公开(公告)号：CN113265449A

公开(公告)日：2021-08-17

申请号：CN202110651600.4

申请日：2021-06-11

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李碧春 ,  张晨 ,  左其生 ,  张亚妮 ,  孙红艳

IPC: C12Q1/6858 ,  C12Q1/66

Abstract: 本发明涉及一种研究基因启动子区DNA甲基化和组蛋白甲基化调控模式的方法，包括以下步骤：确定DNA甲基化对目的基因的调控、确定组蛋白H3K4me2/3对目的基因的调控、确定DNA甲基化和组蛋白H3K4me2/3对目的基因的表达调控；确定何种表观遗传修饰对目的基因起主要调控作用。通过本发明，本方法简单可行，具有可行性，操作简便，研究思路清晰可靠，具有广泛应用性，因DNA甲基化和组蛋白甲基化具有高度保守性，因此在不同物种或不同生物学过程中均能使用该方法研究DNA甲基化和组蛋白甲基化对基因表达的调控模式。

公开(公告)号：CN111778289A

公开(公告)日：2020-10-16

申请号：CN202010734335.1

申请日：2020-07-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李碧春 ,  高雯 ,  左其生 ,  张晨 ,  袁霞 ,  姜景译 ,  丁颖 ,  张亚妮 ,  孙红艳

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/867

Abstract: 一种利用CRISPR-Cas9靶向敲除鸡Bmp4基因的方法，属于生物技术领域。本发明通过基因编辑技术沉默基因的表达为基因功能的研究提供了重要的技术手段，RISPR-Cas9系统属于基因编辑技术中的一种，具有敲除效率高、操作简单、成本低等优点。为此，本发明利用RISPR-Cas9技术构建Bmp4敲除载体，不仅能够从基因组上抑制Bmp4的表达，为更准确地研究Bmp4基因在鸡原始生殖细胞（Primordial germ cells,PGCs）形成过程中的功能提供实验素材，而且也有利于为将来构建基因敲除鸡模型奠定实验基础。

公开(公告)号：CN111690594A

公开(公告)日：2020-09-22

申请号：CN202010685364.3

申请日：2020-07-16

Applicant: 扬州大学

Inventor： 左其生 ,  靳锴 ,  李碧春 ,  张亚妮 ,  孙红艳

IPC: C12N5/073 ,  C12N5/077 ,  C12Q1/6888 ,  C12Q1/6879 ,  C12Q1/06 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明涉及一种鸡两性CEF的体外分离和培养方法，包括以下步骤：（1）对孵化9-10日龄的早期胚蛋进行消毒，取出胚胎后剥离出皮肤，同时采取胚胎血液进行性别鉴定，取出不同性别的皮肤组织；（2）将不同性别的皮肤组织进行消化和过滤，计数后进行培养；（3）观察不同性别皮肤组织的CEF细胞，并采取样本进行鉴定。本发明与提供了一种鸡两性CEF的体外分离和培养方法，可以准确的分离鸡两性CEF，可用于禽类性别决定和分化模型的建立，单一性别的CEF能够提高其作为疾病模型的相关研究中的准确性和可信度。本发明中的性别鉴定和两性CEF的分离培养方法也可以应用于其他禽类研究中，具有很好的推广应用价值。

公开(公告)号：CN111676299A

公开(公告)日：2020-09-18

申请号：CN202010749121.1

申请日：2020-07-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李碧春 ,  石祥 ,  左其生 ,  张亚妮 ,  孙红艳

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6869

Abstract: 本发明涉及一种鉴定鸡囊胚配盘中细胞种类的方法，包括以下步骤：（1）消毒；取刚产出体外的新鲜受精蛋，使用1%新洁尔灭清洗蛋壳，再用75%酒精擦拭蛋壳表明进行消毒；（2）取样；在超净台中药勺法取出新鲜受精蛋的胚盘，PBS清洗三遍，用移液枪轻轻吹匀，制备成单细胞悬液；（3）单细胞测序仪器进行上机建库；（4）对测序数据进行分析；（5）细胞亚群的鉴定。通过本发明，可以准确的鉴定胚盘中细胞的种类，与传统的测序方式不同，单细胞测序可以检测细胞之间的异质性，在单个细胞水平上，对基因组、转录组、表观组进行高通量测序分析，在相关研究中具有极高的准确性和可信度。

公开(公告)号：CN111650327A

公开(公告)日：2020-09-11

申请号：CN202010685235.4

申请日：2020-07-16

Applicant: 扬州大学

Inventor： 左其生 ,  靳锴 ,  李碧春 ,  张亚妮 ,  孙红艳

IPC: G01N30/88

Abstract: 本发明涉及一种基于非标定量蛋白质组学技术寻找如皋黄鸡不同细胞或组织间差异表达蛋白的方法，包括以下步骤：（1）鸡不同细胞或组织的组织或细胞蛋白提取；（2）对步骤（1）中得到的不同组的细胞或组织蛋白进行胰酶酶解；（3）酶解后的细胞或组织蛋白进行液相色谱-质谱联用分析；（4）对分析结果进行数据库搜库和注释分析。通过本发明，本发明的优越性在于：1、本发明能够较快的获得不同组织和细胞之间的差异表达蛋白。2、方法简单可行，可重复性强，结果准确。3、该方法适用于其他物种。

公开(公告)号：CN115896175A

公开(公告)日：2023-04-04

申请号：CN202211650762.7

申请日：2022-12-21

Applicant: 扬州大学

Inventor： 左其生 ,  龚威 ,  张亚妮 ,  王挺 ,  孙红艳 ,  李碧春

IPC: C12N15/85 ,  C12N9/00 ,  C12N15/52 ,  C12N15/12 ,  C07K14/465

Abstract: 本发明属于禽类生殖技术领域，特别是涉及基因C2EIP在促进PGCs形成中的应用和C2EIP蛋白介导的泛素化E3连接酶复合体。本发明提供了基因C2EIP在促进鸡原始生殖细胞形成中的应用，基因C2EIP表达得到的蛋白以及C2EIP蛋白介导的泛素化E3连接酶复合体在调控鸡原始生殖细胞形成过程中的应用。本发明提供的应用能够有效的提高体外鸡原始生殖细胞的形成效率，扩大鸡原始生殖细胞的形成数量，解决原始生殖细胞数量不足的问题，为进一步实现鸡原始生殖细胞在物种资源保护领域的应用提供细胞材料。

公开(公告)号：CN112877332A

公开(公告)日：2021-06-01

申请号：CN202110283164.X

申请日：2021-03-16

Applicant: 扬州大学

Inventor： 孙红艳 ,  李欢 ,  牛英杰 ,  左其生 ,  张亚妮 ,  李碧春

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65 ,  C12Q1/66

Abstract: 本发明提供一种由双荧光素酶报告基因检测鸡RIPK2启动子活性的方法，包括以下步骤：步骤1）、鸡RIPK2基因启动子全长的克隆；步骤2）、鸡RIPK2启动子区系列缺失片段报告质粒的构建和鉴定；步骤3）、鸡RIPK2启动子活性定性分析；步骤4）、双荧光素酶报告基因检测鸡质粒RIPK2启动子的活性；步骤5）、鸡RIPK2核心启动子区的确定；步骤6）、鸡RIPK2核心启动子区转录因子的筛选；利用软件TRANSFAC和AliBaba 2.1对鸡RIPK2启动子区转录因子结合位点进行预测分析。通过本发明，便于对鸡RIPK2基因启动子的调控方式及调控元件进行研究。具有灵敏度高、准确性强、检测迅速、费用较低等特点，避免了转染效率对结果的影响。

公开(公告)号：CN112725467A

公开(公告)日：2021-04-30

申请号：CN202110232856.1

申请日：2021-03-03

Applicant: 扬州大学

Inventor： 孙红艳 ,  李欢 ,  左其生 ,  张亚妮 ,  李碧春

IPC: C12Q1/6888 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及一种与抗禽致病性大肠杆菌相关的NLR信号通路及其应用，提供一种与抗禽致病性大肠杆菌相关的遗传标记，所述遗传标记为NLR信号通路。同时提供检测本发明第一方面所述的遗传标记的试剂在制备用于鉴定待测鸡抗禽致病性大肠杆菌的试剂盒的应用。以及提供一种用于鉴定抗禽致病性大肠杆菌的试剂盒，提供一种筛选抗禽致病性大肠杆菌的商品肉鸡的方法。通过本发明。利用与禽致病性大肠杆菌相关的标记基因进行标记辅助选择，能够有效提供家禽免疫能力。提供了NLR信号通路基因的序列及鉴定方法，通过通路基因的引物，可利用Sanger测序法建立高效准确快速的分子标记辅助育种技术，使免疫力提高，可在早期进行选育，降低育种成本，提高生产效益。

公开(公告)号：CN111763691A

公开(公告)日：2020-10-13

申请号：CN202010684844.8

申请日：2020-07-16

Applicant: 扬州大学

Inventor： 左其生 ,  靳锴 ,  李碧春 ,  张亚妮 ,  孙红艳

IPC: C12N15/867

Abstract: 本发明涉及一种新的慢病毒载体导入鸡胚的方法，包括以下步骤：（1）对孵化48-58h的早期胚蛋（13-17 HH）取出后在无菌条件下使用镊子轻轻敲击蛋壳钝端开口，找到胚胎位置后，使用眼科镊轻轻剥去胚胎上层覆盖的外壳膜，露出胚胎；（2）将导入的慢病毒载体使用细胞培养基或细胞缓冲液稀释到固定滴度，对准暴露出的胚胎轻轻滴加，使慢病毒溶液覆盖胚胎；（3）滴加结束后加入200ul青链霉素至注射部位，然后使用医用胶带封口，完成慢病毒载体导入鸡胚。封口严实后继续放入孵化箱，根据下一步要求在不同阶段取出检测。通过本发明，可用于鸡胚外源基因导入、外源基因敲低或敲除和转基因鸡等生产研究。

公开(公告)号：CN119391628A

公开(公告)日：2025-02-07

申请号：CN202411354572.X

申请日：2024-09-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 左其生 ,  吕晓倩 ,  李碧春 ,  靳锴 ,  牛英杰 ,  孙红艳 ,  裴晓蒙

IPC: C12N5/075 ,  C12N5/076 ,  C12Q1/6888 ,  C12Q1/6879 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种体细胞性别反转模型建立的方法，S1、分离雌雄性腺体细胞，并进行性别鉴定及培养；S2、确定标记基因：筛选E18.5 d雌雄中高表达差异基因，设计RT‑PCR引物，在分离的性腺体细胞中进行检测；S3、构建反转模型：以性激素为诱导剂，确定有效的反转模型性激素诱导浓度，并利用标记基因定量和流式检测确定构建反转模型。本发明不仅在理论研究上具有重要意义，还具备广阔的应用前景和社会经济效益，对推动相关领域的科技进步和产业发展具有积极的促进作用。