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公开(公告)号：CN105861552B
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201610261461.3
申请日：2016-04-25
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明主要属于高等生物体基因组编辑技术领域，具体涉及一种T7 RNA聚合酶介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统的构建方法。所述方法基于T7 RNA聚合酶和T7启动子的高度特异性识别原理，首先构建T7启动子‑sgRNA，将T7启动子‑sgRNA、Cas9表达质粒以及T7 RNA聚合酶表达质粒共同转入细胞，T7 RNA聚合酶催化T7启动子启动sgRNA的转录，从而引导Cas9在靶位点处，进行切割，完成基因编辑过程。本发明所述方法利用T7启动子表达sgRNA，简化了CRISPR/Cas9系统的设计步骤，使得更多的人能够快速简便使用CRISPR/Cas9这一基因编辑工具研究感兴趣的基因位点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105255937A
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201510500937.X
申请日：2015-08-14
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明是利用一个真核细胞III型启动子（U6或H1）启动由Drosha切割位点串联的多个发卡结构小RNA的表达，在真核细胞内表达后可以产生多个有生物活性的CRISPR sgRNA，以U6-sgRNA-shRNA-sgRNA的结构为例，这种U6启动表达的结构在一次转录中产生含有多个sgRNA和shRNA的初级转录本，在真核细胞中这些sgRNA经过加工后可以分别识别各自的靶位点，从而指导Cas9蛋白打靶多个位点，为多基因编辑打下基础。相比于传统的分别表达多个单一gRNA的方法和植物上新近报道的tRNA-gRNA系统，本发明的结构更简单，构建更方便。此外，本发明还可以通过Golden Gate的方法继续串联shRNA-sgRNA的序列打靶更多的位点或者表达多个shRNA干扰基因的表达。
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公开(公告)号：CN112941107A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110365085.3
申请日：2021-04-01
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/55 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种原核Argonaute蛋白的基因编辑应用，通过构建源于细菌的Argonaute蛋白的原核表达载体，以及在转化宿主细胞后对该Argonaute蛋白的表达载体和共转化载体的降解的检测以及基因组位点的检测，发现了其具有被特异性转录本激活并靶向特定DNA靶序列的能力，并且在真核细胞中转录的导向RNA的参与下，实现了对基因组靶序列进行inDel频率为3％的基因编辑。实验结果表明原核Argonaute蛋白可以用于细胞内基因编辑工具的开发。
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公开(公告)号：CN112941107B
公开(公告)日：2024-01-23
申请号：CN202110365085.3
申请日：2021-04-01
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/55 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种原核Argonaute蛋白的基因编辑应用，通过构建源于细菌的Argonaute蛋白的原核表达载体，以及在转化宿主细胞后对该Argonaute蛋白的表达载体和共转化载体的降解的检测以及基因组位点的检测，发现了其具有被特异性转录本激活并靶向特定DNA靶序列的能力，并且在真核细胞中转录的导向RNA的参与下，实现了对基因组靶序列进行inDel频率为3％的基因编辑。实验结果表明原核Argonaute蛋白可以用于细胞内基因编辑工具的开发。
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公开(公告)号：CN105861552A
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201610261461.3
申请日：2016-04-25
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明主要属于高等生物体基因组编辑技术领域，具体涉及一种T7 RNA聚合酶介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统的构建方法。所述方法基于T7 RNA聚合酶和T7启动子的高度特异性识别原理，首先构建T7启动子?sgRNA，将T7启动子?sgRNA、Cas9表达质粒以及T7 RNA聚合酶表达质粒共同转入细胞，T7 RNA聚合酶催化T7启动子启动sgRNA的转录，从而引导Cas9在靶位点处，进行切割，完成基因编辑过程。本发明所述方法利用T7启动子表达sgRNA，简化了CRISPR/Cas9系统的设计步骤，使得更多的人能够快速简便使用CRISPR/Cas9这一基因编辑工具研究感兴趣的基因位点。
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公开(公告)号：CN104031853A
公开(公告)日：2014-09-10
申请号：CN201310429660.7
申请日：2013-09-22
Applicant: 西北农林科技大学 , 陕西省畜牧技术推广总站
Inventor： 张智英 , 张志强 , 辛颖 , 安宁 , 张涛 , 白义春 , 邵斯旻 , 张建峰 , 任充华 , 李铎 , 张龙 , 闫强 , 林娟 , 徐华荣 , 李欣憶 , 刘中天 , 梁明福
Abstract: 本发明公开了一种可用于大规模生产的MSTN酵母菌种的构建方法，该方法步骤为：KanMX4基因片段的扩增和pBlue-KanMX4载体的构建；酵母基因同源臂的插入；pBlue-kan-NTS2-5’3'-MSTN整合载体的构建；将MSTN载体整合入酵母基因组；抗性基因KanMX4的敲除。本发明构建了不含有筛选基因的Myostatin整合型酵母菌株，该菌种可以在富集型培养基中生产，安全可靠成本低，不会造成目的基因丢失，适合于大规模生产重组酵母，采用本发明大规模生产的酵母菌株直接饲喂动物，可在动物体内产生高水平MSTN特异性抗体，解除其抑制作用，促进肌肉生长，这对动物生产具有重要意义。
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