公开(公告)号：CN110343752A

公开(公告)日：2019-10-18

申请号：CN201910593543.1

申请日：2019-07-03

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李碧春 ,  张晨 ,  左其生 ,  王曼 ,  金晶 ,  李婷婷 ,  张亚妮 ,  孙红艳

IPC: C12Q1/6869 ,  G01N33/68 ,  C12N15/867

Abstract: 本发明提供一种研究PGCs分化过程中Wnt信号与组蛋白联合作用于靶基因机制的方法，涉及生物技术领域，所述方法通过体内外实验验证组蛋白是否具有调控Wnt信号通路的靶基因的作用、分析在ESCs、PGCs和SSCs三个过程组蛋白是否在靶基因的启动子区差异性富集、检测组蛋白甲基化/去甲基化是否影响靶基因对Wnt信号的响应、检测组蛋白去甲基化修饰酶对β-Catenin与靶基因启动子结合位点的结合能力的影响；根据检测结果判断在PGCs分化过程中，Wnt信号联合组蛋白作用于靶基因的作用机制。利用本发明所述方法对PGCs形成过程中Wnt信号协同组蛋白作用于靶基因进行研究，有利于渗入了解PGCs形成的网络机制。

公开(公告)号：CN109022546A

公开(公告)日：2018-12-18

申请号：CN201810849163.5

申请日：2018-07-28

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张亚妮 ,  张文慧 ,  李碧春 ,  王颖洁 ,  王曼

IPC: C12Q1/6851 ,  C12Q1/66 ,  G01N33/68

CPC classification number: C12Q1/6851 ,  C12Q1/66 ,  G01N33/68 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2561/113

Abstract: 本发明公开了一种Nanos2启动子核心区域关键转录因子的验证方法：首先，对Nanos2 5’侧翼区序列进行PCR扩增，构建真核表达载体pNanos2‑EGFP，将pNanos2‑EGFP、pEGFP‑N1、pLinker‑EGFP分别转染DF‑1细胞，以对Nanos2启动子区定性分析；分别构建启动子5’端不同长度缺失载体pGL3‑1187、pGL3‑959、pGL3‑788、pGL3‑493、pGL3‑155与pRL‑SV40共转染DF‑1细胞，进行双荧光素酶报告基因检测以对Nanos2启动子核心区域进行鉴定，构建缺失核心区域载体，再次进行双荧光素酶活性分析，观察是否缺失核心区域后启动子活性丧失或显著降低；对Nanos2启动子核心区域进行转录因子结合位点预测，进行双荧光素酶报告分析和CHIP试验确定关键转录因子。通过细胞形态学观察、qRT‑PCR、细胞免疫化学、流式细胞分析等方法检测雄性生殖细胞分化情况。

公开(公告)号：CN109022484A

公开(公告)日：2018-12-18

申请号：CN201810889239.7

申请日：2018-08-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张亚妮 ,  张文慧 ,  李碧春 ,  王颖洁 ,  王曼 ,  程少泽 ,  汪怡临 ,  何娜娜

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  G01N33/569

CPC classification number: C12N15/85 ,  C12N9/22 ,  C12N15/902 ,  G01N33/56966

Abstract: 本发明属于动物育种学和细胞生物学领域，具体涉及一种Nanos2在鸡ESCs向雄性生殖细胞分化过程中功能验证的方法，包括Nanos2在鸡不同组织中的表达量检测、Nanos2克隆与pcDNA3.0‑Nanos2载体的构建、Nanos2敲除载体构建及敲除活性验证、体外Nanos2功能验证、体内Nanos2功能验证、Quantitative Real Time PCR(quantitative RT‑PCR)验证、细胞形态学观察及细胞免疫化学检测、流式细胞分析、石蜡切片及PAS染色。相对于现有技术，能够较快地在鸡生殖细胞水平完成Nanos2的功能验证。方法简单易行，可重复性强，在普通实验室即可进行。该方法大大提高了体外诱导鸡ESCs向雄性生殖细胞分化的效率。该方法大大提高了体内诱导鸡PGCs和SSCs的生成效率。

公开(公告)号：CN110272919A

公开(公告)日：2019-09-24

申请号：CN201910593462.1

申请日：2019-07-03

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李碧春 ,  张晨 ,  左其生 ,  王曼 ,  金晶 ,  李婷婷 ,  张亚妮 ,  孙红艳

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明提供一种寻找胚胎干细胞向原始生殖细胞分化过程中Wnt信号通路的靶基因的方法，涉及生物技术领域，本发明所述方法首先对Wnt信号通路的关键转录因子TCF7L2进行靶基因预测，对预测靶基因进行GO功能注释，筛选出其中共同参与生殖细胞发育及干细胞分化的保守性靶基因作为待选靶基因；通过体内外试验验证Wnt信号对待选靶基因转录水平的调控作用，检测待选靶基因的启动子中所述转录因子结合位点缺失时、Wnt信号对待选靶基因转录水平是否有调节作用，通过ChIP-qPCR验证β-Catenin/转录因子复合物与待选靶基因的结合作用，从而确定待选靶基因是否对Wnt信号具有靶向响应作用。本发明所述方法简单易行。

公开(公告)号：CN103923890A

公开(公告)日：2014-07-16

申请号：CN201410187111.8

申请日：2014-05-05

Applicant: 扬州大学

Inventor： 周勇 ,  梁国华 ,  龚志云 ,  袁媛 ,  王曼 ,  杨泽峰 ,  朱金燕 ,  裔传灯

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/82 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  A01H5/00

CPC classification number: C12N9/001 ,  C12N15/825 ,  C12Y103/01083

Abstract: 本发明公开了一个水稻叶色控制基因LYL1编码的蛋白质，该蛋白质具有SEQ ID No:3所示的氨基酸序列。本发明还同时公开了一种水稻叶色控制基因LYL1，该基因具有SEQ ID No:1和2所示的核苷酸序列。LYL1编码一个双牻牛儿基还原酶，该基因的突变导致水稻叶色从正常的绿色变成黄色。本发明还同时公开了一种载体，为含有上述基因的植物表达载体；植物表达载体例如为pCAMBIA1301-LYL1。本发明还同时公开了一种宿主细胞，其为含有上述载体的细胞；细胞例如为大肠杆菌、农杆菌细胞或植物细胞。利用本发明lyl1-1突变基因控制的黄叶性状可以作为遗传标记用于农业生产中的品种鉴定以及水稻遗传育种。

公开(公告)号：CN110257426A

公开(公告)日：2019-09-20

申请号：CN201910547131.4

申请日：2019-06-24

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李碧春 ,  姜景译 ,  左其生 ,  王曼 ,  李建成 ,  张明 ,  石祥 ,  袁霞

IPC: C12N15/85 ,  G01N21/64 ,  G16B20/30

Abstract: 本发明涉及一种研究鸡ESCs向PGCs分化过程中lin28调节Blimp1表达的方法，属于生物技术领域。本发明将Lin28通过micRNA-let7间接调控PGCs标记基因Blimp1的研究扩展到家禽领域，并准确定位到gga-let-7a-2-3p上，刷新了不同物种的Lin28-let7-Blimp1调节链的功能范畴。本方法简单易行，思路清晰，操作可行性高，在普通研究室就能完成。

公开(公告)号：CN108949921A

公开(公告)日：2018-12-07

申请号：CN201810916667.4

申请日：2018-08-13

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张亚妮 ,  王颖洁 ,  李碧春 ,  张文慧 ,  王曼 ,  程少泽 ,  汪怡临 ,  何娜娜

IPC: C12Q1/6851 ,  G01N33/68

CPC classification number: C12Q1/6851 ,  G01N33/68 ,  C12Q2521/107 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2531/113

Abstract: 本发明属于动物育种学和细胞生物学领域，涉及一种研究Stra8基因在如皋黄鸡生精过程中功能的方法，包括如下步骤：Stra8基因3’UTR序列的获得；Stra8基因靶向miRNA预测；最佳miRNA筛选；验证miRNA通过stra8对精原干细胞减数分裂的作用；体内验证miRNA对公鸡生精的影响。相对于现有技术，本发明本方法简单易行，可重复性强，在普通实验室即可进行。运用该方法可以快速、高效在短时间内验证Stra8基因在鸡减数分裂过程中的调控作用。并且能够很好的对Stra8基因进行抑制，以便更好在SSC中进行基因功能验证。