公开(公告)号：CN102433299A

公开(公告)日：2012-05-02

申请号：CN201110366128.6

申请日：2011-11-17

申请人： 安徽农业大学

发明人： 张运海 ,  魏超 ,  刘星 ,  李运生 ,  张宇 ,  陈建文 ,  章孝荣

IPC分类号： C12N5/0775

摘要： 本发明公开了一种小鼠脂肪干细胞的分离、培养及纯化方法。其步骤包括细胞分离、培养和纯化三个阶段，特别是在分离过程不中断营养的供给，改进了三次换液时间和洗涤方法，以及使用差速消化法提高细胞纯度。本发明能够从小鼠的脂肪组织中分离出高活性、高纯度的脂肪干细胞，为后期对脂肪干细胞进一步的研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN102676581A

公开(公告)日：2012-09-19

申请号：CN201210100640.0

申请日：2012-04-07

申请人： 安徽农业大学

发明人： 张运海 ,  章孝荣 ,  桂涛 ,  李运生 ,  刘亚 ,  陈建文 ,  章美玲 ,  张宇 ,  刘星 ,  方富贵 ,  丁建平

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/66

摘要： 本发明公开了一种乳腺特异表达人杀菌通透性增强蛋白载体构建方法，属于生物工程技术领域。体外合成包括目的基因hBPI的CDS序列，该CDS序列上游添加了XhoI酶切位点、Kozak序列、牛β-酪蛋白信号肽，下游添加了XhoI酶切位点；并将此体外合成序列定向克隆至经XhoI酶切的pBC1-loxp-neo-loxp-pBD载体；经菌液PCR和测序验证，获得了构建正确的人杀菌/通透性增强蛋白乳腺特异表达载体pBC1-loxp-Neo-loxp-hBPI。本发明经细胞C-127水平的功能验证表明该载体基因构建合理、有效，这将为成功制作动乳腺生物反应器生产hBPI蛋白奠定了坚实的基础。

公开(公告)号：CN102433298A

公开(公告)日：2012-05-02

申请号：CN201110366075.8

申请日：2011-11-17

申请人： 安徽农业大学

发明人： 魏超 ,  张运海 ,  张宇 ,  李运生 ,  章孝荣 ,  吴蓉花 ,  周娜汝 ,  刘星 ,  陈建文 ,  陶佳

IPC分类号： C12N5/0775

摘要： 本发明公开了一种小鼠脂肪干细胞培养液，其组成成分为：胎牛血清20％，青霉素100IU/ml，链霉素100μg/ml，L-谷氨酰胺2mmol/L，碱性成纤维细胞生长因子10ng/ml，维生素C 50μg/ml，DMEM/F12补足到100％。本发明培养液成分简单、成本低；能够有效维持小鼠脂肪干细胞在体外的长期增殖；能够很好的维持脂肪干细胞的生物学特性。

公开(公告)号：CN105543257A

公开(公告)日：2016-05-04

申请号：CN201610031125.X

申请日：2016-01-18

申请人： 安徽农业大学

发明人： 陈建文 ,  张运海 ,  李运生 ,  潘开源 ,  韩春杨

IPC分类号： C12N15/57 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027

CPC分类号： C12N9/485 ,  A01K67/027 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/03 ,  A01K2267/0337 ,  A01K2267/0381 ,  A01K2267/0387 ,  C12N15/8509 ,  C12N15/877 ,  C12N2015/8581 ,  C12N2800/107 ,  C12Y304/11002

摘要： 本发明公开了一种pAPN基因定点修饰猪，其采用基因工程的方法构建猪氨肽酶N(porcine aminopeptidase N，pAPN)的基因载体；通过细胞转染等多种技术获得pAPN基因定点修饰猪。本发明主要有两点应用：1、从遗传的角度根除猪病毒性腹泻和K88的感染，减少养猪的疫病控制成本，减少其对环境的污染，为健康养殖和减少抗生素的滥用提供一种方法；2、该定点修饰猪为研究人类癌症等相关疾病的发病机制及相关干预与治疗的筛选与临床前预试。

公开(公告)号：CN102433299B

公开(公告)日：2013-01-23

申请号：CN201110366128.6

申请日：2011-11-17

申请人： 安徽农业大学

发明人： 张运海 ,  魏超 ,  刘星 ,  李运生 ,  张宇 ,  陈建文 ,  章孝荣

IPC分类号： C12N5/0775

摘要： 本发明公开了一种小鼠脂肪干细胞的分离、培养及纯化方法。其步骤包括细胞分离、培养和纯化三个阶段，特别是在分离过程不中断营养的供给，改进了三次换液时间和洗涤方法，以及使用差速消化法提高细胞纯度。本发明能够从小鼠的脂肪组织中分离出高活性、高纯度的脂肪干细胞，为后期对脂肪干细胞进一步的研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN102391987A

公开(公告)日：2012-03-28

申请号：CN201110366111.0

申请日：2011-11-17

申请人： 安徽农业大学

发明人： 魏超 ,  张运海 ,  刘星 ,  李运生 ,  章孝荣 ,  陈建文 ,  周娜汝 ,  桂涛 ,  张宇 ,  陶佳 ,  吴蓉花

IPC分类号： C12N5/0775

摘要： 本发明公开了一种用于分离小鼠脂肪干细胞的消化液。所述消化液的组成成分为10％的胎牛血清，0.09％的胶原酶I，余量为DMEM/F12。本发明的成分简单，来源方便，成本低；能够有效的从小鼠的脂肪组织中分离出脂肪干细胞；能够很好的维持细胞的活性，为细胞的后期培养和进一步的科学研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN102911922A

公开(公告)日：2013-02-06

申请号：CN201210171604.3

申请日：2012-05-29

申请人： 安徽农业大学

发明人： 王桂军 ,  张海运 ,  陈建文 ,  朱英奇 ,  孙裴 ,  徐前明 ,  王蓓 ,  包文斌 ,  叶兰

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N1/21

摘要： 本发明公开了一种梅山猪FUT1基因及其克隆和原核表达，该基因的核苷酸序列如SEQ IDNO 2所示；本发明通过RT-PCR方法克隆得到梅山猪FUT1基因ORF序列，构建了含FUT1基因重组表达质粒，并将重组原核表达质粒转化至BL21菌株体内进行诱导表达。梅山猪FUT1基因的表达成功，为研究FUT1作为ETEC F18受体蛋白对菌毛的粘附作用以及FUT1特异性抗体的制备奠定了基础。

公开(公告)号：CN102703506A

公开(公告)日：2012-10-03

申请号：CN201210032967.9

申请日：2012-02-10

申请人： 安徽农业大学

发明人： 张宇 ,  陈建文 ,  张运海 ,  李运生 ,  章孝荣 ,  韩春杨 ,  章美玲 ,  张远亮 ,  随刘才 ,  周娜汝 ,  陶佳 ,  吴蓉花

IPC分类号： C12N15/867 ,  C12N15/873 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

摘要： 本发明公开了一种α1，2-岩藻糖转移酶基因沉默的体细胞克隆猪及其生产方法与应用。本发明针对猪α1，2-岩藻糖转移酶基因构建了RNAi慢病毒表达载体，包装慢病毒颗粒后，感染猪胎儿成纤维细胞，以该转基因细胞系为核供体，生产了基因组整合有一段α1，2-岩藻糖转移酶基因的RNAi核苷酸序列的克隆猪，为进一步研究该基因的功能以及培育抗仔猪腹泻与水肿病猪新品种奠定了基础。