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公开(公告)号：CN112370525A
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN202011262351.1
申请日：2020-11-12
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种用于瘦素免疫调节的口服重组酵母菌株，以酵母菌株作为宿主细胞，宿主细胞中转染有ob基因重组表达载体，通过向哺乳动物肠道DC细胞靶向递送ob基因重组表达载体，在DC细胞中表达出相应的重组瘦素蛋白，重组瘦素蛋白通过DC细胞呈递，使黏膜免疫系统产生瘦素抗体，并通过免疫反应降低血液中的瘦素水平，实现对机体高瘦素导致的瘦素不敏感的肥胖的治疗。
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公开(公告)号：CN111876422A
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN202010778704.7
申请日：2020-08-05
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/65 , C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种可用于富集CRISPR/Cas9介导的精确NHEJ修复细胞的筛选报告系统，包括精确NHEJ修复筛选报告载体以及与该筛选报告载体共转染于目标编辑细胞的细胞基因组长片段打靶载体，精确NHEJ修复筛选报告载体包括筛选报告基因表达盒及两个sgRNA表达盒，所述筛选报告基因表达盒的转录区包括用于插入在药物筛选基因序列选定隔断位置的双sgRNA靶位点构建序列，双sgRNA靶位点分别以两个sgRNA表达盒转录的sgRNA作为打靶筛选报告基因表达盒的导引序列。本发明的筛选报告系统通过共转染并进行药物筛选，可以高效的富集目的基因长片段精确删除的阳性细胞克隆。
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公开(公告)号：CN111850051A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010642589.0
申请日：2020-07-06
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了双供体介导的基于药物/荧光协同筛选的双等位基因编辑系统，系统包括两个供体载体，供体载体序列包含左右两段目的基因同源序列和点突变位点及位于左右两段目的基因同源序列之间的外源序列，外源序列分为带有胸腺激酶筛选基因、绿色荧光蛋白、嘌呤霉素抗性基因的若干个表达盒和带有胸腺激酶筛选基因、红色荧光蛋白、博来霉素抗性基因的若干个表达盒。本发明构建的基因编辑系统可以用于对基因组进行精确、高效的双等位编辑。
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公开(公告)号：CN106191116B
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201610703246.4
申请日：2016-08-22
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明提供基于CRISPR/Cas9的外源基因敲入整合系统及其建立方法和应用，系统包括同时具有报告/供体功能的载体及Cas9表达载体，所述报告/供体载体包括两条目标基因同源臂以及位于两条目标基因同源臂之间的外源序列片段；两条目标基因同源臂在目标基因上的同源序分别列位于目标基因靶序列的两侧并与目标基因靶序列相接；外源序列片段包括依次排列的启动子、抗性基因、剪切肽序列、报告基因以及polyA尾，抗性基因内部插入有两段该抗性基因的SSA修复同源序列，并且在两段SSA修复同源序列之间插入有目标基因靶序列。本发明构建了一套能够高效定点精确靶向整合外源基因到內源基因序列的敲入系统，而且能够进行较高效率的双染色体等位基因的双敲入。
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公开(公告)号：CN104031853A
公开(公告)日：2014-09-10
申请号：CN201310429660.7
申请日：2013-09-22
Applicant: 西北农林科技大学 , 陕西省畜牧技术推广总站
Inventor： 张智英 , 张志强 , 辛颖 , 安宁 , 张涛 , 白义春 , 邵斯旻 , 张建峰 , 任充华 , 李铎 , 张龙 , 闫强 , 林娟 , 徐华荣 , 李欣憶 , 刘中天 , 梁明福
Abstract: 本发明公开了一种可用于大规模生产的MSTN酵母菌种的构建方法，该方法步骤为：KanMX4基因片段的扩增和pBlue-KanMX4载体的构建；酵母基因同源臂的插入；pBlue-kan-NTS2-5’3'-MSTN整合载体的构建；将MSTN载体整合入酵母基因组；抗性基因KanMX4的敲除。本发明构建了不含有筛选基因的Myostatin整合型酵母菌株，该菌种可以在富集型培养基中生产，安全可靠成本低，不会造成目的基因丢失，适合于大规模生产重组酵母，采用本发明大规模生产的酵母菌株直接饲喂动物，可在动物体内产生高水平MSTN特异性抗体，解除其抑制作用，促进肌肉生长，这对动物生产具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103146735A
公开(公告)日：2013-06-12
申请号：CN201210580350.0
申请日：2012-12-28
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明TALE重复单元四聚体库的构建方法、TALEN表达载体的构建方法及其应用，属于基因工程技术领域。所述四聚体库的构建包括构建TALE单个重复单元、构建TALE单体质粒以及在T4DNA连接酶缓冲液中加入TALE单体质粒，同时加入BsaI内切酶和T4DNA Ligase进行酶切-连接反应得到TALE重复单元四聚体库的过程。TALEN表达载体是基于TALE重复单元四聚体库构建所得。本发明具有通过PCR扩增和酶切-连接过程就可以构建TALE重复序列四聚体质粒库以及基于四聚体质粒库构建得到TALEN表达载体，减少了成本的投入、减化了构建方法的优点。
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公开(公告)号：CN109880851B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201910244538.X
申请日：2019-03-28
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/65 , C12N15/90 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种用于富集CRISPR/Cas9介导的同源重组修复细胞的筛选报告载体及筛选方法。筛选报告载体包括通用sgRNA表达盒、Cas9表达盒、抗性基因表达盒以及抗性基因同源重组修复模板，筛选报告载体自身可以通过抗性基因序列同源重组修复而使细胞产生抗性。所述的筛选报告载体与用于细胞基因组HDR编辑的打靶载体及供体载体组成共转染系统，可应用于高效富集发生点编辑、片段插入和片段删除的HDR阳性细胞克隆，并且可广泛应用于哺乳动物的多种细胞，显著提高了HDR编辑细胞的筛选效率，同时无需对细胞基因组的无关位置再引入双链断裂与DNA整合，为推动精准基因编辑的研究和应用提供有效途径。
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公开(公告)号：CN111909890A
公开(公告)日：2020-11-10
申请号：CN202010820786.7
申请日：2020-08-14
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/071 , G01N33/569
Abstract: 本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种绒山羊毛乳头细胞的分离、鉴定方法。具体技术方案为：使用SOX2+和/或FGF7+和/或APOD+和/或HHIP+作为毛乳头细胞的标记基因。本发明首次提出了一种可准确分离、鉴定绒山羊毛乳头细胞的方法。在分离上，本发明联合使用酶消化法和机械分离法共同获得细胞，并提供了一种可专用于培养绒山羊毛乳头细胞的培养基，以快速获得所需细胞。在鉴定上，本发明首次联合使用了几种新的标记基因，可快速、准确鉴定所需细胞。
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公开(公告)号：CN107760707A
公开(公告)日：2018-03-06
申请号：CN201710381327.1
申请日：2017-05-25
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒的建立，通过优化UAS数目及GAL4激活/结合域类型，找到一种增强效果较好的表达盒，由自身强启动子CMV启动，借助Gal4/UAS系统使转录和翻译效率提高，从而产生自动激活、级联放大的效果；在转染后第5-10天维持较高的增强效果，第8天表达活性最高，说明表达盒增强基因表达的稳定性；在专门生产重组蛋白的CHO细胞中，增强效果大概是9倍。与现有基因表达盒相比，结构简单、增强效果显著，为基因治疗的非病毒转染途径和重组蛋白生产中增强目的基因表达提供了一种途径和新方法。
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公开(公告)号：CN106755049A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611020358.6
申请日：2016-11-14
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种基于人工核酸酶的可视化细胞修复效率报告系统及其建立方法，包括由插入有目的基因靶位点的报告基因I表达盒、完整的报告基因II表达盒以及报告基因I的截短序列构建的双荧光报告系统表达载体，本发明所述基于人工核酸酶的可视化细胞修复效率报告系统利用并模拟真核细胞内的不同修复机制对报告系统中的相应的荧光表达盒进行修复，可通过流式细胞仪对双荧光报告系统表达载体两种报告基因的表达进行量化，在载体水平一次性报告检测真核细胞中某一确定基因位点HR、SSA和NHEJ的修复效率。
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