一种基于瓣状核酸内切酶1辅助连接酶链式反应的基因突变检测方法

    公开(公告)号:CN119876356A

    公开(公告)日:2025-04-25

    申请号:CN202510143930.0

    申请日:2025-02-10

    Abstract: 本发明公开一种基于瓣状核酸内切酶1辅助连接酶链式反应的基因突变检测方法。其特点是利用瓣状核酸内切酶1辅助连接酶链式反应对突变型DNA进行高效扩增,通过电化学终点定量检测法或实时荧光定量法对扩增产物进行分析,从而实现对低丰度突变型DNA的超灵敏定量检测。所提出的瓣状核酸内切酶1(FEN1)辅助连接酶链式反应(LCR)通过借助FEN1对摇摆碱基对的识别能力,有效解决了传统LCR检测“转换突变”时易出现的假阳性问题,对基因突变检测具有更高的通用性。此外该方法仅在靶标存在时通过FEN1的酶切效应产生磷酸化切刻,因此无须预先对探针进行磷酸化修饰,从而有效避免了非特异性扩增问题,较为显著提高了检测灵敏度。

    一种靶向IGFL3基因的sgRNA序列及其在提高胶质母细胞瘤放射敏感性中的应用

    公开(公告)号:CN119592568A

    公开(公告)日:2025-03-11

    申请号:CN202411862180.4

    申请日:2024-12-17

    Inventor: 蓝瑞隆 许艳芳

    Abstract: 本发明涉及一种靶向敲除IGFL3基因的sgRNA序列及其在提高胶质母细胞瘤放射敏感性中的应用,属于生物技术领域。所述sgRNA序列为IGFL3‑sgRNA‑1或IGFL3‑sgRNA‑3,利用该sgRNA构建了靶向敲除IGFL3基因的CRISPR/Cas9载体。将上述载体转染至人胶质母细胞瘤细胞U251中,经鉴定可在该细胞中高效敲除IGFL3基因,筛选获得2株IGFL3基因敲除的U251细胞系。通过靶向敲除IGFL3基因,可有效提高人胶质母细胞瘤细胞U251的放射敏感性,本发明为研究IGFL3基因在胶质母细胞瘤放射敏感性中的作用奠定了基础,也为开发该基因作为提高胶质母细胞瘤放射敏感性的潜在分子靶点提供了强有力的工具。

    一种可用于摇摆型碱基对等位基因分型精准测定的比率型DNA电化学传感器

    公开(公告)号:CN116559257A

    公开(公告)日:2023-08-08

    申请号:CN202310504271.X

    申请日:2023-05-07

    Abstract: 本发明公开一种可用于摇摆型碱基对等位基因分型的比率型DNA电化学传感器,特点是创新性地利用非特异性扩增策略(连接酶链式反应,LCR),以及与摇摆型碱基对(GT、AC)相比,沃克森碱基对(GC、AT)具有更高扩增效率且在LCR中占主导作用的特性。以等位基因为目标基因,基于沃克森碱基对互补原则,设计了两个LCR(LCRFc→G和LCRMB→A),选用在临床样品中具备稳定检测性能的电活性指示剂二茂铁(Fc)和亚甲基蓝(MB)作为两个LCR的电化学响应信号,并将其电流比值(IMB/IFc)作为等位基因分型的输出信号,最后,依据IMB/IFc区域划分可实现摇摆型碱基对等位基因分型(纯合野生型、纯合突变型、杂合型)的精准测定。

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