公开(公告)号：CN114774343A

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202210571832.3

申请日：2022-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  张康 ,  宿玲恰 ,  王蕾 ,  王璐瑶 ,  张梦薇 ,  蔡博涵 ,  刘同乐 ,  王胜 ,  高圣琦

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/61 ,  C12N15/60 ,  C12N15/56 ,  C12N15/53 ,  C12N15/31 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生产2’‑岩藻糖基乳糖的大肠杆菌工程菌株及应用，属于合成生物学、微生物代谢工程技术和发酵工程技术等领域。本发明提供的2’‑岩藻糖基乳糖从头合成途径关键酶表达水平的调控策略，通过CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除大肠杆菌中与底物降解以及中间产物分流相关的一系列基因，同时将不同的酶分别进行基因组过表达或者质粒过表达的调控，能够大幅提高代谢通路的效率，利用相关策略构建的基因工程菌株使得到的大肠杆菌工程菌株在3‑L发酵罐条件下以甘油为碳源，乳糖为底物发酵95h可生产57.7g/L的2′‑FL，对于工业化生产2′‑FL具有重要意义。

公开(公告)号：CN114774343B

公开(公告)日：2023-09-12

申请号：CN202210571832.3

申请日：2022-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  张康 ,  宿玲恰 ,  王蕾 ,  王璐瑶 ,  张梦薇 ,  蔡博涵 ,  刘同乐 ,  王胜 ,  高圣琦

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/61 ,  C12N15/60 ,  C12N15/56 ,  C12N15/53 ,  C12N15/31 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生产2’‑岩藻糖基乳糖的大肠杆菌工程菌株及应用，属于合成生物学、微生物代谢工程技术和发酵工程技术等领域。本发明提供的2’‑岩藻糖基乳糖从头合成途径关键酶表达水平的调控策略，通过CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除大肠杆菌中与底物降解以及中间产物分流相关的一系列基因，同时将不同的酶分别进行基因组过表达或者质粒过表达的调控，能够大幅提高代谢通路的效率，利用相关策略构建的基因工程菌株使得到的大肠杆菌工程菌株在3‑L发酵罐条件下以甘油为碳源，乳糖为底物发酵95h可生产57.7g/L的2′‑FL，对于工业化生产2′‑FL具有重要意义。

公开(公告)号：CN117487728A

公开(公告)日：2024-02-02

申请号：CN202311327641.3

申请日：2023-10-13

Applicant: 江南大学

Inventor： 张康 ,  吴敬 ,  王璐瑶 ,  高圣琦 ,  刘同乐 ,  蔡博涵 ,  张梦薇

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/60 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高效生产2'‑岩藻糖基乳糖的大肠杆菌工程菌株的应用，属于合成生物学、微生物代谢工程技术和发酵工程技术等领域。本发明提供了2'‑岩藻糖基乳糖从头合成途径关键酶表达水平的调控策略，敲除大肠杆菌中与底物降解以及中间产物分流相关的一系列基因，同时将不同的酶分别进行基因组过表达或者质粒过表达的调控，优化RBS，大幅提高代谢通路的效率，利用相关策略构建的重组菌株株使得到的大肠杆菌工程菌株在3‑L发酵罐条件下，以甘油为碳源生产125g/L的2'‑FL，以葡萄糖为碳源生产115g/L的2'‑FL，对于工业化生产2'‑FL具有重要意义。

公开(公告)号：CN119899788A

公开(公告)日：2025-04-29

申请号：CN202510074360.4

申请日：2025-01-17

Applicant: 江南大学

Inventor： 宿玲恰 ,  吴敬 ,  刘同乐 ,  张康 ,  张梦薇 ,  王璐瑶 ,  蔡博涵 ,  高圣琦

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12P19/26 ,  C12N9/10 ,  C12N9/90 ,  C12N9/12 ,  C12N9/92 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种无外源添加乳糖生产乳酰‑N‑新四糖的基因工程菌株及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过逐步优化LNnT生物合成途径，获得了一个具有高LNnT产量和无需外源添加乳糖的工程菌株。本发明应用模块化途径工程将LNnT合成途径分为四个模块，并通过简单地改变每个模块的质粒拷贝数，系统地优化这四个途径之间的代谢平衡。此外，通过优化葡萄糖的转运途径，维持代谢通路平衡性，避免了细胞资源的浪费和中间体的过度积累，进一步平衡了LNnT生物合成途径的代谢通量。最终，该菌株产生了26.9g/L的LNnT。

公开(公告)号：CN119842771A

公开(公告)日：2025-04-18

申请号：CN202510115677.8

申请日：2025-01-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 张康 ,  吴敬 ,  高圣琦 ,  王璐瑶 ,  张梦薇 ,  侯明磊

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/113 ,  C12P13/22 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑associated transposases基因编辑工具的构建与优化及其在大肠杆菌中的应用，属于合成生物学与基因工程领域。本发明在大肠杆菌中建立了高效的基因编辑系统，经过元件优化降低了MUSCULAR‑CAST系统对菌株的负担；通过消除自靶向作用可高效整合大片段(＞10k bp)目的基因表达框，并提高本基因编辑系统的可编程度。本发明将MUSCULAR‑CAST基因编辑系统用于构建生产3‑岩藻糖基乳糖、L‑色氨酸、2’‑岩藻糖基乳糖、新四糖的底盘菌株，可使底盘菌株相较于质粒表达产量相当或更高，且生长状况更为良好或转化率更高。

公开(公告)号：CN117343889A

公开(公告)日：2024-01-05

申请号：CN202311216056.6

申请日：2023-09-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  张康 ,  张梦薇 ,  刘同乐

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12N15/55 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12P19/18 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高乳酰‑N‑新四糖生成低乳酰‑N‑三糖残留的基因工程菌株及其应用，属于微生物基因工程领域。本发明通过阻断乳酰‑N‑新四糖合成竞争途径，引入β‑1,3‑N‑乙酰葡糖胺基转移酶基因lgtA和β‑1,4‑半乳糖基转移酶基因lgtB，并将乳酰‑N‑新四糖合成途径划分为3个模块，优化各模块的表达水平来系统地平衡各个模块的合成通量来提高乳酰‑N‑新四糖的合成。进一步，通过调节lgtB翻译起始强度对合成途径通量进行了微调。最后，乳酰‑N‑新四糖的产量在摇瓶培养中达到6.70g/L，在3升生物反应器中达到19.40g/L，同时乳酰‑N‑三糖II的残留量为1.79g/L，为乳酰‑N‑新四糖的工业化应用奠定了基础。