一种猪IL-17胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法

    公开(公告)号:CN114935655B

    公开(公告)日:2024-02-20

    申请号:CN202210686864.8

    申请日:2022-06-16

    摘要: 高特异性和敏感性。本发明提供了一种猪IL‑17胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2;试剂R1包括MOPS、KH2PO4、NaCl、山梨酸钾、EDTA;试剂R2包括MOPS、PEG8000、BSA、NaCl、偶联rpIL‑17A‑IgG的胶乳微球等。本发明还提供了上述猪IL‑17胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒的制备与使用方法。本发明首次利用胶乳增强免疫比浊法来测定猪IL‑17,在成本上可以做到0.7元/样本,大大降低了养殖户检测负担;并且,通过全自动生化(56)对比文件许春;洪建明;杜晶春;向波;徐霞.制备GP73多克隆抗体并建立GP73胶乳增强免疫比浊法.细胞与分子免疫学杂志.2015,(第02期),全文.邓定浩;肖永乐;唐健雪;杨鑫;高荣.真核表达猪白细胞介素17及其生物活性研究.中国生物工程杂志.2018,(第08期),全文.Mehdi Golchin;Saeedeh Shojaeepour;Mostafa Roosta;FatemehMirzabeigi.Sensitivity and specificity ofa latex agglutination test for detectionof calf enterotoxigenic Escherichia coliisolates in comparison withPCR.Comparative clinical pathology.2016,(第3期),全文.郭喜.胶乳增强免疫比浊法试剂盒测定胰岛素的性能评价.首都医药.2014,(第06期),全文.

    一种检测鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法

    公开(公告)号:CN109580941A

    公开(公告)日:2019-04-05

    申请号:CN201811376701.X

    申请日:2018-11-19

    IPC分类号: G01N33/569

    摘要: 本发明公开了一种检测鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法,利用鸭坦布苏病毒全基因序列设计一对引物以扩增NS1基因,构建蛋白表达载体,通过IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达获得重组表达蛋白包涵体,以包涵体经纯化、复性、浓缩后作为包被抗原,建立检测鸭血血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。本发明的抗体为非结构蛋白中的NS1蛋白,检验结果中假阳性少,IFA符合率高,且检验结果重复性好,敏感性强,检测时间快,5小时内基本可以检测出结果。动物试验结果显示抗体在感染鸭坦布苏病毒后出现阳性时间早,持续时间长。

    一种能够稳定表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的BHK-21细胞系及其构建方法

    公开(公告)号:CN109468281A

    公开(公告)日:2019-03-15

    申请号:CN201811376693.9

    申请日:2018-11-19

    摘要: 本发明公开了一种能够稳定表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的BHK-21细胞系建立方法,该鸭坦布苏病毒株保藏在中国典型培养物保藏中心,其保藏名称为鸭黄病毒AH-F10株,保藏编号为:CCTCC V201213;构建方法如下:1)重组质粒pLOV-eGFP-NS1的构建;2)慢病毒样颗粒的制备;3)表达NS1细胞系的构建与筛选;4)NS1基因转录和核酸检测;5)NS1蛋白表达水平的检测。本发明可以获得在细胞外表达的具有生物活性构象的分泌表达的可溶性的鸭坦布苏病毒NS1蛋白。表达NS1细胞系筛选中我们以10μg/mL的嘌呤霉素培养液进行筛选,传代5次后即可检测到NS1基因的表达,第十代NS1细胞系就可以稳定表达,能够稳定表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的BHK-21细胞系方法比传统细胞系方法的时间缩短2/3。