公开(公告)号：CN109580941A

公开(公告)日：2019-04-05

申请号：CN201811376701.X

申请日：2018-11-19

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 王桂军 ,  周祺 ,  徐前明 ,  刘红梅 ,  宋祥军 ,  苏观志 ,  许泽军 ,  顾香雪 ,  黄荣

IPC: G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种检测鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法，利用鸭坦布苏病毒全基因序列设计一对引物以扩增NS1基因，构建蛋白表达载体，通过IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达获得重组表达蛋白包涵体，以包涵体经纯化、复性、浓缩后作为包被抗原，建立检测鸭血血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。本发明的抗体为非结构蛋白中的NS1蛋白，检验结果中假阳性少，IFA符合率高，且检验结果重复性好，敏感性强，检测时间快，5小时内基本可以检测出结果。动物试验结果显示抗体在感染鸭坦布苏病毒后出现阳性时间早，持续时间长。

公开(公告)号：CN109652451A

公开(公告)日：2019-04-19

申请号：CN201811481106.2

申请日：2018-12-05

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 王桂军 ,  刘光清 ,  周晓雅 ,  周祺 ,  邢雪 ,  许泽军 ,  顾香雪 ,  黄荣

IPC: C12N15/867 ,  C12N5/10 ,  C12N15/54 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了1.一种绵羊羊睾丸细胞永生化细胞系的构建方法，大致步骤如下：1)重组质粒构建；2)慢病毒样颗粒的制备；3)hTERT基因的细胞系构建和筛选；4)hTERT基因表达及其mRNA转录水平检测；5)hETRT蛋白表达检测。本发明构建方法有利于改善目前细胞系匮乏的研究现状，有利于资源的推广使用。绵羊羊睾丸永生化细胞系的建立减少了实验动物的使用量，提供了一种更为稳定的实验研究对象。

公开(公告)号：CN109468281A

公开(公告)日：2019-03-15

申请号：CN201811376693.9

申请日：2018-11-19

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 王桂军 ,  周祺 ,  徐前明 ,  刘红梅 ,  宋祥军 ,  殷冬冬 ,  顾香雪 ,  苏观志 ,  许泽军 ,  黄荣

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/40 ,  C12N15/867 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了一种能够稳定表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的BHK-21细胞系建立方法，该鸭坦布苏病毒株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏名称为鸭黄病毒AH-F10株，保藏编号为：CCTCC V201213；构建方法如下：1)重组质粒pLOV-eGFP-NS1的构建；2)慢病毒样颗粒的制备；3)表达NS1细胞系的构建与筛选；4)NS1基因转录和核酸检测；5)NS1蛋白表达水平的检测。本发明可以获得在细胞外表达的具有生物活性构象的分泌表达的可溶性的鸭坦布苏病毒NS1蛋白。表达NS1细胞系筛选中我们以10μg/mL的嘌呤霉素培养液进行筛选，传代5次后即可检测到NS1基因的表达，第十代NS1细胞系就可以稳定表达，能够稳定表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的BHK-21细胞系方法比传统细胞系方法的时间缩短2/3。