公开(公告)号：CN103667349A

公开(公告)日：2014-03-26

申请号：CN201310576436.0

申请日：2013-11-15

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 张运海 ,  张宇 ,  魏超 ,  章孝荣

IPC: C12N15/867 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种高效获取猪诱导性多能干细胞的方法，该方法将脂肪干细胞（ADSCs）诱导重编程为诱导性多能干细胞（iPSCs）。具体包括如下步骤：（1）将多能性因子的cDNA导入ADSCs；（2）在无饲养层体系中，使用无血清培养基培养步骤（1）得到的ADSCs；（3）出现胚胎干细胞（ESCs）样细胞克隆后，更换成添加有MEK与GSK3信号通路抑制剂的培养基继续培养，挑取细胞克隆并扩大培养；（4）鉴定细胞克隆的多能性。本发明中，ADSCs成本低且易于大量获取，重编程的速度与效率很高；无饲养层体系可以提高阳性iPSCs克隆的纯度；无血清培养基避免了血清中未明确组分与批次差异带来不稳定因素；信号通路抑制剂能够促进细胞达到充分重编程的状态，提高阳性iPSCs克隆的质量。

公开(公告)号：CN103667349B

公开(公告)日：2017-02-15

申请号：CN201310576436.0

申请日：2013-11-15

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 张运海 ,  张宇 ,  魏超 ,  章孝荣

IPC: C12N15/867 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种高效获取猪诱导性多能干细胞的方法，该方法将脂肪干细胞（ADSCs）诱导重编程为诱导性多能干细胞（iPSCs）。具体包括如下步骤：（1）将多能性因子的cDNA导入ADSCs；（2）在无饲养层体系中，使用无血清培养基培养步骤（1）得到的ADSCs；（3）出现胚胎干细胞（ESCs）样细胞克隆后，更换成添加有MEK与GSK3信号通路抑制剂的培养基继续培养，挑取细胞克隆并扩大培养；（4）鉴定细胞克隆的多能性。本发明中，ADSCs成本低且易于大量获取，重编程的速度与效率很高；无饲养层体系可以提高阳性iPSCs克隆的纯度；无血清培养基避免了血清中未明确组分与批次差异带来不稳定因素；信号通路抑制剂能够促进细胞达到充分重编程的状态，提高阳性iPSCs克隆的质量。

公开(公告)号：CN102433299A

公开(公告)日：2012-05-02

申请号：CN201110366128.6

申请日：2011-11-17

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 张运海 ,  魏超 ,  刘星 ,  李运生 ,  张宇 ,  陈建文 ,  章孝荣

IPC: C12N5/0775

Abstract: 本发明公开了一种小鼠脂肪干细胞的分离、培养及纯化方法。其步骤包括细胞分离、培养和纯化三个阶段，特别是在分离过程不中断营养的供给，改进了三次换液时间和洗涤方法，以及使用差速消化法提高细胞纯度。本发明能够从小鼠的脂肪组织中分离出高活性、高纯度的脂肪干细胞，为后期对脂肪干细胞进一步的研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN104073466A

公开(公告)日：2014-10-01

申请号：CN201410000495.8

申请日：2014-01-02

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 张运海 ,  魏超 ,  李运生 ,  章孝荣 ,  方富贵 ,  张鹏飞 ,  李侠 ,  姜少帅 ,  韩菲 ,  宋丹丹 ,  刘通

IPC: C12N5/0775 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  G01N15/14

Abstract: 本发明公开了小鼠脂肪干细胞自发转化的鉴定方法，将小鼠脂肪干细胞在体外连续传代，然后包括形态学的变化、增殖速度的激增、异常染色体的出现和比例的增加、DNA含量的降低以及表面分子的变化五个步骤。其中形态学和增殖速度的观察与检测可用于初步的判断小鼠脂肪干细胞是否发生了转化；染色体的核型分析从局部水平上来分析小鼠脂肪干细胞染色体是否异常，而DNA含量的分析则从整体水平上来检测核物质的量变，此二法最能说明小鼠脂肪干细胞的转化与否；小鼠脂肪转化后，同时也引起小鼠脂肪干细胞典型分子的表达异常，包括CD44，CD105和Sca-1的变化，反而言之，后期研究中，也可以通过监测这些表面分子的变化来判断小鼠脂肪干细胞的转化，此法则更为简单、直接与有效。

公开(公告)号：CN103898048A

公开(公告)日：2014-07-02

申请号：CN201410120868.5

申请日：2014-03-27

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 卞雅妮 ,  曹鸿国 ,  章孝荣 ,  张飞 ,  魏超 ,  李运生 ,  刘亚 ,  张运海 ,  方富贵

IPC: C12N5/075

Abstract: 本发明公开了小鼠裸卵的体外成熟培养方法，包括以下步骤：（1）裸卵的体外成熟培养；（2）成熟裸卵的孤雌激活；（3）成熟裸卵的体外受精。本发明能够创造一个人工模拟卵母细胞自然发生成熟的环境，使裸卵在体外能够高效成熟发育，并且裸卵体外培养成熟后具备同正常发育的卵母细胞一样能够体外受精和胚胎发育。实践证实，该体系裸卵体外成熟发育效率高，体系成熟稳定，裸卵体外自然受精后胚胎发育质量高，因此，本发明能够极大地促进裸卵在人类生殖健康和现代家畜遗传育种中的应用和推广。简化了通过裸卵获得囊胚的操作，为裸卵作为卵源投入到实际生产提供了便利。

公开(公告)号：CN102433299B

公开(公告)日：2013-01-23

申请号：CN201110366128.6

申请日：2011-11-17

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 张运海 ,  魏超 ,  刘星 ,  李运生 ,  张宇 ,  陈建文 ,  章孝荣

IPC: C12N5/0775

Abstract: 本发明公开了一种小鼠脂肪干细胞的分离、培养及纯化方法。其步骤包括细胞分离、培养和纯化三个阶段，特别是在分离过程不中断营养的供给，改进了三次换液时间和洗涤方法，以及使用差速消化法提高细胞纯度。本发明能够从小鼠的脂肪组织中分离出高活性、高纯度的脂肪干细胞，为后期对脂肪干细胞进一步的研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN102391987A

公开(公告)日：2012-03-28

申请号：CN201110366111.0

申请日：2011-11-17

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 魏超 ,  张运海 ,  刘星 ,  李运生 ,  章孝荣 ,  陈建文 ,  周娜汝 ,  桂涛 ,  张宇 ,  陶佳 ,  吴蓉花

IPC: C12N5/0775

Abstract: 本发明公开了一种用于分离小鼠脂肪干细胞的消化液。所述消化液的组成成分为10％的胎牛血清，0.09％的胶原酶I，余量为DMEM/F12。本发明的成分简单，来源方便，成本低；能够有效的从小鼠的脂肪组织中分离出脂肪干细胞；能够很好的维持细胞的活性，为细胞的后期培养和进一步的科学研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN102433298A

公开(公告)日：2012-05-02

申请号：CN201110366075.8

申请日：2011-11-17

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 魏超 ,  张运海 ,  张宇 ,  李运生 ,  章孝荣 ,  吴蓉花 ,  周娜汝 ,  刘星 ,  陈建文 ,  陶佳

IPC: C12N5/0775

Abstract: 本发明公开了一种小鼠脂肪干细胞培养液，其组成成分为：胎牛血清20％，青霉素100IU/ml，链霉素100μg/ml，L-谷氨酰胺2mmol/L，碱性成纤维细胞生长因子10ng/ml，维生素C 50μg/ml，DMEM/F12补足到100％。本发明培养液成分简单、成本低；能够有效维持小鼠脂肪干细胞在体外的长期增殖；能够很好的维持脂肪干细胞的生物学特性。