造成DNA双链断裂，使用PiggyBac系统介导的供体载体进行HDR修复，再利用PiggyBac转座酶表达载体进行筛选标记的删除，从而实现高效、精确的双等位无筛选标记的基因组编辑，可应用于畜禽转基因育种。

公开(公告)号：CN112941107B

公开(公告)日：2024-01-23

申请号：CN202110365085.3

申请日：2021-04-01

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  邢佳妮 ,  麻丽霞 ,  闫强 ,  李鹏程 ,  徐坤 ,  程心珍 ,  闫娜娜 ,  孙永森 ,  李倩

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明公开了一种原核Argonaute蛋白的基因编辑应用，通过构建源于细菌的Argonaute蛋白的原核表达载体，以及在转化宿主细胞后对该Argonaute蛋白的表达载体和共转化载体的降解的检测以及基因组位点的检测，发现了其具有被特异性转录本激活并靶向特定DNA靶序列的能力，并且在真核细胞中转录的导向RNA的参与下，实现了对基因组靶序列进行inDel频率为3％的基因编辑。实验结果表明原核Argonaute蛋白可以用于细胞内基因编辑工具的开发。

公开(公告)号：CN111925980A

公开(公告)日：2020-11-13

申请号：CN202010861528.3

申请日：2020-08-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 魏泽辉 ,  王丹 ,  李鹏程 ,  祝梦琦 ,  董小琳 ,  贾存灵 ,  徐坤 ,  张智英

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种鸡卵泡颗粒的体外培养方法。具体技术方案为：一种细胞培养基，在M199基础培养基中，添加1wt％的双抗，1wt％的复合维生素、1wt％的非必需氨基酸、5wt％的鸡血清。本发明提供了一种新的、针对鸡卵颗粒细胞的培养基，并进一步提供了培养方法。使用该培养基和培养方法，可有效增强鸡颗粒细胞在体外培养下的贴壁能力和增殖能力。

公开(公告)号：CN112941107A

公开(公告)日：2021-06-11

申请号：CN202110365085.3

申请日：2021-04-01

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  邢佳妮 ,  麻丽霞 ,  闫强 ,  李鹏程 ,  徐坤 ,  程心珍 ,  闫娜娜 ,  孙永森 ,  李倩

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明公开了一种原核Argonaute蛋白的基因编辑应用，通过构建源于细菌的Argonaute蛋白的原核表达载体，以及在转化宿主细胞后对该Argonaute蛋白的表达载体和共转化载体的降解的检测以及基因组位点的检测，发现了其具有被特异性转录本激活并靶向特定DNA靶序列的能力，并且在真核细胞中转录的导向RNA的参与下，实现了对基因组靶序列进行inDel频率为3％的基因编辑。实验结果表明原核Argonaute蛋白可以用于细胞内基因编辑工具的开发。

公开(公告)号：CN111961686A

公开(公告)日：2020-11-20

申请号：CN202010888329.1

申请日：2020-08-28

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  李倩 ,  徐坤 ,  李欣憶 ,  邢佳妮 ,  李鹏程 ,  麻丽霞 ,  吕明

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9和PiggyBac实现双等位精确基因组编辑的系统。构建CRISPR/Cas9表达载体、PiggyBac系统介导的供体载体以及PiggyBac转座酶表达载体，通过CRISPR/Cas9表达载体打靶基因组，造成DNA双链断裂，使用PiggyBac系统介导的供体载体进行HDR修复，再利用PiggyBac转座酶表达载体进行筛选标记的删除，从而实现高效、精确的双等位无筛选标记的基因组编辑，可应用于畜禽转基因育种。