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公开(公告)号：CN119391628A
公开(公告)日：2025-02-07
申请号：CN202411354572.X
申请日：2024-09-27
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/075 , C12N5/076 , C12Q1/6888 , C12Q1/6879 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种体细胞性别反转模型建立的方法，S1、分离雌雄性腺体细胞，并进行性别鉴定及培养；S2、确定标记基因：筛选E18.5 d雌雄中高表达差异基因，设计RT‑PCR引物，在分离的性腺体细胞中进行检测；S3、构建反转模型：以性激素为诱导剂，确定有效的反转模型性激素诱导浓度，并利用标记基因定量和流式检测确定构建反转模型。本发明不仅在理论研究上具有重要意义，还具备广阔的应用前景和社会经济效益，对推动相关领域的科技进步和产业发展具有积极的促进作用。
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公开(公告)号：CN113061651A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110376568.3
申请日：2021-04-08
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6851 , C12Q1/6869 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12Q1/6897
Abstract: 本发明涉及一种LPS感染后检测并调控鸡RIPK2基因甲基化的方法，包括以下步骤：步骤1）、LPS感染鸡巨噬细胞HD11，检测RIPK2基因表达量变化；步骤2）、重亚硫酸氢盐处理LPS感染前后的基因组；步骤3）、鸡RIPK2基因启动子区CpG岛片段PCR扩增和测序分析；步骤4）、5‑氮杂胞苷和M.SssI分别处理转染鸡RIPK2启动子质粒的鸡HD11细胞；步骤5）、5‑氮杂胞苷和M.SssI分别处理鸡HD11细胞，检测RIPK2基因表达量；通过本发明，对缓解应激性病理损伤和提高家禽健康具有重要的实践意义。
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公开(公告)号：CN119061119A
公开(公告)日：2024-12-03
申请号：CN202411227127.7
申请日：2024-09-03
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6809
Abstract: 本发明公开了一种筛选和研究调节鸡性别决定和分化关键因素功能的方法，通过构建E0‑E18.5的转录组文库，进一步分析性别决定和分化的关键因素，以期深入揭示性别决定的复杂机制。从转录水平上系统的阐述鸡性别决定过程中全基因组水平上的表达和转录情况，并结合小分子激活剂和抑制剂处理E18.5d性腺，通过观察性腺组织切片的形态学变化，qRT‑PCR检测性别相关基因的表达，ELISA检测性腺的性激素分泌变化，论证相关因素对于性别控制的影响，为鸡的性别决定机制的相关研究提供有力的参考，也为后续进一步验证能量代谢和表观遗传修饰在鸡性别决定和分化过程中的功能奠定基础。
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公开(公告)号：CN118979088A
公开(公告)日：2024-11-19
申请号：CN202410927510.7
申请日：2024-07-11
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种筛选鸡原始生殖细胞发生过程中泛素化修饰靶蛋白的方法，包括以下步骤：提取蛋白并进行胰酶消化；对胰酶消化中得到的肽段进行亲和富集；通过LC‑MS/MS分析亲和富集得到的修饰肽段并进行数据库搜索；样品重复性检验和蛋白差异修饰分析；泛素化功能及泛素化修饰靶点分析。本发明能够高效筛选鸡PGCs发生过程中泛素化修饰靶蛋白；方法简便高效，成本低廉；为研究鸡PGCs发生过程中泛素化的调控机制提供研究思路和理论基础，以解决体外获取鸡PGCs数量不足的问题，为家禽PGCs高效应用作铺垫；具有推广生产潜能和经济效益。
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公开(公告)号：CN116855444A
公开(公告)日：2023-10-10
申请号：CN202310819378.3
申请日：2023-07-06
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种鸡原始生殖细胞单克隆细胞系建立的方法，属于畜牧学和生物技术领域；通过自制简易口吸管，用FAcs培养基对PGCs进行稀释，用口吸管分选单个PGCs，在5%CO2、饱和湿度的37℃培养箱中进行培养，每三天换一次培养液，建立PGCs的单克隆细胞系；本发明提供的方法可以在普通实验室高效稳定建立鸡PGCs单克隆细胞系，且不需要复杂昂贵的仪器，分选和建系效率高，为研究鸡PGCs生物学特性提供了一种新的途径，为家禽的良种扩繁、基因修饰及修饰后筛选、家禽分子设计育种和种质资源冷冻保存等提供了新的方法、奠定了实验基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114015786A
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202111348108.6
申请日：2021-11-15
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , G01N33/58 , G01N33/68 , G01N15/14
Abstract: 本发明涉及一种探究胚胎期肌肉细胞形成时间的方法,利用实时荧光定量PCR、流式细胞分析、间接免疫荧光等技术共同探索肌肉细胞形成时间，方法切实可行，可用以大量分析胚盘内肌肉细胞占多个细胞的比例，以及何时肌肉细胞形成并表达标记蛋白，对研究胚盘发育、肌肉细胞形成、建立肌肉细胞形成调控网络等有重要指导意义，极大地丰富了胚胎发育生物学研究；本发明可推广到采用不同种类家禽的胚胎期胚盘，分析胚盘内各种细胞何时形成并分化发育，为研究整体胚胎发育，解密遗传规律奠定基础；本发明鉴定方法更为简便、灵敏和高效，可以检测胚胎期基因和蛋白的微弱表达，能更加真实地反映目的细胞形成情况，也可以应用于其他禽类研究中。
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公开(公告)号：CN117683705A
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202311756853.3
申请日：2023-12-20
Applicant: 扬州大学 , 江苏省家禽科学研究所
IPC: C12N5/0735
Abstract: 本发明公开一种鸡多能干细胞体外培养方法，属于畜牧学和生物技术领域；通过添加FGF2、IWR‑1和XAV‑93，并以STO细胞为饲养层，建立FIX培养体系，从鸡新鲜种蛋EGK.X期分离胚盘明区细胞，在FIX培养体系中，采用5%CO2、饱和湿度的37℃培养箱进行培养，每天更换培养液，每2‑3天传代一次，进行鸡多能干细胞PSCs体外培养；本发明提供的方法可以在短期内使鸡PSCs快速增殖，且维持其多能性和分化潜能；为研究鸡PSCs生物学特性提供了材料，为家禽的良种扩繁、基因修饰、家禽分子设计育种和种质资源冷冻保存等提供了新的方法、奠定了实验基础。
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公开(公告)号：CN116656735A
公开(公告)日：2023-08-29
申请号：CN202310721034.9
申请日：2023-06-19
Applicant: 扬州大学 , 江苏省家禽科学研究所
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N15/53
Abstract: 本发明提供了一种鸡CYP19A1基因可诱导敲除系统及其构建方法和应用，属于基因编辑技术领域。本发明的鸡CYP19A1基因可诱导敲除系统，包括TRE‑CAS9‑rtTA‑Puro载体和sgRNA‑sy004载体。本发明将由TRE‑CAS9‑rtTA‑Puro载体和sgRNA‑sy004载体组成的鸡CYP19A1基因可诱导敲除系统转染入待敲除细胞中，能够在Dox的作用下，诱导CAS9表达，以此控制鸡CYP19A1基因敲除程度，避免基因过度敲除，无法控制激素水平，影响鸡体存活。
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公开(公告)号：CN115885975A
公开(公告)日：2023-04-04
申请号：CN202211589326.3
申请日：2022-12-12
Applicant: 扬州大学
Abstract: 一种高效的鸡胚组织块冻存复苏的方法，属于生物技术领域。本发明在鸡胚中分离组织块，加入组织块冷冻保护液后进行冻存，复苏组织块后游离出鸡成纤维细胞；本发明为稀缺物种（如地方畜禽品种）的细胞建库以进行大规模组织块冻存以及种质资源保存提供依据。
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公开(公告)号：CN112877332A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110283164.X
申请日：2021-03-16
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/65 , C12Q1/66
Abstract: 本发明提供一种由双荧光素酶报告基因检测鸡RIPK2启动子活性的方法，包括以下步骤：步骤1）、鸡RIPK2基因启动子全长的克隆；步骤2）、鸡RIPK2启动子区系列缺失片段报告质粒的构建和鉴定；步骤3）、鸡RIPK2启动子活性定性分析；步骤4）、双荧光素酶报告基因检测鸡质粒RIPK2启动子的活性；步骤5）、鸡RIPK2核心启动子区的确定；步骤6）、鸡RIPK2核心启动子区转录因子的筛选；利用软件TRANSFAC和AliBaba 2.1对鸡RIPK2启动子区转录因子结合位点进行预测分析。通过本发明，便于对鸡RIPK2基因启动子的调控方式及调控元件进行研究。具有灵敏度高、准确性强、检测迅速、费用较低等特点，避免了转染效率对结果的影响。
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