公开(公告)号：CN109022484A

公开(公告)日：2018-12-18

申请号：CN201810889239.7

申请日：2018-08-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张亚妮 ,  张文慧 ,  李碧春 ,  王颖洁 ,  王曼 ,  程少泽 ,  汪怡临 ,  何娜娜

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  G01N33/569

CPC classification number: C12N15/85 ,  C12N9/22 ,  C12N15/902 ,  G01N33/56966

Abstract: 本发明属于动物育种学和细胞生物学领域，具体涉及一种Nanos2在鸡ESCs向雄性生殖细胞分化过程中功能验证的方法，包括Nanos2在鸡不同组织中的表达量检测、Nanos2克隆与pcDNA3.0‑Nanos2载体的构建、Nanos2敲除载体构建及敲除活性验证、体外Nanos2功能验证、体内Nanos2功能验证、Quantitative Real Time PCR(quantitative RT‑PCR)验证、细胞形态学观察及细胞免疫化学检测、流式细胞分析、石蜡切片及PAS染色。相对于现有技术，能够较快地在鸡生殖细胞水平完成Nanos2的功能验证。方法简单易行，可重复性强，在普通实验室即可进行。该方法大大提高了体外诱导鸡ESCs向雄性生殖细胞分化的效率。该方法大大提高了体内诱导鸡PGCs和SSCs的生成效率。

公开(公告)号：CN108949921A

公开(公告)日：2018-12-07

申请号：CN201810916667.4

申请日：2018-08-13

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张亚妮 ,  王颖洁 ,  李碧春 ,  张文慧 ,  王曼 ,  程少泽 ,  汪怡临 ,  何娜娜

IPC: C12Q1/6851 ,  G01N33/68

CPC classification number: C12Q1/6851 ,  G01N33/68 ,  C12Q2521/107 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2531/113

Abstract: 本发明属于动物育种学和细胞生物学领域，涉及一种研究Stra8基因在如皋黄鸡生精过程中功能的方法，包括如下步骤：Stra8基因3’UTR序列的获得；Stra8基因靶向miRNA预测；最佳miRNA筛选；验证miRNA通过stra8对精原干细胞减数分裂的作用；体内验证miRNA对公鸡生精的影响。相对于现有技术，本发明本方法简单易行，可重复性强，在普通实验室即可进行。运用该方法可以快速、高效在短时间内验证Stra8基因在鸡减数分裂过程中的调控作用。并且能够很好的对Stra8基因进行抑制，以便更好在SSC中进行基因功能验证。

公开(公告)号：CN105838791A

公开(公告)日：2016-08-10

申请号：CN201610252399.1

申请日：2016-04-21

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李碧春 ,  李东 ,  张亚妮 ,  纪艳芹 ,  王飞 ,  汪怡临 ,  王颖洁 ,  路镇宇 ,  靳锴 ,  何娜娜

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/6869 ,  C12Q2537/165 ,  C12Q2535/122

Abstract: 本发明公开了一种挖掘鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化过程中关键lncRNA的分析方法，本方法首先从如皋黄鸡的新鲜受精蛋的胚盘、第19期(72h)的生殖脊和第18天的睾丸，分离出鸡ESCs、PGCs和SSCs,并根据CDH1基因设计特异性，以PCR扩增的方法进行性别鉴定，对运用抗体标记的ESCs、PGCs和SSCs进行分选,阳性细胞提取细胞总RNA，纯化后对RNA质量进行检测，检测合格后进行RNA?Seq测序。将测序结果中筛选出组装RNA的转录本。分离鸡ESCs，PGCs和SSCs，提取总RNA，反转录为cDNA。对候选的lncRNA进行Trans和Cis靶基因的预测分析，并通过DAVID数据库查找其GO功能项，再通过GO分析注释其功能，对其进行功能分析。绘制关键lncRNA及其靶基因与相关信号通路之间的关系互作网络图。